猪弓形虫病的血清学检测

顾冬花 （青海省大通县畜牧兽医站 810100） 李涵林 （青海省大通县农牧扶贫开发局）

应用ELISA方法对采自青海省4家规模场的200份猪血清进行猪弓形虫病的检测，检测结果为1场仔猪阳性1份；4场母猪阳性1份；2场、3场检测结果全部为阴性；200份检测样品，其中子猪检测90份，仔猪阳性率为1.1%；母猪检测50份，母猪阳性率为2%；育肥猪检测60份，阳性率为0。检测结果表明1场仔猪和4场母猪存在猪弓形虫病感染，该两场需采取有效的治疗和预防措施，防止该病的传播扩散。

弓形虫病是由刚地弓形虫(Tox op lasmagondi)引起的一种人畜共患原虫病，1908年法国学者Nicolle 和manceaux在北非刚第最早发现［1］。弓形虫宿主范围广，常寄生于组织细胞内，人和动物一旦摄入被弓形虫卵囊污染的食物或饮水就可感染发病。人的先天性弓形虫病可使胎儿或婴幼儿出现发育畸形、智力障碍、脑炎、脑膜炎甚至死亡等临床症状，常成为免疫抑制及免疫缺陷人群的致死病因之一[2]。猪感染弓形虫初期体温升高，食欲减退，呼吸困难，感染母畜流产、死胎，其余则出现消化道和呼吸道症状，或隐性感染，给养猪业生产带来了较大的经济损失。自从于恩庶等1955年在猪体内分离到弓形虫以后[3]，20世纪80年代，我国有多个省、市、自治区相继报道了猪感染弓形虫病的情况［4］。为了了解青海省规模场猪弓形虫病的感染状况，笔者对青海省的200份猪血清用ELISA试验进行了猪弓形虫感染的血清学检测，现将检测结果报告如下。

1 材料

1.1 样品来源 被检血清200份，采自青海省4个规模场各50份，其中仔猪90份、母猪50份、育肥猪60份。

1.2 仪器 移液器、恒温培养箱、洗板机、酶标仪等。

1.3 试剂 标准抗原、阴阳性血清均购自中国农业科学院兰州兽医研究所。

2 方法

按照兰州兽医研究所提供的猪弓形虫病ELISA诊断试验操作说明进行。

3 步骤

（1）用微量移液器向每个孔内加0.2ml0.05mPH9.6碳酸盐缓冲液稀释的抗原，置湿盒内于4℃冰箱包被18～24h。然后取出包被好的抗原板甩去抗原，用含有0.05%吐温-20pH7.2PBS(简称洗涤液)洗涤3次，甩去洗涤液，倒置在滤纸上轻拍使孔内液体充分流出。（2）向孔内分别加入用稀释液稀释好的被检猪血清、阳性血清、阴性血清各0.2ml，置湿盒内于37℃恒温2h。（3）取出反应板甩去血清，同上洗涤5次拍干。再加入稀释好的酶标记物兔抗猪或鼠抗猪IgG0.2ml，置湿盒内于37℃恒温2h。（4）同上甩去残留的酶标记物溶液，洗涤5次拍干。加入底物溶液0.2ml，置湿盒内于37℃恒温30min，拿出后立即向孔内加入0.03ml终止液，终止反应。

4 结果判定

4.1 肉眼观察 在反应终止后，于白色背景上用肉眼观察各孔中所呈现的颜色反应，并与阴性血清孔中呈现的颜色比较，凡试验血清孔中的颜色明显深于阴性血清孔，成鲜明的棕黄色者为阳性反应，以能产生阳性反应的最高血清稀释度为该份血清的终点滴度。无色或很浅淡黄色者为阴性反应。

4.2 测定吸光值(OD值) 将反应板放入酶标仪读取492nm吸收波的OD值，凡检测血清的吸光值高于标准阴性血清吸光值2倍以上者即为阳性反应。

5 结果

附表 各猪场猪弓形虫病ELISA试验检测结果 （%）

6 讨论

（1）本次调查采用ELISA试验诊断方法，检测4个规模场的猪血清样品200份，仔猪90份，母猪50份，育肥猪60份；检测结果仔猪阳性1份，阳性率1.1%，母猪阳性1份，阳性率2%；说明青海地区猪弓形虫感染率不高，尤其2场和3场猪弓形虫的感染率为0，感染主要发生在1场和4场，因此1场和4场应进一步加强兽医卫生管理及疫病的防治工作。（2）应用ELISA试验诊断方法判断猪弓形虫病具有高效、经济、快速、结果易于判断等优点，有一定的实用价值。（3）随着养猪业的集约化和规模化发展，母猪繁殖障碍性疾病已成为猪场的主要疫病之一，目前，没有预防猪弓形虫病的疫苗，再加上饲养者对本病认识不足，缺乏诊断防治技术，延误治疗时机，造成大批母猪流产、肉猪发病死亡，给养猪生产带来严重的 经济损失，因此控制猪弓形虫病的流行主要依靠有效的防治措施来进行。（4）弓形虫的整个发育过程需要两个宿主，猫科动物为终末宿主，是弓形虫的重要传播源，因此猪场禁止饲养猫科动物，杜绝弓形虫的传播。另外病畜和带虫者的肉、内脏、血液、渗出物和排泄物中均可能有弓形虫，这些不仅可感染家畜，而且对人体健康危害极大。

7 建议

（1）禁止猫科动物进入猪圈舍，防止其粪便污染猪的饲料和饮水；（2）做好猪舍的防鼠灭鼠工作，禁止用屠宰废物和厨房垃圾、生肉汤水喂猪，以防猪吃到患病和带虫动物体内的滋养体和包囊而感染；（3）对猪圈舍定期消毒，保持卫生清洁，对流产胎儿及排泄物严格按无害化处理，对流产场地严格消毒；（4）加强生猪的宰前、宰后检疫，防止污染肉上市，以保证人民群众身体健康。（5）不同地区和环境弓形虫感染率不同，即使同一种动物也不尽相同。很多国家都有此病，且最高感染率达90%[5]。国内不少地区猪的平均感染率为30%左右，有的高达80%以上[6]，而本次调查比马利青等应用间接血凝试验(IHA)检测出青海省西宁地区猪弓形虫的感染率为30.34%低[7]，说明近几年规模场的兽医卫生管理工作和疫病防治工作取得了显著成效，今后继续加强这方面的调查工作，为养殖场防制和净化本病提供科学依据。

[1]北京农业大学主编.家畜寄生虫学[m].北京: 农业出版社, 1987.430-435.

[2]吴中光, 郑葵阳.实用寄生虫病学[m].南京: 江苏科学技术出版社, 2003: 152-156.

[3]于恩庶.弓形虫病学[m].福州: 福建科学技术出版社, 1992: 3-6.

[4]蔡宝祥, 郑明球主编.猪病诊断和防治手册[m].上海: 上海科学技术出版社, 1997.271-276.

[5]林明亮等, 牡丹江地区羊弓形虫病血清学普查报告[J].黑龙江畜牧兽医, 1995, 7: 27-28.

[6]吕元聪.广西西南部分地区畜禽弓形体病流行病学监测[J].畜牧兽医杂志, 1990, 3: 24-26.

[7]马利清, 王弋平, 阎高峰.青海省西宁地区猪弓形体病的血清学调查[J].家畜生态, 2003: 24(4): 6.