五种深海鱼提取蛋白的SDS-PAGE分析

刘顺湖，王瑞韬

（济宁学院生命科学与工程系，山东 曲阜 273155)

五种深海鱼提取蛋白的SDS-PAGE分析

刘顺湖，王瑞韬*

（济宁学院生命科学与工程系，山东 曲阜 273155)

为了给深海鱼类提取蛋白质的深加工提供参考，以三文鱼、狭鳕、比目鱼、小黄鱼和带鱼五种深海鱼为试验材料，采用酸碱法提取鱼肉中蛋白质，通过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳）分析，研究了提取蛋白质的亚基构成及其相对含量．结果表明，（1）五种鱼的提取蛋白质电泳图谱差异较大，分别由不同数量和不同分子量的亚基构成．三文鱼、狭鳕、比目鱼、黄鱼和带鱼的亚基数量分别为14、13、13、14和12个；（2）五种鱼的提取蛋白质的亚基相对平均含量变异范围为7．15～8．35%，变异系数变异范围为38．15～78．63%．亚基相对含量大于10%的较大亚基的数量和分子量因鱼的种类而异．五种鱼的提取蛋白质亚基数量、分子量和相对含量均存在差异，说明其蛋白质构成不同，因而可能有不同的营养价值．

深海鱼；提取蛋白质；SDS-PAGE；亚基相对含量

中国海洋鱼类有1700多种，经济鱼类300多种，常见而产量较高的经济鱼类约70多种[1]，分布于渤海、黄海、东海、南海等海域.其中，深海鱼类是对水深超过200米的鱼类的总称，深海鱼大多自然生长，深海污染少，生长时期长，具有很高营养价值[2,3].崔芳玲[4]对三文鱼、狭鳕、比目鱼、小黄鱼和带鱼五种深海鱼进行蛋白质含量的比较研究，发现比目鱼中蛋白质含量高于其它四种鱼类.王可玲[5]等对真鲷、黑鲷、牙鲆、鲈和小黄鱼这五种鱼类进行电泳分析，确定同工酶表达的组织特性.但对于三文鱼、狭鳕、比目鱼、小黄鱼和带鱼五种深海鱼提取蛋白质的亚基研究尚未见报道.鉴于此，本研究通过SDS-PAGE方法分析这五种深海鱼提取蛋白质的亚基构成及其相对含量，为深海鱼类提取蛋白质的深加工提供参考.

1 材料与方法

1.1 试验材料与试剂

1.1.1 试验材料

试验材料为三文鱼、狭鳕、比目鱼、小黄鱼和带鱼等五种深海鱼，在青岛团岛农贸市场购得.

1.1.2 试验试剂与仪器

试验试剂与仪器由济宁学院生命科学与工程系生命科学实验中心提供.不连续体系SDS-PAGE有关试剂的配制,电泳贮存液的配制参照参考生物化学实验的方法[6].试验所用Marker为低分子量蛋白质Marker（14.4kDa-97.4kDa），购买于北京索莱宝科技有限公司.

1.2 试验方法

1.2.1 鱼蛋白的提取方法

参照陈申如等人试验[7,8]，利用酸碱法提取鱼肉蛋白，试验于2013年4月在济宁学院南四湖湿地生物资源研究所进行，平均室温15-20℃.其中蛋白质提取的流程如下：

（1）用分析天平准确称取4g鱼肉放于研钵中.

（2）将研钵中加入1.0mol/L的盐酸 2mL，研

碎鱼肉并转移至烧杯中.按料水比1∶9(M∶V, g/ml)的比例加入蒸馏水.

（3）用1.0mol/LNaOH调节PH到2.39，将蛋白液转入离心管中.

（4）将上述离心管振荡器中振荡1.5h,达到时间后置于离心机中离心(转速为4500 r/min),时间15min,待离心完毕,将上清液转移到另一只同样的离心管中.

（5）取上清液，再次置于4℃离心机中离心(转速为4500 r/min),时间15min.再次得到上清液，即为待测鱼蛋白.

1.2.2 鱼蛋白亚基分析

将脱色后的电泳胶带倒去脱色液，放置在Alpha imager仪器下通过连接电脑进行拍照取样.再用Quantity one软件进行分析.

1.2.3 数据分析

利用Quantity one软件[9]对电泳图片进行分析整理数据，用Excel软件进行描述性统计分析，进行平均值和变异系数的计算.变异系数的计算公式为：

2 试验结果分析

2.1 五种鱼提取蛋白的SDS-PAGE电泳图谱

五种鱼提取蛋白质的电泳图谱见图1，蛋白质亚基构成见表1.

图1 五种鱼提取蛋白质电泳图谱

表1 五种鱼提取蛋白质亚基及其分子量（KDa)

S366.6761.5178.9078.3573.55 S443.8055.1064.4068.0962.65 S540.2841.8948.4560.3940.28 S636.9938.7340.0150.2633.97 S733.7531.8234.2041.3425.69 S825.1223.5128.6934.8820.89 S922.2421.8723.5129.3316.62 S1018.8519.7319.2824.3015.87 S1116.1519.1717.0017.0014.07 S1214.6516.7115.8715.6012.48 S1313.1414.6512.6213.91-S1412.58--10.88-

由图1和表1可见，五种鱼提取蛋白的电泳图谱存在较大差异.其中，三文鱼有14个亚基，亚基的分子量变异范围为12.58～92.08KDa；狭鳕有13个亚基，亚基的分子量变异范围为14.65～96.72KDa；比目鱼有13个亚基，亚基的分子量变异范围为12.62～99.47KDa；黄鱼有14个亚基，亚基的分子量变异范围为10.88～100.88KDa；带鱼有12个亚基，亚基的分子量变异范围为12.48～99.47KDa.由此推断，五种鱼的蛋白质种类不同，其营养价值可能存在差异.

2.2 五种鱼提取蛋白的亚基相对含量

表2 五种鱼提取蛋白质亚基的相对含量(%)

由表2可见，五种鱼提取蛋白质亚基的平均相对含量差异较小，变异范围为7.15～8.33%，其中，带鱼的提取蛋白质亚基平均相对含量最高（8.33%），三文鱼和黄鱼的最低（均为7.15%）；但变异系数差异较大，变异范围为38.15～78.63%，其中，带鱼的最低（38.15%），比目鱼的最高（78.63%）.就每一种鱼而言，各个亚基的相对含量差异较大.

三文鱼各亚基相对含量变异范围为2.6～14.7%，有4个亚基的相对含量大于10%，7

个亚基的相对含量低于5%，较高相对含量的亚基分子量集中在13.14～16.15KDa.狭鳕亚基相对含量变异范围为2.8～14.5%，有4个亚基的相对含量大于10%，3个亚基的相对含量低于5%，较高相对含量的亚基分子量集中在14.65～19.17KDa.比目鱼亚基相对含量变异范围为2.3～25.7%，有2个亚基的相对含量大于10%，5个亚基的相对含量低于5%，较高相对含量的亚基分子量集中在19.28和12.62KDa.黄鱼亚基相对含量变异范围为2.7～13.7%，有3个亚基的相对含量大于10%，5个亚基的相对含量低于5%，较高相对含量的亚基分子量集中在34.88～41.34KDa.带鱼亚基相对含量变异范围为3.9～16.0%，有3个亚基的相对含量大于10%，2个亚基的相对含量低于5%，较高相对含量的亚基分子量集中在20.89～25.69KDa.

3 讨 论

通过对五种深海鱼提取蛋白质的SDS-PAGE分析获得蛋白质亚基谱带，这五种鱼的蛋白质亚基谱带共同点在于蛋白质亚基在谱带中从高分子量到低分子量分布均匀，即均存在高分子量的亚基，也存在低分子量的亚基；但亚基的相对含量差异较大，每种鱼都有相对含量较高的亚基（大于10%），也有相对含量较低的亚基（低于5%）.对于每一种鱼而言，这些亚基的分子量不同.这五种鱼的谱带不同点在于每种鱼的谱带含有的亚基数量不同，亚基的分子量不同，亚基的相对含量也不同.由此可见，这五种鱼的蛋白质种类及构成不同，因而五种鱼的蛋白质营养价值不同，需要分别进行不同的深加工，为此，需要对五种鱼的提取蛋白质分子构成和营养价值继续研究，以便开发出相应的新产品，满足消费者的更多需求.

标*者为生命科学与工程系2013届生物工程专业毕业生

[1]常志娟，张培旗.酶解海洋生物蛋白的生物活性物质及开发功能食品的前景[J].食品工业，2010,6:63-66.

[2]李莹.深海鱼资源的深层次开发[J].中国油脂，2001，26(4):43-44.

[3]邓君明，麦康森，艾庆辉，张文兵，王小洁.与类蛋白质周转代谢的研究进展[J].中国水产科学，2007,14(1): 165-172.

[4]崔芳玲.五种深海鱼类蛋白含量的比较研究[D].曲阜市：济宁学院学士毕业论文，2012.

[5]王可玲，尤锋，徐成，吴谡琦.5种海水鱼同工酶表达的组织特性及其电泳的初步分析[J].海洋与湖沼,1996,27(6): 626-632.

[6]陈钧辉，李俊，张冬梅，等.生物化学实验（第四版）[M] .北京:科学出版社，2008.

[7]陈申如,张其标,倪辉.酸法提取鲢鱼鱼肉蛋白质技术的研究[J].海洋水产研究, 2004,(5): 61- 64.

[8]刘安军，王莹,等.鳕鱼盐溶蛋白提取条件优化及其在鱼糜制品加工中的变化[J].现代食品科技,2010,26,(10):1107.

[9]李建中，陶敏，曾琛,等.四倍体鱼促性腺激素a亚基cDNA的克隆与序列分析[J]湖南师范大学自然科学学报，2007,30(3):84-88.

（责任编辑 尹春光）

Analysis on the Extracted Protein from Five Species of Deep-sea by SDS-PAGE

LIU Shunhu, WANG Ruitao*
(Department of Life Science and Engineering, Jining University, Qufu 273155,China)

In order to provide reference for deep processing of deep-fish extracted protein, the subunits content and compositions of extracted protein from five deep-sea fish which included salmon, pollock, halibut, yellow croaker and trichiurus japonicas by SDS-PAGE. The results showed that (a)there existed various subunits with amounts and molecular in electrophoresis map of protein extracted from five fish.(b)the various rang of average relative content of subunits and coefficient of variation(C.V) were from 7.15 to 8.35%, from 38.15 to 78.63%, respectively. Then, the nutrient value of five fish protein may be different for their subunit amount and molecular.

deep-sea fish；protein extracted；SDS-PAGE；relative content of protein subunits

Q51

A

1004—1877（2014）03—043—03

2014-01-18

刘顺湖（1960-），男，山东招远人，济宁学院生命科学与工程系教授，博士，研究方向：生物蛋白质深加工.