平胃散中苍术素在大鼠体内药代动力学研究

李古月 刘佳鑫 才 谦

1.中国医科大学附属第一医院，辽宁沈阳110000；2.中国医科大学药学院，辽宁沈阳110000；3.辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600

平胃散中苍术素在大鼠体内药代动力学研究

李古月1，2刘佳鑫1，2才 谦3

1.中国医科大学附属第一医院，辽宁沈阳110000；2.中国医科大学药学院，辽宁沈阳110000；3.辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600

目的研究平胃散中苍术素在大鼠血浆及组织中分布特征。方法建立大鼠血浆中苍术素的HPLC测定方法，考查大鼠口服平胃散混悬液0.17，0.33，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12，24 h后血药浓度变化和2，3，8 h后大鼠体内组织分布情况，采用DAS 2.0数据处理软件计算药代动力学参数。结果大鼠口服平胃散混悬液后，苍术素在大鼠体内的达峰时间Tmax为2.5 h，最大浓度Cmax为1.765 mg/L，半衰期t1/2z为5.723 h，AUC 11.789 mg/L·h，且在6 h左右时第2次达峰，出现双峰现象。大鼠口服平胃散混悬液后2，3，8 h的药物组织分布由高到低的顺序大致是胃>小肠、脾>肝、肺、心>肾、大肠。结论该方法灵敏、快速、准确，可用于大鼠血浆中苍术素浓度的测定。

平胃散；苍术素；药代动力学；组织分布；高效液相色谱

平胃散出自宋代《太平惠民和剂局方》。由炙苍术、姜厚朴、陈皮、甘草四味药组成，具有燥湿健脾，行气和胃之效。主治湿困脾胃证[1]。大凡脾胃病变，只要属于所谓脾胃湿滞，都可用它或加味而治，所以古人称它是“治脾圣药”。君药苍术为菊科植物茅苍术A-tractylodes lancea（Thunb.）DC.或北苍术Atractylodes Chinensis（DC.）Koidz.的干燥根茎，春、秋二季采挖，除去泥沙，晒干，撞去须根。苍术味辛、苦，性温、归脾、胃、肝经，具有燥湿健脾，祛风散寒，明目的功效[2]。苍术有效成分为倍半萜类和聚乙烯炔类，前者主要为β-桉叶醇，而后者主要为苍术素[3]，并多以苍术素作为定量指标。以往对苍术素的药代动力学研究仅局限在单味药上，因此本实验采用HPLC法[4]，以大黄素甲醚为内标，研究复方中苍术素的药代动力学和组织分布的变化。

1 仪器与试药

1.1 仪器

FJ-200高速分散均质机（上海标本模型厂）；HC-2062高速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）；XK96-B快速混匀器（姜堰市新康医疗器械有限公司）；AR2140电子分析天平（上海奥豪斯公司）；KH-300P型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；岛津LC-10A高效液相色谱仪（SPD-10Avp、LC-10ATp、N3000色谱工作站）。

1.2 药材和药品试剂

苍术（麸炒）、厚朴（姜炙）、陈皮、甘草（炙）均购自北京同仁堂大药房大连分店，经辽宁中医药大学鉴定教研室李峰教授鉴定，均符合《中国药典》2010年版一部规定。苍术素（批号：17-2001；上海中药标准化研究中心）；大黄素甲醚对照品（批号：110758-201013，中国食品药品检定研究院）；氯化钠注射液（黑龙江科伦制药有限公司，批号：B12120408-1）；乙腈（色谱纯，瑞典欧森巴克化学公司）；甲醇（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司），其余试剂均为分析纯。

1.3 动物

健康清洁级SD大鼠，体重180～220 g，雌雄兼用，动物合格证号：SCXK（辽）2008-0002，由大连医科大学实验动物中心提供，适应性饲养1周，动物房温度维持在18～25℃。

2 方法与结果

2.1 药液的配制

取麸炒苍术24 g，厚朴18 g，陈皮12 g，甘草6 g，四种药材混合粉碎（过60目筛），将混合药材粉末置于具1 L塞圆底烧瓶中，加入900 mL 95%乙醇密封浸泡48 h，超声1 h，静置1 h，再超声1 h，取出，放至室温后抽真空滤过，滤液经减压旋蒸浓缩至干，将干膏用水充分溶解混匀成浓度为含生药2 g/mL药液，冷藏避光保存以备用。

2.2 样品的采集及处理

随机选取SD大鼠6只，禁食、自由饮水，24 h后，采用单次给药法，眼眶后静脉丛取血0.5 mL，然后灌胃给平胃散混悬液（50 g/kg）。分别于给药后0.17，0.33，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12，24 h自眼眶后静脉丛取血0.5 mL，置于用肝素预处理过的1.5 mL离心管中，10 000 r/min离心5 min，分离血浆，精密量取血浆样品200μL，加入50μL大黄素甲醚内标溶液，涡旋混匀，再加入600μL乙腈沉淀蛋白，涡旋90 s，10 000 r/min离心5 min，取上清液，加入600μL氯仿，涡旋90 s，静置40 min，保留氯仿层，40℃空气流下吹干，加100μL甲醇复溶，取20μL进样。

组织分布试验中，将SD大鼠20只，随机分成4组，每组5只。实验前禁食24 h，自由饮水。空白组于给药前处死，其余3组灌胃给予平胃散混悬液（50 g/kg），于2，3，8 h后处死，解剖采集心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠。用生理盐水冲洗组织表面的血液和内容物，用滤纸吸干水分，精密称取各组织样品0.2 g，加入1 mL生理盐水，匀浆处理。10 000 r/min离心5 min，取上清液200μL。加入25μL大黄素甲醚内标溶液，再加入600μL乙腈沉淀蛋白，涡旋90 s，10 000 r/min离心5 min，取上清液，加入600μL氯仿，涡旋90 s，静置40 min，保留氯仿层，40℃空气流下吹干，加100μL甲醇复溶，取20μL进样。

2.3 色谱条件

色谱柱：Promosil-C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈-水（76∶24），流速：0.8 mL/min；检测波长：340 nm；柱温：25℃；进样量：20μL。

在上述色谱条件下，空白血浆（A），空白血浆加苍术素和内标大黄素甲醚（B），大鼠血浆样品加内标大黄素甲醚（C）等HPLC色谱图见图1。流动相对苍术素与内标大黄素甲醚的色谱峰得到良好分离，且不受内源性物质的干扰。

2.4 方法学考察

分别精密称取苍术素和大黄素甲醚对照品适量，甲醇配成质量浓度分别为5.00×10-4mg/L和6.90×10-5mg/L的储备液。精密量取200μL大鼠空白血浆6份，加入苍术素对照储备液，配成含苍术素分别为4.97，2.49，0.99，0.50，0.25，0.05mg/L的标准含药血浆质控样品，按血浆样品处理方法操作后测定峰面积。以对苍术素的浓度（X）为横坐标，对苍术素与大黄素甲醚内标峰面积比（Y）为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归计算，结果表明，苍术素在0.057～4.970 mg/L范围内线性关系良好，回归方程为Y=0.6013X-0.0004，r=0.9981。制备苍术素浓度为0.05，0.99，4.97 mg/L的质控样品的回收率分别为（87.53±1.75）%，（84.24±1.73）%，（87.65±2.73）%。日内精密度分别为（98.86±2.86）%，（98.54±1.74）%，（97.80±1.85）%，日间精密度（98.6±3.25）%，（98.6± 1.56）%，（97.9±4.12）%。在1 h（室温）、24 h（室温）、30 d（-20℃）条件下样品浓度的RSD值在3.7%～4.0%之间，符合生物样品分析方法的规定，样品在上述四个条件下均稳定可测。

苍术素在组织中的标准曲线和线性范围分别是：Y心=1.471X-0.0858（r=0.9911），线性范围为0.0996～9.9600 mg/L，Y肝=2.4062X-0.050（r=0.9942），线性范围为0.0996～9.9600 mg/L，Y脾=1.8398X-0.0936（r=0.9972），线性范围为0.0996～9.9600 mg/L，Y肺=2.1673X-0.1376（r=0.9938），线性范围为0.0996～9.9600 mg/L，Y肾= 2.3735X-0.0684（r=0.9913），线性范围为0.0996～9.9600 mg/L，Y大肠=1.7886X-0.1082（r=0.9931），线性范围为0.0996～9.9600 mg/L，Y小肠=1.9305X-0.1358（r=0.9956），线性范围为0.0996～9.9600 mg/L，Y胃= 2.0599X+0.0363（r=0.9948）。本试验方法测定组织的日内精密度和日间精密度均RSD小于5%，准确度在85.0%～96.8%之间，在苍术素浓度为0.0996，0.996，9.96μg/mL的质控样品的回收率在82.3%～91.7%之间，RSD值在1.3%～4.3%之间，在1 h（室温）、24 h（室温）、30 d（-20℃）条件下组织样品浓度的RSD值均小于5%，均符合生物样品分析方法的规定，表明方法的可行性。

图1 样品HPLC色谱图

2.5 结果

大鼠血浆中苍术素的C-t曲线见图2，数据用DAS 2.0数据处理软件进行拟合处理，口服给药后的药物吸收符合非房室模型，主要药代动力学参数见表1。大鼠口服平胃散混悬液后，苍术素在大鼠体内的达峰时间Tmax为（2.5±0.5）h，最大浓度Cmax为1.764 mg/L，半衰期t1/2z为（5.723±1.316）h。

图2 苍术素在口服平胃散大鼠血浆中平均药-时曲线（n=6）

大鼠各组织中苍术素在2，3，8 h各组织分布见图3。由结果可知，大鼠灌胃平胃散混悬液2 h时组织中苍术素含量从高到低顺序是：胃＞小肠＞脾＞肺＞大肠＞心＞肾＞肝，3 h时组织中苍术素含量从高到低顺序是：胃＞小肠＞脾＞肺＞心＞肝＞肾＞大肠，8 h时组织中苍术素含量从高到低顺序是：脾＞大肠＞胃＞小肠＞肝＞心＞肺＞肾。

3 讨论

平胃散作为治疗湿困脾胃证的中药复方的基础，在临床广泛应用，目前相关报道多为临床和药效学应用研究，未有相关药代动力学方面的研究报道[5-8]。苍术素属聚乙烯炔类成分，为君药苍术的特征性成分，也是活性成分之一。有相关研究表明苍术素具有抗炎、利胆，防止胃损伤等作用[9-12]，故选用苍术素为测定指标，而苍术素醇、苍术素等聚乙烯炔类成分不稳定，在光照条件下易发生空间构型变化，生成异构体[13]，所以在整个实验和贮存过程中，要尽量避光处理。在沉淀蛋白的溶剂选择过程中，分别考察了3倍匀浆体积的甲醇和乙腈，结果用乙腈沉淀蛋白较完全，而且对内标物质及待测物质的测定均无干扰，故最终选择乙腈沉蛋白法。

表1 苍术素在口服平胃散大鼠的药代动力学统计矩参数（x±s，n=6）

图3 苍术素在口服平胃散大鼠各组织分布（x±s，n=5）

本实验拟选用蒽醌类化合物大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等为内标，分别按血浆样品处理方法操作及测定，结果大黄素的保留时间为10.3 min，易被相邻的峰干扰，而大黄酚极性较小，保留时间过长，故最终选用无内源性物质干扰，与待测成分分离度良好，保留时间适中的大黄素甲醚为内标化合物。

本实验曾分别以50%、80%、95%乙醇作为药物提取溶剂，采用相同的提取方法并定容到含生药量0.2 g/mL的药液，采用反相高效液相色谱法，测定各溶液中苍术素的含量，结果其浓度以95%的乙醇液提取苍术素含量最高，故选用95%乙醇为提取溶剂。

药代动力学数据结果表明，口服给药后的药物吸收符合非房室模型，由药时曲线可以看出，苍术素在6 h左右时第2次达峰，出现双峰现象。推测原因可能是由于苍术素在大鼠体内的吸收存在肝肠循环。大鼠组织分布测定结果表明，苍术素在心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠、胃等组织中均有分布，说明苍术素在大鼠体内分布比较广泛，在口服给药后2 h时，胃和小肠中苍术素含量很高，说明其为苍术素的主要吸收器官，经血液循环系统分布到其他各器官，说明此时主要进行吸收和分布过程；3 h时苍术素在小肠和胃中含量降低，除大肠外其他组织中苍术素含量均有上升，说明此时主要进行分布过程，8 h时，苍术素在大肠中含量明显上升，在脾、肺、肾等组织中含量下降，推测此时主要进行排泄过程。但在肝和心组织中含量无下降趋势，说明部分苍术素在肝中进行生物转化。

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Determination of Atractylodin of Pingwei Powder in rat plasma by HPLC-UV method and their application to a pharmacokinetic and a tissue distribution study

LI Guyue1,2LIU Jiaxin1,2CAI Qian3
1.The First Hospital of China Medical University,Liaoning Province,Shenyang 110000,China;2.Pharmacy College of China Medical University,Liaoning Province,Shenyang 110000,China;3.Pharmacy College of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Liaoning Province,Dalian 116600,China

ObjectiveTo study the blood concentration and tissue distribution of Atractylodin after oral administration of Pingwei Powder to rats.MethodsThe determination methods of Atractylodin in Pingwei Powder in rat plasma was established by HPLC,the blood concentration of Atractylodin after oral administration of Pingwei Powder at 0.17,0.33, 0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,6.0,8.0,12,24 h and tissue distribution in rats at 2,3,8 h were examined,the data was dealt with DAS 2.0 data processing software to calculate the pharmacokinetics parameters.ResultsAfter oral administration of Pingwei Powder,the Tmaxwas 2.5 h,Cmaxwas 1.765 mg/L,t1/2zwas 5.723 h,AUC was 11.789 mg/L·h.The second peak was appeared at 6 h.After oral administration of Pingwei Powder,Atractylodin was quickly distributed to main organs with the concentration difference,stomach>small intestine,spleen>liver,lung,heart>kidney,large intestine.ConclusionThis paper has developed a simple,specific,and rapid method of RP-HPLC with UV detection to determine Atractylodin of Pingwei Powder in ratplasma.

Pingwei Powder;Atractylodin;Pharmacokinetics;Tissuces distribution;HPLC

R285

A

1673-7210（2014）03（b）-0019-04

2013-10-12本文编辑：卫轲）

国家自然科学基金资助项目（编号81202919）；国家中医药管理局中医药行业科研专项项目（编号20110700 712）。