晚期非小细胞肺癌靶向治疗中循环DNA检测EGFR基因突变应用价值

2014-03-23 05:44陈祥娜
中外医疗 2014年32期
关键词:外显子基因突变靶向

陈祥娜

福建医科大学附属第一医院病理科,福建福州 350003

晚期非小细胞肺癌靶向治疗中循环DNA检测EGFR基因突变应用价值

陈祥娜

福建医科大学附属第一医院病理科,福建福州 350003

目的结合该院在非小细胞癌(NSCLC)靶向治疗中,循环DNA检测EGFR基因突变的相关情况,对其临床价值进行评估。方法 从该院中选取接受EGDR TIKs治疗的54例患者,分别对其进行血清采集和组织采集,并制作成标本,对DNA进行提取检测。结果 女性出现基因变异的情况高于男性,差异有统计学意义(P<0.05);组织类型、临床分析以及EGFR TIKs无基因突变误差,差异无统计学意义(P>0.05);血清样本测定EGDR基因突变,特异性为97.30%;灵敏度为41.18%;所有患者的客观缓解率为27.78%,疾病控制率为48.15%;EGFR TKIs对晚期患者的客观缓解率为50.00%,对野生型的患者则只有16.67%。结论在EGDR基因突变的测定中,血清循环DNA具有一定的价值,且可有效优化晚期肺癌靶向治疗患者的临床效果。

NSCLC;循环DNA;EGDR基因突变

靶向治疗的出现极大的改善了晚期非小细胞肺癌患者的预后。肺癌组织的EGFR基因突变可以有效预测靶向药物EGFRTKI的临床疗效。目前临床上多采用手术或穿刺标本来检测EGFR基因突变。但这种有创操作在一定程度上限制了EGFR基因突变的检测。研究发现肺癌患者循环血中游离DNA含量显著高于正常人,并与原发肿瘤组织具有高度的遗传一致性[1-2]。鉴于此,该院2011年1月—2014年6月期间在NSCLC靶向治疗中,运用血清循环DNA检测EGFR基因突变,对其临床价值进行评估。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

从该院2011年 1月—2014年6月所接诊的 NSCLC患者中,选取54例采用小分子表皮生长因子受体细胞内酪氨酸激酶抑制剂(EGDR TIKs)治疗的患者;其中女性23例,男性31例,患者平均年龄为(65.41±1.24)岁;其中19例为非腺癌,35例为腺癌;患者中26例为Ⅲb期,28例为Ⅳ期;在进行采样时,24例为曾经或者正在接受EGDR TIKs治疗,30例为首次接受EGDR TIKs临床治疗。在获得患者同意之后,对其进行血清样本的采集,并同时进行石蜡组织标本的制作,所有患者均满足以下几点:①患者年龄在20岁或以上;②经细胞学或者病理学证实,患者为Ⅲb期或Ⅳ期,其中包括了初次治疗后复发或者未接受过化疗治疗的患者;③经ECOG功能状态评分,测评结果为0~2分,具有能够测量的病灶;④具有较高的依从性,并且能够及时到院或者电话接受随访;⑤无重要脏器功能障碍。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 ①血清样本采集:提前一日叮嘱患者清晨空腹接受静脉血采集,每例患者采集5 mL,于黄色促凝管内室温放置4 h后,离心分离血清,-80℃下保存待用;②石蜡组织样本采集:选取肺穿标本或者手术标本肿瘤部分,切取10张6 μm的蜡片,置于Eppendorf管内编号保存备用。

1.2.2 DNA的提取 ①血清样本DNA的提取:该研究选取Qiagen公司试剂盒QIAamp DNA Blood Mini Kit,并按照说明书进行血清循环DNA的提取;②石蜡组织样本DNA的提取:本研究选取QIAamp DNA FFPE Tissue Kit,并按照说明书进行血清循环DNA的提取。

1.2.3 EGFR突变检测 该研究使用ARMS(amplified refractory mutation system)法进行EGFR突变检测。

1.3 EGFR TIKs的治疗方法

为患者提供EGFR TIKs口服治疗,每日服用尼洛替尼150 mg,在进食前1 h或者进食后2 h服用;或者在空腹状态下,与食物共同服用的情况下,服用250 mg吉非替尼。直到患者出现不可耐受的药物毒副作用或者肿瘤疾病进展;在治疗前1周对患者的身体状态进行全面评估。

2 结果

2.1 血清及组织标本中

EGFR基因突变型患者的临床分布特征 女性出现基因变异的情况高于男性,差异有统计学意义(P<0.05);组织类型、临床分析以及EGFR TIKs无基因突变误差,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2 血清EGFR基因突变检测的真实性和可靠性评价

通过血清样本测定EGFR基因突变,其特异性达到了97.30%;灵敏度则达到了41.18%。见表2。

2.3 EGFR基因突变与EGFR TKIs疗效关系

所有患者的客观缓解率为27.78%,疾病控制率为48.15%;其中EGFR TKIs对晚期患者的客观缓解率为50.00%,而对野生型的患者则只有16.67%。见表3。

3 讨论

人类表皮生长因子受体(EGFR)是一种受体酪氨酸激酶,正常情况表达于上皮细胞表面,而在一些恶性肿瘤中常过度表达。EGFR基因突变包括基因扩增和点突变,主要集中在18、19、20、21号外显子上,第19外显子的缺失和第21外显子的L858R点突变,占到89%~95.5%,与肿瘤对TKIs的敏感度有重要关系。60%~85%的NSCLC细胞存在EGFR过度表达/突变,这部分患者接受肿瘤分子靶向治疗(EGFR抑制剂)的临床疗效优于常规化疗。临床研究表明,肺癌细胞中有EGFR酪氨酸激酶基因编码区外显子19缺失或外显子21突变的患者,靶向药物易瑞沙的有效率高达80%以上[3]。该研究中主要针对19和21外显子的突变型检测,其中19外显子突变为55.56%(10/18),21外显子突变为44.44%(8/18);所检测出的基因突变型(19DelK746-A750、19DelK745-E749、19DelK745-A750;21 L858R、21 L861Q)与当前研究显示的已检测出的基因突变类型及突变率相符。

表1 EGFR基因突变型的单因素分析

表2 血清EGFR基因突变检测筛查试验分析

表3 EGFR基因突变与EGFR TKIs疗效关系

一些临床实验结果进一步证实,通过筛查EGFR基因突变对肺癌初治患者进行吉非替尼治疗,中位无进展生存时间达到12个月,中位生存时间达到20个月[4]。因而针对EGFR突变进行选择性靶向治疗,患者可以显著获益[5]。

2013年5月,美国病理学家协会(CAP)、国际肺癌研究协会(IASLC)和美国分子病理学会(AMP)三大权威机构发布了一项基于循证医学证据的肺癌分子检测指南,建议所有晚期肺腺癌患者不论性别、种族、是否吸烟或伴有其他临床危险因素,均应接受EGFR突变和ALK融合基因检测,以判断是否适于接受酪氨酸激酶抑制剂治疗[6]。但是对于晚期肺癌患者,其肿瘤组织标本往往难以获得,或不能取得足够适合检测的标本。这就需要一种能方便取得EGFR突变信息的检测方法[7-8]。

在该次研究中,对血清循环DNA与肿瘤组织DNA的突变检测结果进行对比,结果表明,血清游离DNA检测到的突变类型与组织检测到的类型无差异,依据血清EGFR检测结果进行选择性靶向治疗,可以使患者显著受益。由于血液采集方便,患者易于接受,血清EGFR检测技术可以作为肿瘤组织EGFR检测的补充与替代,值得临床推广应用。但是,由于检测还具有一定的局限性,故表现出相应的假阴性率,故在实际应用中,还需要与其他检测手段同时使用。

[1]R M Bremnes,R Sirera,C Camps.Circulating tumour-derived DNA and RNA markers in blood:a tool for early detection,diagnostics,and follow-up[J].Lung Cancer,2005,49(1):1-12.

[2]Ciuleanu T,Stelmakh L,Cicenas S,et al.Efficacy and safety of erlotinib versus chemotherapy insecond-line treatment of patients with advanced, non-small-cell lung cancer with poor prognosis(TITAN):arandomised multicentre,open-label,phase 3 study[J].Lancet Oncol,2012,13(3): 300-308.

[3]车德海,田强,曹京燕,等.DNA直接测序技术检测EGFR基因突变指导厄洛替尼一线治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察[J].现代肿瘤医学,2011,19(10):2009-2013.

[4]黄进肃,董强刚,许凯黎,等.血清循环DNA的EGFR基因突变于肺癌选择性靶向治疗研究[J].肿瘤,2007,27(12):968-972.

[5]Brevet M,Johnson ML,Azzoli CG,et al.Detection of EGFR mutations in plasma DNA from lungcancer patients by mass spectrometry genotyping is predictive of tumor EGFR status and response to EGFRinhibitors[J]. Lung Cancer,2011,73(1):96-102.

[6]刘宏杰,叶斌,程静,等.肺癌复发转移患者外周血循环DNA的定量分析[J].中国临床药理学与治疗学,2011,16(2):209-213.

[7]刘丽荣,张小蕾.不同DNA抽提方法在乳腺癌血清循环DNA提取中的效果比较[J].吉林医学,2010,31(16):2368-2369.

[8]王书航,王洁.优化非小细胞肺癌EGFR-TKI治疗[M].北京:中国协和医科大学出版社,2012:40-41.

R73

A

1674-0742(2014)11(b)-0053-02

2014-08-16)

陈祥娜(1985.1-),女,山东临沂人,研究生,技师,研究方向:分子病理。

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