烟草黑胫病菌的分离及培养性状研究

杨顺强+杨焕文+吴银梅+周杰+赵琴

摘要：烟草黑胫病是烟草（Nicotiana tabacum）的一种毁灭性病害。试验采集云南省昭通市的烟草黑胫病病株，采用组织分离法对病原菌进行分离、纯化，对其培养性状进行研究。结果表明，燕麦培养基适合烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica）的培养，菌丝生长旺盛；烟草黑胫病菌菌丝粗细不均匀，无隔膜，具有膨大体；孢子囊顶生，具脱落性，具1个或2个乳突。这些培养性状与前人研究结果相似，表明烟草黑胫病菌的培养性状较为稳定。

关键词：烟草（Nicotiana tabacum）；烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica）；培养性状

中图分类号：S435.72 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）01-0081-02

Isolation and Cultural Characteristics of Phytophthora Nicotianae，

Pathogen of Tobacco Blank Shank

YANG Shun-qiang1，2，YANG Huan-wen3，WU Yin-mei1，ZHOU Jie1，ZHAO Qin1

（1. Department of Chemistry， Zhaotong College， Zhaotong 657000，Yunnan， China； 2. Yunnan Agricultural University，a.College of Agronomy and Biotechnology； b.College of tobacco， Kunming 650201，China）

Abstract： Tobacco Black Shank is a destructive disease of tobacco. The pathogen were obtained from diseased tobacco stem tissues collected in Zhaotong city， Yunnan province. Cultural characteristics of the isolates were studied by means of tissue isolation. The results showed that Oatmeal medium was suitable for Tobacco Black Shank. The mycelium were diverse in thick and number， hyphal swellings and without membrane. The sporangium was acrogenous and deciduous had one or two mastoid. The characteristics similar with previous researches indicated that the characteristics of the pathogen was stable.

Key words： Nicotiana tabacum； Phytophthora parasitica； Culture characteristics

收稿日期：2012-11-30

基金项目：保山烟区特色品种烟叶生产优化布局及综合技术研究项目（KX140906）

作者简介：杨顺强（1980-），男，四川雷波人，讲师，在读博士研究生，主要从事植物资源开发与利用研究，（电话）15969027660（电子信箱）

ysq6666@163.com。

烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica）是一种在烟草（Nicotiana tabacum）上分布广泛、为害严重的重要病害之一。目前除东北烟区零星发生外，全国其他烟区均普遍发生。每年因该病给烟草生产造成极大的损失，其危害程度仅次于烟草病毒病[1，2]。烟草黑胫病可以危害烤烟、晾烟、晒烟、香料烟、白肋烟等所有栽培烟草，发病后，往往是成片凋萎，整株死亡，且发病率高，破坏性极强。在自然条件下，寄主除烟草外，还可侵染草莓、辣椒、茄子、黄瓜等[3]。马国胜等[4]对不同地理来源的烟草黑胫病菌培养性状进行了研究。苏振刚等[5]研究了烟草黑胫病菌在不同培养条件下的培养特性。昭通市是云南省的主要烟区之一，也是烟草黑胫病危害较为严重的烟区，但针对此区烟草黑胫病菌培养特性的研究鲜有报道。为此，试验从昭通主要烤烟种植区的昭阳区布嘎乡迎水村烤烟种植大田中选择发病的烟草黑胫病烟株，研究其分离方法和培养性状，以期进一步了解烟草黑胫病菌的分离、培养特性，为烟草黑胫病的相关研究和综合防治提供参考。

1 材料和方法

1.1 病株的采集

2012年9月从昭通市昭阳区布嘎乡迎水村烤烟田中采集烟草黑胫病典型病株，去掉叶片，用自来水冲洗干净，带回实验室，备用。

1.2 培养基的配制

燕麦培养基：燕麦片30 g，琼脂18 g，去离子水1 000 mL。

1.3 菌株的分离

参照马国胜等[4]的方法，将带回实验室的烤烟病株茎秆剖开，从碟片状的病健交界处取3 mm×3 mm的髓部组织接种于燕麦培养基上，在气候箱中，25 ℃黑暗培养2～3 d后，根据菌落形态、颜色及菌丝形态进行反复纯化培养。

1.4 菌丝、孢子囊及有性器官的观察

参照文献[5，6]的方法，将纯化培养已完成的烟草黑胫病菌丝挑取少许均匀分散于滴有席尔固定液的载玻片上，在10×40倍显微镜下观察烟草黑胫病菌丝、孢子囊、孢囊梗及有性器官的形态与大小，重复30次。

2 结果与分析

2.1 菌落及菌丝形态特征

分离的烟草黑胫病菌株在燕麦培养基上气生菌丝生长旺盛，呈白色絮状，菌落质地均匀。在显微镜下镜检发现菌丝粗细不均匀，菌丝宽度2.67～14.52 μm，平均宽度5.48 μm，无隔膜，有分支，局部有菌丝膨大体，在膨大体上常有若干放射状菌丝，其内部近乎中空（图1）。

2.2 孢子及孢子囊形态特征

孢子椭圆形或圆形，具有游动性；孢子囊顶生，具脱落性，呈肾形、椭圆形或不规则形，成熟脱落后孢囊柄不明显，大小通常为24.83～112.06 μm×16.35～52.46 μm，平均33.18 μm×47.05 μm；孢子囊长宽比1.24～1.53，平均1.44；孢子囊多为单乳突，少数具2个乳突，乳突有的明显，有的模糊；部分孢子囊上有丝状附着物；孢子囊内部含有颗粒状的游动孢子，发育成熟后，在适当条件下孢子囊破裂，释放游动孢子；卵孢子呈球形，壁光滑，藏卵器较小，呈半球形，壁光滑，基部呈柱状（图2）。

3 小结与讨论

对烟草黑胫病病菌培养性状的研究已有较多报道[1，3-5]，近年来，随着环境条件、耕作制度、栽培管理等条件的变化，烟草黑胫病菌的培养特性是否也发生了变化。本研究表明，烟草黑胫病菌在燕麦培养基上生长良好，气生菌丝生长旺盛，菌丝质地均匀；菌丝粗细不均匀，有分支，具膨大体，无隔膜；孢子大都呈球形；孢子囊顶生，形状不一，具有乳突等，这些结果与马国胜等[4]、苏振刚等[5]的研究结果一致。表明烟草黑胫病菌的这些培养特性比较稳定，受环境变化影响不大，地区间差异较小，这可能与烟草黑胫病菌是通过异宗配合有关[4，5]。

燕麦培养基较适合于烟草黑胫病菌的生长[7-9]。李梅云等[10]、周志成[11]的研究表明，在燕麦培养基上的烟草黑胫病菌生长速度快，产孢量多。本研究表明，烟草黑胫病菌的培养可通过采集田间病株，切取髓部组织接种到平板燕麦培养基上进行分离后，再采用燕麦斜面培养基进行纯化培养，可取得较好的分离培养效果。

参考文献：

[1] 马国胜，高智谋，陈 娟.烟草黑胫病研究进展[J].烟草科技，2001（9）：44-48.

[2] 孙计平，李雪君，朱景伟.烟草黑胫病及其抗性鉴定方法研究进展[J].河南农业科学，2011，40（8）：36-39.

[3] 马国胜，高智谋，陈 娟. 烟草黑胫病研究进展[J].烟草科技，2003（4）：35-42.

[4] 马国胜，高智谋.烟草黑胫病菌培养性状的研究[J].中国农业科学，2007，40（3）：512-517.

[5] 苏振刚，王 静，周 佳，等.烟草黑胫病菌0号生理小种不同条件下培养特性的研究[J].中国烟草科学，2011，32（1）：56-60.

[6] 郑小波.疫霉菌及其研究技术[M].北京：中国农业出版社，1997.

[7] GAO Z M， ZHENG X B， LU J Y. Effect of culture media on antheridial configuration in Phytophthora boehmeriae[J]. Canadian Journal of Botany，1998，76：2177-2179.

[8] HO H H， ANN P J， CHANG T T. The genus Phytophthora in Taiwan[M].Taipei： Institute of Botany Academy Press，1995.

[9] 李梅云.不同培养基对烟草黑胫病菌生长的影响[J].植物保护科学，2006，22（7）：434-436.

[10] 李梅云，卢秀萍，李永平. 烟草黑胫病菌培养特性的研究[J].植物保护，2006，32（6）：81-84.

[11] 周志成.烟草黑胫病菌产孢性状的研究[J].湖南农业科学，2005（2）：60-62.

（责任编辑 童志婷）

2 结果与分析

2.1 菌落及菌丝形态特征

分离的烟草黑胫病菌株在燕麦培养基上气生菌丝生长旺盛，呈白色絮状，菌落质地均匀。在显微镜下镜检发现菌丝粗细不均匀，菌丝宽度2.67～14.52 μm，平均宽度5.48 μm，无隔膜，有分支，局部有菌丝膨大体，在膨大体上常有若干放射状菌丝，其内部近乎中空（图1）。

2.2 孢子及孢子囊形态特征

孢子椭圆形或圆形，具有游动性；孢子囊顶生，具脱落性，呈肾形、椭圆形或不规则形，成熟脱落后孢囊柄不明显，大小通常为24.83～112.06 μm×16.35～52.46 μm，平均33.18 μm×47.05 μm；孢子囊长宽比1.24～1.53，平均1.44；孢子囊多为单乳突，少数具2个乳突，乳突有的明显，有的模糊；部分孢子囊上有丝状附着物；孢子囊内部含有颗粒状的游动孢子，发育成熟后，在适当条件下孢子囊破裂，释放游动孢子；卵孢子呈球形，壁光滑，藏卵器较小，呈半球形，壁光滑，基部呈柱状（图2）。

3 小结与讨论

对烟草黑胫病病菌培养性状的研究已有较多报道[1，3-5]，近年来，随着环境条件、耕作制度、栽培管理等条件的变化，烟草黑胫病菌的培养特性是否也发生了变化。本研究表明，烟草黑胫病菌在燕麦培养基上生长良好，气生菌丝生长旺盛，菌丝质地均匀；菌丝粗细不均匀，有分支，具膨大体，无隔膜；孢子大都呈球形；孢子囊顶生，形状不一，具有乳突等，这些结果与马国胜等[4]、苏振刚等[5]的研究结果一致。表明烟草黑胫病菌的这些培养特性比较稳定，受环境变化影响不大，地区间差异较小，这可能与烟草黑胫病菌是通过异宗配合有关[4，5]。

燕麦培养基较适合于烟草黑胫病菌的生长[7-9]。李梅云等[10]、周志成[11]的研究表明，在燕麦培养基上的烟草黑胫病菌生长速度快，产孢量多。本研究表明，烟草黑胫病菌的培养可通过采集田间病株，切取髓部组织接种到平板燕麦培养基上进行分离后，再采用燕麦斜面培养基进行纯化培养，可取得较好的分离培养效果。

参考文献：

[1] 马国胜，高智谋，陈 娟.烟草黑胫病研究进展[J].烟草科技，2001（9）：44-48.

[2] 孙计平，李雪君，朱景伟.烟草黑胫病及其抗性鉴定方法研究进展[J].河南农业科学，2011，40（8）：36-39.

[3] 马国胜，高智谋，陈 娟. 烟草黑胫病研究进展[J].烟草科技，2003（4）：35-42.

[4] 马国胜，高智谋.烟草黑胫病菌培养性状的研究[J].中国农业科学，2007，40（3）：512-517.

[5] 苏振刚，王 静，周 佳，等.烟草黑胫病菌0号生理小种不同条件下培养特性的研究[J].中国烟草科学，2011，32（1）：56-60.

[6] 郑小波.疫霉菌及其研究技术[M].北京：中国农业出版社，1997.

[7] GAO Z M， ZHENG X B， LU J Y. Effect of culture media on antheridial configuration in Phytophthora boehmeriae[J]. Canadian Journal of Botany，1998，76：2177-2179.

[8] HO H H， ANN P J， CHANG T T. The genus Phytophthora in Taiwan[M].Taipei： Institute of Botany Academy Press，1995.

[9] 李梅云.不同培养基对烟草黑胫病菌生长的影响[J].植物保护科学，2006，22（7）：434-436.

[10] 李梅云，卢秀萍，李永平. 烟草黑胫病菌培养特性的研究[J].植物保护，2006，32（6）：81-84.

[11] 周志成.烟草黑胫病菌产孢性状的研究[J].湖南农业科学，2005（2）：60-62.

（责任编辑 童志婷）

2 结果与分析

2.1 菌落及菌丝形态特征

分离的烟草黑胫病菌株在燕麦培养基上气生菌丝生长旺盛，呈白色絮状，菌落质地均匀。在显微镜下镜检发现菌丝粗细不均匀，菌丝宽度2.67～14.52 μm，平均宽度5.48 μm，无隔膜，有分支，局部有菌丝膨大体，在膨大体上常有若干放射状菌丝，其内部近乎中空（图1）。

2.2 孢子及孢子囊形态特征

孢子椭圆形或圆形，具有游动性；孢子囊顶生，具脱落性，呈肾形、椭圆形或不规则形，成熟脱落后孢囊柄不明显，大小通常为24.83～112.06 μm×16.35～52.46 μm，平均33.18 μm×47.05 μm；孢子囊长宽比1.24～1.53，平均1.44；孢子囊多为单乳突，少数具2个乳突，乳突有的明显，有的模糊；部分孢子囊上有丝状附着物；孢子囊内部含有颗粒状的游动孢子，发育成熟后，在适当条件下孢子囊破裂，释放游动孢子；卵孢子呈球形，壁光滑，藏卵器较小，呈半球形，壁光滑，基部呈柱状（图2）。

3 小结与讨论

对烟草黑胫病病菌培养性状的研究已有较多报道[1，3-5]，近年来，随着环境条件、耕作制度、栽培管理等条件的变化，烟草黑胫病菌的培养特性是否也发生了变化。本研究表明，烟草黑胫病菌在燕麦培养基上生长良好，气生菌丝生长旺盛，菌丝质地均匀；菌丝粗细不均匀，有分支，具膨大体，无隔膜；孢子大都呈球形；孢子囊顶生，形状不一，具有乳突等，这些结果与马国胜等[4]、苏振刚等[5]的研究结果一致。表明烟草黑胫病菌的这些培养特性比较稳定，受环境变化影响不大，地区间差异较小，这可能与烟草黑胫病菌是通过异宗配合有关[4，5]。

燕麦培养基较适合于烟草黑胫病菌的生长[7-9]。李梅云等[10]、周志成[11]的研究表明，在燕麦培养基上的烟草黑胫病菌生长速度快，产孢量多。本研究表明，烟草黑胫病菌的培养可通过采集田间病株，切取髓部组织接种到平板燕麦培养基上进行分离后，再采用燕麦斜面培养基进行纯化培养，可取得较好的分离培养效果。

参考文献：

[1] 马国胜，高智谋，陈 娟.烟草黑胫病研究进展[J].烟草科技，2001（9）：44-48.

[2] 孙计平，李雪君，朱景伟.烟草黑胫病及其抗性鉴定方法研究进展[J].河南农业科学，2011，40（8）：36-39.

[3] 马国胜，高智谋，陈 娟. 烟草黑胫病研究进展[J].烟草科技，2003（4）：35-42.

[4] 马国胜，高智谋.烟草黑胫病菌培养性状的研究[J].中国农业科学，2007，40（3）：512-517.

[5] 苏振刚，王 静，周 佳，等.烟草黑胫病菌0号生理小种不同条件下培养特性的研究[J].中国烟草科学，2011，32（1）：56-60.

[6] 郑小波.疫霉菌及其研究技术[M].北京：中国农业出版社，1997.

[7] GAO Z M， ZHENG X B， LU J Y. Effect of culture media on antheridial configuration in Phytophthora boehmeriae[J]. Canadian Journal of Botany，1998，76：2177-2179.

[8] HO H H， ANN P J， CHANG T T. The genus Phytophthora in Taiwan[M].Taipei： Institute of Botany Academy Press，1995.

[9] 李梅云.不同培养基对烟草黑胫病菌生长的影响[J].植物保护科学，2006，22（7）：434-436.

[10] 李梅云，卢秀萍，李永平. 烟草黑胫病菌培养特性的研究[J].植物保护，2006，32（6）：81-84.

[11] 周志成.烟草黑胫病菌产孢性状的研究[J].湖南农业科学，2005（2）：60-62.

（责任编辑 童志婷）