CA-1500血凝仪免疫比浊法检测D-二聚体的实验性能评价

张金彪，代荣琴，林佳静，李 涓，翟文燕

CA-1500血凝仪免疫比浊法检测D-二聚体的实验性能评价

张金彪，代荣琴，林佳静，李 涓，翟文燕

目的：评价CA-1500血凝仪检测D-二聚体的实验性能。方法：参照CLSI发布的系列文件，评估CA-1500血凝仪检测D-二聚体的批内精密度、批间精密度、相关性分析、分析测量范围（analytical measurement range，AMR）、临床可报范围（clinical reportable range，CRR）、最大稀释倍数、抗干扰物质实验等内容。利用低、高值校准品检测精密度；随机选择门诊及住院患者50份109 mmol/L的枸橼酸钠抗凝血，与CS-5100血凝仪进行相关性分析；选择正常水平（L1）、中间水平（L2）、高水平（L3）样本进行临床可报范围评测；临床留取血红蛋白、胆红素、甘油三酯、胆固醇4种干扰血浆进行干扰试验评价。结果：高值质控品批内和批间精密度评价均小于15%；CA-1500血凝仪与CS-5100具有良好的线性关系（P=0.103＞0.01，r=0.935）；评价CA-1500血凝仪检测D-二聚体的测量线性范围为0～5 mg/L；CRR评价最适合稀释倍数为1/8，结合线性范围确定CRR为0.03～40 mg/L；抗干扰物实验影响度均小于±10%。结论：从研究结果来看，CA-1500血凝仪实验性能符合原厂家质量要求，符合CLSI发布的系列文件，在精密度、相关性、AMR、CRR、抗干扰能力等方面能够为实验室及临床提供可靠结果及质量保证。

血凝仪；D-二聚体；性能评价

0 引言

随着人们生活水平的提高，出血和止血疾病的发病率呈上升趋势。出凝血功能的检测技术进步较快，以前的手工法逐渐由半自动和全自动设备所替代。CA-1500血凝仪（以下简称CA-1500）是日本Sysmex公司生产的全自动血凝分析仪，国内应用较为普遍。为了解CA-1500检测D-二聚体的性能，笔者进行了性能评价，评价内容包括：批内精密度、批间精密度、相关性分析、分析测量范围（analytical measurement range，AMR）、临床可报范围（clinical reportablerange，CRR）、最大稀释度、抗干扰物质实验等。

1 材料和方法

1.1 仪器与试剂

Sysmex公司生产的CA-1500，所用试剂均为进口配套试剂（INNOVANCE），校准品、质控品均为配套试剂盒内包装（见表1）。

表1 试剂规格及批号

1.2 标本来源

随机选取50份标本，来自门诊及住院患者，均为109 mmol/L枸橼酸钠1∶9抗凝血；抗干扰物实验样本为临床检测标本留取。

1.3 精密度评价

分别将低高值质控品连续检测20次（n=20），得到20个质控结果；分别将低高值质控品分装成5份，冷冻保存，每天将一份分装质控品连续检测4次，连续检测5 d（n=20），得到20个质控结果。将批内、批间结果计算x、s、CV。

1.4 相关性分析

随机选取50份门诊及住院患者标本分别在Sysmex CS-5100血凝仪（以下简称CS-5100）和Sysmex CA-1500上检测，记录并统计分析，以Sysmex CA-1500检测结果为y，以Sysmex CS-5100为x，计算线性回归方程和相关系数（r）。

1.5 分析测量范围（AMR）实验方案

参考EP6-A文件[1]，选取一份接近预期上限的高值全血样本（H），分别按100%、75%、50%、25%、0%的比例进行稀释，每个稀释度重复测定2次，计算均值。将实测值与理论值作比较（重复测定偏离小于5%，符合偏离小于10%的标准），计算y=ax+b，验证线性范围。若实验的每个浓度的线性偏离均在允许误差范围之内，则实验所涉及的浓度区间即为AMR。本实验要求a值在1±0.1范围内，相关系数r≥0.975。

1.6 临床可报范围（CRR）评价

选取L1、L2、L3等3个浓度水平的标本分别进行1∶2、1∶5、1∶8、1∶10稀释倍数检测D-二聚体，测量值与预测值进行比较，计算出稀释回收率。可接受的稀释回收率范围为90%～110%。结合试剂厂家给定的检测灵敏度0.03 mg/L和最大稀释倍数来确定CRR。

1.7 抗干扰物质实验

从临床标本中留取实验用干扰血浆，其最高浓度分别为血红蛋白（Hb）5.0 g/L、总胆红素（TBiL）282 mmol/L、甘油三酯（TG）20.8 mmol/L、胆固醇（TC）12.4 mmol/L。各干扰物质按100%、80%、60%、40%、20%的比例进行稀释，将不同浓度的干扰物质和待测血浆按1∶9的比例混合，各样本分别测定2次取均值，计算其影响度；影响度（%）=（加入后测定值-加入前测定值）/加入前测定值×100%。要求影响度（%）在±10%范围内。

2 结果

2.1 批内和批间精密度评价

D-二聚体试剂厂家产品性能指标要求CV＜15%，实验均达到要求，见表2。

表2 低高值质控品批内和批间计算精密度（n=20）

2.2 相关性分析评价

相关性分析评价采用t检验，t=2.35，t＜t0.01(49)，P= 0.103＞0.01，CA-1500与CS-5100具有良好的线性关系，两者比较无差异，见表3。

表3 CA-1500与CS-5100的相关实验（n=50）

2.3 分析测量范围（AMR）评价

从表4可以看出，CA-1500检测D-二聚体的线性范围为0～5 mg/L。

表4 AMR实验方案实施结果

2.4 临床可报范围（CRR）评价

从表5可以看出，3个不同浓度的样本经过梯度稀释后稀释回收率最接近于100%的稀释倍数为1∶8，故可视1∶8为最大稀释倍数。结合AMR和检测灵敏度（0.03 mg/L），可以确定CA-1500检测D-二聚体的临床可报告范围为0.03～40 mg/L。

2.5 抗干扰物质评价

从表6可以看出，计算出的影响度结果均在±10%范围内，表明4种干扰血浆在该浓度下不会影响D-二聚体的检测结果。

表5 3个水平标本（L1、L2、L3）D-二聚体稀释回收率评价结果

表6 4种干扰血浆实验结果

3 讨论

目前，由于生活环境改变和社会压力增加，出血、止血相关疾病发病率在逐年上升，尤其是血栓疾病在近几年有明显增加。临床实验室对D-二聚体的检测也日渐重视。Sysmex CA-1500血凝仪在全国大中型医院已推广使用，该仪器利用免疫比浊法检测D-二聚体也较为普遍。但D-二聚体检测方法有多种，检测仪器也有较多不同系列，本文研究了CA-1500检测D-二聚体的性能评价，目的在于能够给临床提供统一、高效、可靠的检测结果，能够充分地被接受并应用于临床诊治。

检测系统或检测方法的分析性能评价是临床检验质量管理的重要内容[2-4]。通过本研究结果可以了解到：D-二聚体的批内和批间精密度评价均小于15%；同系列的Sysmex CA-1500与CS-5100具有良好的相关性（P=0.103＞0.01，r=0.935）；Sysmex CA-1500检测D-二聚体的测量线性范围为0～5 mg/L，基本上能够满足临床需求；CRR评价最适合稀释倍数为1∶8，结合线性范围确定CRR为0.03～40 mg/L，如果遇到D-二聚体含量很高的标本，检测结果超出了CRR，笔者建议临床可报范围大于40mg/L，因为目前尚无相关文献阐明D-二聚体浓度超过40 mg/L临床意义有明显不同。但如果临床要求具体数值时，可手工稀释即可，但结果仅供参考；4种干扰物质实验影响度均小于±10%，说明CA-1500检测D-二聚体结果真实可靠，常见的干扰物质影响度较小。从各个性能评价结果可知，各参数皆符合CLIA′88法案的要求（美国临床实验室标准化协会修正方案CLSI-CLIA′88）。总之，分析仪器和检测试剂的检测性能水平是实验室质量的重要保证，而检测人员的规范操作以及对仪器和方法学的理解和运用也不容忽视，毕竟再先进的仪器、再精准的试剂也是由人员来操作的。

[1]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearityof quantitative analytical methods：approved guideline（EP6-A）[S]. Wayne：CLSI，2004.

[2]张秀明，庄俊华，郑松柏.临床化学发光免疫法检测AFP的分析性能验证与实验方法[J].中华检验医学杂志，2007，30（11）：1 293-1 297.

[3]唐筑灵，徐国宾.快速免疫荧光法测定血浆NT-proBNP的分析性能评价[J].中华检验医学杂志，2010，33（12）：1 208-1 212.

[4] 国秀芝，邱玲，刘荔.三种用于自动生化分析仪的半胱氨酸抑制酶C试剂的分析性能验证[J].中华检验医学杂志，2011，34（6）：561-567.

（收稿：2014-02-18 修回：2014-05-08）

Experimental performance evaluation by CA-1500 blood coagulation analyzer for D-dimer by immune turbidimetry

ZHANG Jin-biao1,DAI Rong-qin2,LIN Jia-jing1,LI Juan1,ZHAI Wen-yan1
（1.Department of Clinical Laboratory,Cangzhou Hospital of Traditional Chinese and Western Medicine，Cangzhou 061001, Hebei Province,China;2.Laboratory Section of Microbiology,Immunology and Biochemistry,Cangzhou Medical College, Cangzhou 061001,Hebei Province,China）

ObjectiveTo evaluate the experimental performance of CA-1500 blood coagulation analyzer for D-dimer. MethodsAccording to series of files issued by CLSI,CA-1500 blood coagulation analyzer was applied to D-dimer test and assessed for the within-assay precision,interassay precision,correlation analysis,analytical measurement range (AMR),clinical reportable range(CRR),maximal dilution rate and etc.Low-and high-value calibrators were used to detect the precision.Totally 50 sodium citrate anticoagulation blood samples were selected randomly from the outpatients and inpatients,and then the correlation with CS-1500 blood coagulation analyzer was analyzed.CRRs were measured for the samples at normal level(L1),intermediate level(L2)and high level(L3).Interference tests were carried out with four kinds of interference plasmas of hemoglobin,bilirubin,triglyceride and cholesterol.ResultsThe within-assay precision and interassay precision of the high-value calibrators were both less than 15%.CA-1500 blood coagulation analyzer gained high correlation with CS-1500 analyzer,with P=0.103＞0.01 and r=0.935.The AMR of CA-1500 blood coagulation analyzer for D-dimer was between 0 and 5 mg/L.The optimal dilution rate for CRR was 1/8,and CRR was determined between 0.03 and 40 mg/L.Interference tests proved that the influence degrees were all less than±10%.ConclusionCA-1500 blood coagulation analyzer has its experimental performance meet the requirements of the manufacturer and series files issued by CLSI,and can provide references at precision,correlation,AMR,CRR,anti interference and etc.[Chinese Medical Equipment Journal，2014，35（11）：95-97]

blood coagulation analyzer;D-dimer;performance evaluation

R318.6；TH776

A

1003-8868（2014）11-0095-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2014.11.095

张金彪（1980—），男，主要从事临床检验、血液学检验方面的研究工作。

061001河北沧州，河北省沧州中西医结合医院实验诊断科（张金彪，林佳静，李 涓，翟文燕）；061001河北沧州，沧州医专微免生化检验教研室（代荣琴）