西南獐牙菜化学成分研究Ⅱ

黄飞燕，李干鹏，吴健君，张应红，唐荣平

（1. 临沧师范高等专科学校 数理系，云南 临沧 677000；2. 云南民族大学 化学与生物技术学院 民族药资源化学重点实验室，云南 昆明 650500；3. 临沧市镇康县忙丙中学，云南 临沧 677000）

西南獐牙菜化学成分研究Ⅱ

黄飞燕1，李干鹏2，吴健君3，张应红1，唐荣平1

（1. 临沧师范高等专科学校 数理系，云南 临沧 677000；2. 云南民族大学 化学与生物技术学院 民族药资源化学重点实验室，云南 昆明 650500；3. 临沧市镇康县忙丙中学，云南 临沧 677000）

西南獐牙菜为龙胆科獐牙菜属植物，具有清热解毒，利胆退黄的功效。采用现代分离分析技术从西南獐牙菜80%甲醇提取物的水溶部分中分离得到3个化合物，分别为异牡荆素、异红草素、6''-阿拉伯糖基-异牡荆素，3种化合物均为首次从该属植物中分离得到。

西南獐牙菜；黄酮类；HPLC；

西南獐牙菜系龙胆科、獐牙菜属植物［1］。在云贵地区常用于治疗肝炎、黄疸型肝炎、肝胆类疾病［2］。国外对于西南獐牙菜的化学成分及药理研究报道较少。Goutam Brahmachari［3］，引用高光跃等［4］的研究证实西南獐牙菜中存在獐牙菜苷、龙胆苦苷和獐牙菜苦苷；RIOS J L［5］的综述中提及西南獐牙菜提取物有抗炎及抗渗出的作用；薛春迎、何廷农、李德铢［6］报道了西南獐牙菜的大、小孢子发生及雌、雄配子体发育过程, 同时讨论了獐牙菜属宽丝组和多枝组的分类等级和系统演化关系；张俊巍、茅青［7］较早对其化学成分进行了研究，从中分离得到5个化合物，分别为谷甾醇、齐墩果酸、山植酸、1,3，7,8-四羟基口山酮及獐牙菜皂甙（swericinctoside)，同时通过反相高效液相色谱法进一步证实西南獐牙菜中含有龙胆苦苷、獐牙菜苷、獐牙菜苦苷；纪兰菊、保怡、孙洪发等［8］研究结果中表明西南獐牙菜中存在大量的口山酮（xanthones）和裂环烯醚萜（secoiridoids）；耿家玲、耿长安、陈纪军［9］的研究中，报道了15个化合物，首次分离得到(-)龙胆内酯、angelone、3-表-蒲公英赛醇、间羟基苯甲醇、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二异丁酯、3,4-二羟基苯甲酸和正三十一烷醇；笔者所在的课题组前期报道了10个环烯醚萜类化合物［10-11］，其中含3个新裂环烯醚萜类化合物：3,4,5,6-tetrahydro-8-hydroxy-6-(hydroxymethyl)pyrano［3,4-c］pyran-1(8H)-one 、3,4,5,6-tetrahydro-8-hydroxy-6-methylpyrano［3,4-c］pyran-1(8H)-one 、5,6-dihydro-4-(1,3-dihydroxybutan-2-yl)-3-(hydroxymethyl)pyran-2-one，首次从该属植物中分离得到6′-O-葡萄糖基－獐牙菜苷，septemfidoside、马钱苷酸、6′-O-葡萄糖基－獐牙菜苦苷。

为了研究其化学成分，笔者继续对该植物80%甲醇提取物的水溶部分进行分离纯化，采用高效液相制备色谱、质谱和核磁共振波谱等技术，进一步从水溶性部分中分离、鉴定得到3个黄酮类化合物，3个化合物均为首次从该植物中分离得到。

1 实验部分

1.1 材料与仪器

Agilent 1200型高效液相色谱，XDB-C18(21.2× 250 mm)半制备柱，艾杰尔半制备柱（Venusil XBP-C18(10×250 mm)）；Bruker DRX-400型超导核磁共振仪（TMS为内标）；质谱用API QSTARPulsar液相色谱/四极杆/飞行时间串联质谱仪测定；MCI材料（Merck公司）；提取用甲醇为工业纯（重蒸）；娃哈哈纯净水（过滤），二氯甲烷及其他试剂为分析纯。

西南獐牙菜植物样品于2009年10月采自云南玉溪新平县哀牢山，经云南中医学院杨礼攀博士鉴定为西南獐牙菜，植物标本（NO. 0601007）存于云南民族大学民族药资源化学重点实验室标本室。

1.2 提取及分离

花期采集的西南獐牙菜全草在室内阴干，称重（4.5 kg）后粉碎至80目，用80 %的甲醇（料液比1:2）加热超声提取，共8次，每次4 h，提取液过滤、浓缩（甲醇回收）合并得棕色浸膏约880g，加水至悬浮状，用二氯甲烷多次萃取。水溶部分经过MCI脱色（甲醇洗脱）后经大孔树脂脱糖（甲醇:水）洗脱，得到水部分156 g、甲醇∶水部分273 g、甲醇部分45 g；取甲醇（70%）部分浸膏56 g用HPLC制备色谱进行制备（色谱条件：制备色谱柱：XDB-C18(21.2×250 mm)；进样量：250 μL；洗脱剂：V甲醇∶V水∶V甲酸=35∶65∶0.5；流速：8 mL/min,按出峰情况划段，旋蒸得到Fr1-5，然后用艾杰尔半制备柱（Venusil XBPC18（10×250 mm））进行分离；进样量：80 μL；洗脱剂：V甲醇∶V水=35:65；流速：2 mL/min）进行纯化制备，分别得到化合物1（28.6 mg）、化合物2（17.2 mg）、化合物3（12.0 mg）。

2 结构鉴定

化合物1 黄色粉末, 分子式:C21H21O101H-NMR (400 MHz, CD3OD) δH:7.84 (2H, d, J=7.2 Hz, H-2’, 6’), 6.93 (2H, d, J=7.7 Hz, H-3’, 5’), 6.60 (1H, s, H-3), 6.51(1H, s, H-8), 4.62 (1H, d, J=8.0 Hz, H-1’’), 4.20 (1H,dd, J=8.4, 9.8 Hz, H-2), 3.90 (1H, d, J=7.2 Hz,H-6’’), 3.75 (1H, dd, J=4.8, 12.0 Hz, H-6’’), 3.47(1H, m, H-3’’), 3.45 (1H, m, H-5’’), 3.38 (1H, m, H-4’’);13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δC:184.1 (C-4), 166.2 (C-2), 165.0 (C-7), 162.8 (C-40), 162.1 (C-5), 158.7 (C-9), 129.5 (C-2’,6’), 123.1 (C-10), 117.0 (C-3’, 5’ ), 109.2 (C-6), 105.2 (C-1’ ),103.9 (C-3 ), 95.2 (C-8 ), 82.7 (C-5’’), 80.1 (C-3’’), 75.3 (C-1’’), 72.5 (C-4’’), 71.8 (C-2’’), 62.8 (C-6’’).以上数据与文献值［12］对照基本一致，化合物1鉴定为异牡荆素(Isovitexin)。

化合物2 黄色粉末, 分子式:C26H28O141H-NMR (400 MHz, CD3OD) δH: 7.87 (2H, d, J=7.2 Hz, H-2’, 6’), 6.94 (2H, d, J=7.7 Hz, H-3’ , 5’), 6.70 (1H, s, H-3), 6.45(1H, s, H-8), 4.98(1H, s, H-1’’’), 4.61 (1H, d, J=8.0 Hz, H-1’’), 4.23 (1H,dd, J=8.4, 9.8 Hz, H-2), 3.94 (1H, d, J=7.2 Hz,H-6’’), 3.74 (1H, s, H-2’’’), 3.72 (1H, dd, J=4.8, 10.8 Hz, H-6’’), 3.49 (1H, s, H-3’’’), 3.46 (1H, m, H-4’’’), 3.45(1H, m, H-3’’), 3.45 (1H, m, H-5’’), 3.88 (1H, dd, J=4.8, 11.2 Hz, H-5’’’), 3.64 (1H, dd, J=6.0, 12.0 Hz, H-5’’’), 3.32 (1H, s, H-4’’);13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δC: 183.9 (C-4), 166.1 (C-2), 165.0(C-7), 162.7 (C-40), 162.1 (C-5), 158.7 (C-9), 129.4 (C-2’,6’), 123.0 (C-10), 117.1 (C-3’, 5’), 108.9 (C-6), 105.2 (C-1’), 105.1 (C-1’’’), 103.3 (C-3), 95.4 (C-8), 81.3 (C-5’’), 79.9 (C-3’’),75.4 (C-1’’), 74.2 (C-2’’’), 72.6 (C-4’’), 72.4 (C-3’’’), 71.9 (C-2’’), 70.2 (C-5’’’）, 69.6 (C-4’’’), 66.3 (C-6’’). 以上数据与文献值［12］对照基本一致，仅在6''多了一个阿拉伯糖基，化合物2鉴定为6’’-阿拉伯糖基-异牡荆素(6''-Arabinosyl-Isovitexin)。

化合物 3 黄色粉末,分子式: C21H21O111H-NMR (400 MHz, C5D5N) δH: 7.44 (1H, dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, H-6’), 7.25 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-2’), 6.87 (1H, s, H-5’), 6.67 (1H, S, H-3), 4.58(1H, d, J = 10.0 Hz, H-1’’).13C-NMR (400 MHz, C5D5N) δC: 183.3 (C-4)165.2 (C-2), 165.1 (C-7), 162.5 (C-5), 158.0 (C-9), 152.2 (C-4’), 148.3 (C-3’), 123.3 (C-1’), 120.0 (C-6’), 117.3 (C-5’), 115.1 (C-2’), 110.5 (C-6), 105.3 (C-10), 104.4 (C-3), 95.1 (C-8), 83.4 (C-5’’), 81.0 (C-3’’), 76.0 (C-1’’), 73.4 (C-2’’), 72.4 (C-4’’), 63.2 (C-6’’). 以上数据与文献值［13］对照基本一致，化合物3鉴定为异红草素(Isoorientin)。

3 讨论

我国獐牙菜属植物种类较多，分布面积广，储量大，但列入药典作为药用和保健的品种很少，因此很有必要加大对该属植物的研究力度。云南省獐牙菜属植物资源丰富，但化学成分及药理研究工作还比较薄弱。试验对采自云南的西南獐牙菜进行化学成分研究，采用高效液相色谱技术及现代波谱技术，从该植物水溶部分分离、鉴定了3个黄酮类化合物，据文献报道，该类化合物具有一定的抗癌活性。为更好地开发和利用云南丰富的獐牙菜属植物药资源，笔者将继续展开研究，进一步改进提取和分离方法，以期得到更多的同类化合物和新的活性成分。同时对分离得到的化合物进行活性测试，通过高效液相色谱分析，比较不同品种之间的化学成分差异，有助于辨认药材品质和寻找习用药材的替代品，对于植物分类学研究具有一定的参考价值，也为该属植物药理药效相关学科的研究提供参考依据。

参考文献：

［1］ 何廷农.中国植物志（62卷）［M］. 北京：科学出版社, 1988：408.

［2］ 叶家齐, 孙学蕙, 隋燕华, 等. 西南獐牙菜药理初探［J］.中药药理与临床, 1985（00）：297.

［3］ Brahmachari G, Mondal S, Gangopadhyay A, et al. Swertia (Gentianaceae)：Chemical and Pharmacological Aspects ［J］. Chemistry and Biodiversity, 2004 （11）：1627-1651.

［4］ 高光跃，李鸣，冯毓秀，等. 11种獐牙菜及近缘植物中有效成分的高效液相色谱测定［J］.药学学报，1994 （12）：910-914.

［5］ Rios J L, Recio M C, Maiiez S, et al. Natural triterpenoids as anti-infiammatory agents ［J］. Studies in Natural Products Chemistpy, 2000（3）：97-143.

［6］ 薛春迎，何廷农，李德铢. 西南獐牙菜的胚胎学及其系统学意义［J］. 云南植物研究，2002（1）：75-81.

［7］ 张俊巍，茅青. 西南獐牙菜化学成分研究［J］. 药学学报，1984（11）：819-824.

［8］ 纪兰菊, 保怡, 孙洪发, 等. 15种獐牙菜属植物中主要药用成分的高效液相色谱分析［J］. 西北植物学报，2004（7）：1298-1302.

［9］ 耿家玲，耿长安，陈纪军. 西南獐牙菜化学成分的研究［J］. 天然产物研究与开发，2012（1）：42-46.

［10］ Jin Yang, Feiyan Huang, Ganpeng Li, et al. Three new iridoid compounds from Swertia cincta Burkill［J］. Heterocycles, 2012（11）：2775-2780.

［11］ 李干鹏，曾思为，黄飞燕，等. 西南獐芽菜化学成分研究Ⅰ［J］. 云南民族大学学报：自然科学版，2011（5）：350-352.

［12］Takahiro H, Yun Y S, Kunugi A. Five novel flavonoids from Wasabia japonica ［J］. Tetrahedron, 2005（29）：7037-7044.

［13］Peng J Y, Fan G R, Hong Z Y, et al. Preparative separation of isovitexin and isoorientin from Patrinia villosa Juss by high-speed counter-current chromatography ［J］. Journal of Chromatography A, 2005（1-2）：111-115.

The Second Study of Chemical Compositions of South-east Swertia Plant

HUANG Fei-yan1, LI Gan-peng2, WU Jian-jun3, ZHANG Ying-hong1, TANG Rong-ping1
(1. Department of Mathematics and Physics, Lincang Teachers College, Lincang 677000, China; 2. Key Lab of Ethnic Medical Resources in School of Chemistry and Biology Technology, Yunnan Nationality University, Kunming 650500, China; 3. Mangbin Middle School in Zhenkang, Lincang 677000, China)

South-east swertia plant belongs to gentianaceae swertia genus with the functions of heat-clearing, detoxicating, cholagogic and anti-inflammatory. From water soluble part of 80% methanol extracts of southwest swertia plant three compounds, isovitexin, Homoorientin, 6''-arabinose isovitexin, are isolated using modern separation and analysis techniques, which are first extracted from the plant.

South-east swertia plant; flavonoids; HPLC

R284.2

A

1674-9200（2014）03-0031-03

（责任编辑 张 铁）

2014-03-18

教育部科学技术研究重点项目“云南产獐牙菜属植物药的活性成分研究”（208132）；临沧师范高等专科学校资助项目“西南獐牙菜化学成分研究”（LCSZL201204）。

黄飞燕（1984-），男，湖南郴州人，临沧师范高等专科学校数理系讲师，硕士，主要从事天然药物化学研究。