何海红 何雅娟
(中国计量科学研究院,北京 100029)
液相色谱仪用荧光检测器属于选择性检测器,其灵敏度在液相色谱仪所有常用检测器中是最高的,主要用来测量能够产生荧光的样品,如水中的多环芳烃,也可以用来检测本身不产生荧光但经过衍生化后可产生荧光的物质,如某些酚类或氨基酸类物质。
对于荧光检测器的检定,按JJG 705—2002液相色谱仪检定规程的要求,需采用硫酸奎宁样品。但是,在实际检定中,经常出现高浓度硫酸奎宁样品峰形分叉或变形的情况,使检定过程很困难。鉴于此,在新修订的JJG 705—2014液相色谱仪检定规程(于2014年8月14日实施)中,对荧光检测器的检定,样品改用萘-甲醇溶液,避免了以上的情况发生,使得检定可以顺利进行。
本文以Agilent1100型荧光检测器的检定例,介绍如何按照新检定规程要求,对荧光检测器进行检定,以供广大检定员参考,方便大家的日常检定工作。
配置荧光检测器的Agilent 1100液相色谱系统。
甲醇:色谱纯,merk公司。
萘-甲醇:标物编号GBW(E)130167,1.00×10-4g/mL,U=4%,k=2;标物编号GBW(E)130168,1.00×10-7g/mL,U=4%,k=2。
移液器:Eppendorf,1mL。
容量瓶:10mL,A级别。
色谱柱:AgilentZORBAX Eclipse XDB C-18(150mm×4.6mm,3.5μm);流动相:甲醇;流速:1.0mL/min;激发波长Ex=290nm,发射波长Em=330nm。
1)打开仪器电源,安装色谱柱与放好流动相,然后,打开检测器氙灯灯与泵进行预热,按照1.2的条件对仪器进行设定,等30min后仪器达到稳定状态;
2)用标物编号GBW(E)130167萘-甲醇溶液稀释10倍,得到1.00×10-5g/mL的萘-甲醇溶液,然后,用此溶液进行定性定量重复性检定,连续进样7次,每次进样10μL,取后面6次作为定性定量重复性数据,记录每个数据中萘-甲醇的保留时间和峰面积,分别计算保留时间和峰面积的相对标准偏差;
3)用标物编号GBW(E)130168,1.00×10-7g/mL萘-甲醇溶液进行最小检测浓度检定,连续进样3次,每次进样20μL,记录每个数据中萘-甲醇的峰高,取3个峰高值的平均值作为最终峰高值。
4)按照1.2色谱条件,不进样,采集30min空白基线,记录色谱图。
1)萘-甲醇溶液在Agilent 1100荧光检测器上的定性定量重复性色谱图见图1,定性定量重复性测定数据见表1。
图1 萘-甲醇溶液定性定量重复性色谱图
表1 萘-甲醇溶液定性定量重复性数据
注:LU是1100荧光检测器纵坐标单位
2)萘-甲醇溶液在Agilent 1100荧光检测器上的最小检测浓度数据色谱图见图2,最小检测浓度峰高数据见表2,最小检测浓度最终结果见表3。计算公式见式(1):
图2 萘-甲醇溶液最小检测浓度色谱图
表2 萘-甲醇溶液最小检测浓度峰高数据
表3 萘-甲醇溶液最小检测浓度数据
(1)
式中,cL为最小检测浓度,g/mL;Nd为基线噪声峰高;c为标准溶液浓度,g/mL;V为进样体积,μL;H为标准物质峰高。
3)Agilent1100荧光检测器上的噪音数据色谱图见图3,漂移数据色谱图见图4,噪音、漂移数据见表4。
图3 1100荧光检测器噪音色谱图
图4 1100荧光检测器漂移色谱图
表4 1100荧光检测器噪音、漂移数据
4)Agilent 1100荧光检测器检定结果汇总见表5。
表5 1100荧光检测器检定结果汇总
从以上的数据可以看出,在日常液相色谱仪的检定工作中,按照JJG 705—2014 液相色谱仪检定规程的要求进行设定,可以顺利的进行液相色谱仪用荧光检测器的检定工作。这次规程修订将流动相改成100%甲醇,同时提高了串联检测器的检定效率。规程的完善需要广大检定员共同的努力,在实际工作中会碰到各种问题,希望大家能多交流多讨论,让我们的检定规程更加科学和完善。
[1]JJG 705—2014 液相色谱仪检定规程.北京:中国质检出版社,2014
[2]JJG 705—2002 液相色谱仪检定规程.北京:中国计量出版社,2002
[3]汪正范.色谱定性与定量.北京:化学工业出版社,2000
[4]张庆和.高效液相色谱实用手册.北京:化学工业出版社,2008
[5]于世林.高效液相色谱方法及应用.北京:化学工业出版社,2000