理脾化痰降脂片调脂疗效与LDLR多态性的相关性研究

蒋兴伟，曾益宏

(1.广东省深圳市罗湖区中医院，广东 深圳518001;2.广州中医药大学第一附属医院，广东 广州510405)

高脂血症是指人体内脂质代谢失常，血浆内脂质浓度超过正常高限的一种病症。低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein recepotor，LDL－R)对血脂代谢平衡起着重要的调节作用。编码该蛋白的基因位于19p13.1－p13.3，长45kb，由18个外显子和17个内含子组成，其约有300多种不同的基因病变。有研究表明［1］，LDLR－R的外显子13中编码第632位缬氨酸(val)的第三碱基有单核苷酸基因多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPS)，变异位点可被 AvaIl内切酶识别(GGTTC→GGTCC)。该SNPS与血清胆固醇水平密切相关。为探讨理脾化痰降脂片的调脂疗效与LDLR多态性的关系，我们对60例高脂血症患者，应用PCR技术进行初步研究，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象:所有观察病例均为2010年10月至2012年10月我院急诊科及门诊病人，均符合诊断标准，采用单盲法随机分为治疗组和对照组。其中治疗组35例，男20例，女15例，平均年龄51.2岁;轻度血脂升高者5例，中度血脂升高者14例，重度血脂升高者16例。对照组25例，男14例，女11例，平均年龄48.5岁;轻度血脂升高者4例，中度血脂升高者10例，重度血脂升高者11例。纳入、排除标准［2］。

1.2 研究方法

1.2.1 治疗方法:治疗组服用理脾化痰降脂片(由广州中医药大学附一院制剂室提供)。对照组服安慰剂(由广州中医药大学附一院制剂室提供，用淀粉制成，其颜色、剂型同理脾化痰降脂片)。两组病人服药均为3次/d，5片/次，饭前服，疗程为6周，受试者饮食及生活习惯与治疗前保持基本一致。

1.2.2 检验方法:①低密度脂蛋白受体(LDLR)基因多态性的测定:两组病人在治疗前后早晨空腹取血2 mL，常规苯酚氯仿法提取白细胞基因组DNA，然后用聚合酶链试反应 限制性片段长度多态性(PCR－RFLP)技术检测LDLR基因的多态性［3］。②血脂的测定:两组病人治疗前后清晨空腹抽血以酶法测定TC，TG，HDL－C，用聚乙烯硫酸沉淀法测定LDL－C。

1 2.3 数据处理:等位基因频率用卡方检验，治疗组与对照组血脂、脂蛋白含量比较用t检查，亚组间血脂、载脂蛋白含量差异用F检验。

2 结果

2.1 RFLPS分析 LDL－R基因外显子18扩增片段为2490 bp，LDL－R外显子13编码第632位缬氨酸可发生突变(GGTIC→GGTCC)，突变后的片段可被AVaII酶切。经酶切后得到144 bp和110 bp两条带为十等位基因，无酶切位点的只能得到254 bp一条区带为一等位基因。基因型可分为野生型纯合子－/－，突变型杂合子和突变型纯合子+/+3种，从表1中可以看出，－/－基因型患者居多(50%以上)，两组LDL－R基因型和等位基因的频率比较，差异无统计学意义(P ＞0.05)。

2.2 LDL－R基因多态性对血脂水平的影响，见表2。从表2、表3中可以看出，TC、TG、LDL－C水平有随着+/+，－/－基因型有依次递减的趋势。治疗组治疗前后血脂水平的比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，对照组治疗前后血脂水平的比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 两组LDL－R基因型及等位基因频率分布

表2 治疗组LDL－R基因多态性对血脂水平的影响 ( ± s，mmol/L)

表2 治疗组LDL－R基因多态性对血脂水平的影响 ( ± s，mmol/L)

治疗前治疗后基因型TC TG HDL－C LDL－C+/+ 6.02 ±1.18 20.15 ±0.76 1.06 ±0.32 3.62 ±0.4 TC TG HDL－C LDL－C 8 5.08 ±1.16 1.72 ±0.54 1.25 ±0.45 2.88 ±0.42－ /－ 5.78 ±1.09 2.05 ±0.80 1.12 ±0.32 3.42 ±0.45 4.86 ±1.04 1.68 ±0.52 1.32 ±0.42 2.67 ±0.38－ /－ 5.38 ±1.02 1.88 ±0.72 1.02 ±0.28 3.18 ±0.413.98 ±0.98 1.51 ±0.45 1.35 ±0.32 1.88 ±0.25

表3 对照组LDL－R基因多态性对血脂水平的影响 (± s，mmol/L)

表3 对照组LDL－R基因多态性对血脂水平的影响 (± s，mmol/L)

治疗前治疗后基因型TC TG HDL－C LDL－C+/+ 6.03 ±1.17 2.14 ±0.75 1.07 ±0.31 3.61 ±0.47 TC TG HDL－C LDL－C 6.02 ±1.18 2.14 ±0.75 1.08 ±0.32 3.60 ±0.48－ /+ 5.80 ±1.10 2.05 ±0.78 1.11 ±0.32 3.43 ±0.42 5.8 ±1.10 2.04 ±0.77 1.11 ±0.32 3.43 ±0.42－ /－ 5.38 ±1.03 1.87 ±0.72 1.03 ±0.28 3.20 ±0.405.38 ±1.03 1.88 ±0.72 1.03 ±0.27 3.18 ±0.41

3 讨论

LDL受体是一种细胞表面糖蛋白，LDL受体基因多态性可影响LDL－C、TC水平。AVaII位点位于LDL受体的第13个外显子，第632位密码子的第3个碱基C→T突变，产生1个AVaII内切酶识别位点(GGTTC→GGTCC)国内外大量文献提示AVaII基因多态性与胆固醇和低密度脂蛋白水平密切相关，可导致家族性高胆固醇血症［4］，本研究发现，在血脂异常患者中，TC、TG、LDL－C水平有随着+/+，－/+，－/－基因型有依次递减的趋势，理脾化痰降脂片对不同基因型患者都有降脂效果，但对－/－型基因患者较佳，能明显降低TC及LDL－C水平，其作用机制尚不十分明确，有待进一步研究。

［1］ 刘爱萍，詹思延，李立明.低密度脂蛋白受体基因多态性与高脂血症的关系［J］.中华流行病学杂志，2001，22(4):30 －33.

［2］ 蒋兴伟，许宏大，刘德健.理脾化痰降脂片治疗高脂血症36例小结［J］.湖南中医药导报，2004，2:3 －4.

［3］ YoungI Ahn，M.Hyas Kamboh，Chris top her E，et al Role of Common Genetic Polymorphisms in the LDL Receptor Gesse in Afecting Plasma Cholesterol Levele in the General Pipalation［J］.Arterioselerosis and Thrombosis，1994，14(5):663 －670.

［4］ 钱伟，钱志远.高胆固醇血症的危害与现行对策［J］.实用预防医学，2009，16(2):632 －634.