高效液相法测定大黄结康片中大黄素和大黄酚的含量

李娜+++王天婧

摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定大黄结康片中大黄素和大黄酚的含量。方法：采用高效液相色谱法；色谱柱为ODS-C18柱（4.6mm×150mm）流速1.0ml/min，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15），检测波长在254nm。结果：此方法线性关系良好，大黄素的线性范围为0.192～0.960ug （r=0.9997）、大黄酚的线性范围为0.416～2.080ug（r=0.9998），大黄素和大黄酚与其制剂的其它组分可完全分离其平均回收率为98.92%，RSD为1.97%，（n=5）。结论：本法简单、准确，重现性良好，可用于大黄结康片中大黄素和大黄酚的总量测定。

关键词：高效液相色谱法；大黄结康片；大黄素；大黄酚

大黄结康片是由大黄、莪术等七味中药组成的复方制剂。具有活血祛瘀，通络散结之功效，其中大黄的药理作用研究主要集中在蒽醌类化合物，有效成分为恩醌类衍生物，如大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等[1]。经多年临床应用，对手术后血瘀症有较好疗效[2]。为有效控制其质量，我们选择大黄中大黄素和大黄酚总量作为指标，建立了HPLC测定法[3-5]，其实验结果准确，重现好。

1 仪器、试剂及样品

日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外可见检测器，WDL-95工作站；CSF-1A超声波发生器（上海超声波仪器厂生产）；MA260S型电子分析天平（上海第二天平仪器厂）；索氏提取器。甲醇为色谱纯；磷酸、氯仿、硫酸均为分析纯。大黄素、大黄酚对照品，由中国药品生物制品检定所提供。阴性样品均按样品方法制备。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[6]

色谱柱ODS-C18柱4.6mm×150mm，流速1ml/min，柱温30℃，检测波长254nm，流动相甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）。

2.2 供试品溶液的制备

取本品内容物约0.4001g，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加甲醇25ml称定重量，回流提取30分钟，在称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续虑液5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5min，再加氯仿10ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿，洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取三次，每次约10ml，合并氯仿液，挥去氯仿，残渣加甲醇使溶解，移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45um）虑过，取续滤液，即得。

2.3 线性关系的确定

精密称取大黄素对照品4.8mg，大黄酚对照品5.2mg，分别置于50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素溶液1.0ml、大黄酚溶液2.0ml，置同一25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1ml含大黄素38.4ug，含大黄酚83.2ug的溶液，精密吸取此溶液5、10、15、20、25ul，分别注入高效液相色谱仪，测定，以进样量对峰面积作图。大黄素回归方程为Y=4018266.46X-5028.7，r=0.9997；大黄酚回归方程为y=5653247.6x-12000.3，r=0.9998。表明大黄素在0.192ug-0.960ug范围内，大黄酚在0.416ug-2.080ug范围内呈良好的线性关系。

2.4 样品含量测定

取不同批号供试品3批，按上述方法制备、测定、计算，结果见表1，HPLC图见图1。

2.5 空白实验

按处方比例及工艺自制不含大黄的空白样品，按供试品溶液的制备方法制备、上述条件测定。结果表明处方中其它药材不干扰大黄素、大黄酚总量的测定。

2.6 精密度试验

取供试品溶液相同量，重复进样5次，测得大黄素和大黄酚总量的相对标准偏差RSD=0.597%，测定结果见表2。

RSD=0.597%

2.7 重现性试验

取批号为20090602的大黄结康片样品5份，按前述方法制备供试品溶液，并测定大黄素和大黄酚的总量，测定结果见表3。

RSD=1.79%

2.8 回收率试验

精密称取大黄素和大黄酚对照品适量，加入到已测知大黄素和大黄酚总量的样品中，按前述方法操作，制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，计算回收率，测定结果见表4。

RSD=1.49%

3 讨论

3.1 分别取大黄素和大黄酚对照品溶液在200-600nm波长范围内扫描，结果大黄素在254nm、287nm、429nm波长处均有最大吸收，两者均在254nm、289nm、438nm，大黄酚在254nm、287nm、429nm波长处均有最大吸收，两者均在254nm波长处吸收最大，灵敏度高，可同时测定大黄素和大黄酚的含量，故选择测定波长为254nm，基线稳定，分离效果好。

3.2 按处方和工艺制备不含大黄的阴性对照样品，但供试液方法配制并按上述色谱条件测定，表明阴性对照液不干扰大黄素和大黄酚总量的测定。

3.3 本实验建立的方法，参考中国药典（2000年版一部），实验证明，本法灵敏度高，重现性好，其平均回收率为98.92%，可为大黄结康片质量控制提供一个有效质控指标。

参考文献

[1]江苏新医学院编.中药大词典.上海科学技术出版社[M].1986年.

[2]薛漓.HPLC法测定痔疮片中大黄素和大黄酚的含量[J].中国现代应用药学，2003，20（5）：404.

[3]陈勇，李耀华，陈新.HPLC法测定益肝口服液中大黄素和大黄酚含量的研究[J].中医药学刊，2003，21（8）：1334.

[4]赵莉，晁若冰.HPLC法测定大黄通便胶囊中大黄素和大黄酚[J].华西药学杂志，2003，18（4）：283.

[5]许乾丽，茅向军.HPLC法测定座疮愈中大黄素、大黄酚的含量测定[J].中国中药杂志，2003.28（1）：85.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2000年版一部18页.

摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定大黄结康片中大黄素和大黄酚的含量。方法：采用高效液相色谱法；色谱柱为ODS-C18柱（4.6mm×150mm）流速1.0ml/min，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15），检测波长在254nm。结果：此方法线性关系良好，大黄素的线性范围为0.192～0.960ug （r=0.9997）、大黄酚的线性范围为0.416～2.080ug（r=0.9998），大黄素和大黄酚与其制剂的其它组分可完全分离其平均回收率为98.92%，RSD为1.97%，（n=5）。结论：本法简单、准确，重现性良好，可用于大黄结康片中大黄素和大黄酚的总量测定。

关键词：高效液相色谱法；大黄结康片；大黄素；大黄酚

大黄结康片是由大黄、莪术等七味中药组成的复方制剂。具有活血祛瘀，通络散结之功效，其中大黄的药理作用研究主要集中在蒽醌类化合物，有效成分为恩醌类衍生物，如大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等[1]。经多年临床应用，对手术后血瘀症有较好疗效[2]。为有效控制其质量，我们选择大黄中大黄素和大黄酚总量作为指标，建立了HPLC测定法[3-5]，其实验结果准确，重现好。

1 仪器、试剂及样品

日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外可见检测器，WDL-95工作站；CSF-1A超声波发生器（上海超声波仪器厂生产）；MA260S型电子分析天平（上海第二天平仪器厂）；索氏提取器。甲醇为色谱纯；磷酸、氯仿、硫酸均为分析纯。大黄素、大黄酚对照品，由中国药品生物制品检定所提供。阴性样品均按样品方法制备。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[6]

色谱柱ODS-C18柱4.6mm×150mm，流速1ml/min，柱温30℃，检测波长254nm，流动相甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）。

2.2 供试品溶液的制备

取本品内容物约0.4001g，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加甲醇25ml称定重量，回流提取30分钟，在称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续虑液5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5min，再加氯仿10ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿，洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取三次，每次约10ml，合并氯仿液，挥去氯仿，残渣加甲醇使溶解，移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45um）虑过，取续滤液，即得。

2.3 线性关系的确定

精密称取大黄素对照品4.8mg，大黄酚对照品5.2mg，分别置于50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素溶液1.0ml、大黄酚溶液2.0ml，置同一25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1ml含大黄素38.4ug，含大黄酚83.2ug的溶液，精密吸取此溶液5、10、15、20、25ul，分别注入高效液相色谱仪，测定，以进样量对峰面积作图。大黄素回归方程为Y=4018266.46X-5028.7，r=0.9997；大黄酚回归方程为y=5653247.6x-12000.3，r=0.9998。表明大黄素在0.192ug-0.960ug范围内，大黄酚在0.416ug-2.080ug范围内呈良好的线性关系。

2.4 样品含量测定

取不同批号供试品3批，按上述方法制备、测定、计算，结果见表1，HPLC图见图1。

2.5 空白实验

按处方比例及工艺自制不含大黄的空白样品，按供试品溶液的制备方法制备、上述条件测定。结果表明处方中其它药材不干扰大黄素、大黄酚总量的测定。

2.6 精密度试验

取供试品溶液相同量，重复进样5次，测得大黄素和大黄酚总量的相对标准偏差RSD=0.597%，测定结果见表2。

RSD=0.597%

2.7 重现性试验

取批号为20090602的大黄结康片样品5份，按前述方法制备供试品溶液，并测定大黄素和大黄酚的总量，测定结果见表3。

RSD=1.79%

2.8 回收率试验

精密称取大黄素和大黄酚对照品适量，加入到已测知大黄素和大黄酚总量的样品中，按前述方法操作，制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，计算回收率，测定结果见表4。

RSD=1.49%

3 讨论

3.1 分别取大黄素和大黄酚对照品溶液在200-600nm波长范围内扫描，结果大黄素在254nm、287nm、429nm波长处均有最大吸收，两者均在254nm、289nm、438nm，大黄酚在254nm、287nm、429nm波长处均有最大吸收，两者均在254nm波长处吸收最大，灵敏度高，可同时测定大黄素和大黄酚的含量，故选择测定波长为254nm，基线稳定，分离效果好。

3.2 按处方和工艺制备不含大黄的阴性对照样品，但供试液方法配制并按上述色谱条件测定，表明阴性对照液不干扰大黄素和大黄酚总量的测定。

3.3 本实验建立的方法，参考中国药典（2000年版一部），实验证明，本法灵敏度高，重现性好，其平均回收率为98.92%，可为大黄结康片质量控制提供一个有效质控指标。

参考文献

[1]江苏新医学院编.中药大词典.上海科学技术出版社[M].1986年.

[2]薛漓.HPLC法测定痔疮片中大黄素和大黄酚的含量[J].中国现代应用药学，2003，20（5）：404.

[3]陈勇，李耀华，陈新.HPLC法测定益肝口服液中大黄素和大黄酚含量的研究[J].中医药学刊，2003，21（8）：1334.

[4]赵莉，晁若冰.HPLC法测定大黄通便胶囊中大黄素和大黄酚[J].华西药学杂志，2003，18（4）：283.

[5]许乾丽，茅向军.HPLC法测定座疮愈中大黄素、大黄酚的含量测定[J].中国中药杂志，2003.28（1）：85.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2000年版一部18页.

摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定大黄结康片中大黄素和大黄酚的含量。方法：采用高效液相色谱法；色谱柱为ODS-C18柱（4.6mm×150mm）流速1.0ml/min，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15），检测波长在254nm。结果：此方法线性关系良好，大黄素的线性范围为0.192～0.960ug （r=0.9997）、大黄酚的线性范围为0.416～2.080ug（r=0.9998），大黄素和大黄酚与其制剂的其它组分可完全分离其平均回收率为98.92%，RSD为1.97%，（n=5）。结论：本法简单、准确，重现性良好，可用于大黄结康片中大黄素和大黄酚的总量测定。

关键词：高效液相色谱法；大黄结康片；大黄素；大黄酚

大黄结康片是由大黄、莪术等七味中药组成的复方制剂。具有活血祛瘀，通络散结之功效，其中大黄的药理作用研究主要集中在蒽醌类化合物，有效成分为恩醌类衍生物，如大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等[1]。经多年临床应用，对手术后血瘀症有较好疗效[2]。为有效控制其质量，我们选择大黄中大黄素和大黄酚总量作为指标，建立了HPLC测定法[3-5]，其实验结果准确，重现好。

1 仪器、试剂及样品

日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外可见检测器，WDL-95工作站；CSF-1A超声波发生器（上海超声波仪器厂生产）；MA260S型电子分析天平（上海第二天平仪器厂）；索氏提取器。甲醇为色谱纯；磷酸、氯仿、硫酸均为分析纯。大黄素、大黄酚对照品，由中国药品生物制品检定所提供。阴性样品均按样品方法制备。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[6]

色谱柱ODS-C18柱4.6mm×150mm，流速1ml/min，柱温30℃，检测波长254nm，流动相甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）。

2.2 供试品溶液的制备

取本品内容物约0.4001g，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加甲醇25ml称定重量，回流提取30分钟，在称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续虑液5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5min，再加氯仿10ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿，洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取三次，每次约10ml，合并氯仿液，挥去氯仿，残渣加甲醇使溶解，移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45um）虑过，取续滤液，即得。

2.3 线性关系的确定

精密称取大黄素对照品4.8mg，大黄酚对照品5.2mg，分别置于50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素溶液1.0ml、大黄酚溶液2.0ml，置同一25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1ml含大黄素38.4ug，含大黄酚83.2ug的溶液，精密吸取此溶液5、10、15、20、25ul，分别注入高效液相色谱仪，测定，以进样量对峰面积作图。大黄素回归方程为Y=4018266.46X-5028.7，r=0.9997；大黄酚回归方程为y=5653247.6x-12000.3，r=0.9998。表明大黄素在0.192ug-0.960ug范围内，大黄酚在0.416ug-2.080ug范围内呈良好的线性关系。

2.4 样品含量测定

取不同批号供试品3批，按上述方法制备、测定、计算，结果见表1，HPLC图见图1。

2.5 空白实验

按处方比例及工艺自制不含大黄的空白样品，按供试品溶液的制备方法制备、上述条件测定。结果表明处方中其它药材不干扰大黄素、大黄酚总量的测定。

2.6 精密度试验

取供试品溶液相同量，重复进样5次，测得大黄素和大黄酚总量的相对标准偏差RSD=0.597%，测定结果见表2。

RSD=0.597%

2.7 重现性试验

取批号为20090602的大黄结康片样品5份，按前述方法制备供试品溶液，并测定大黄素和大黄酚的总量，测定结果见表3。

RSD=1.79%

2.8 回收率试验

精密称取大黄素和大黄酚对照品适量，加入到已测知大黄素和大黄酚总量的样品中，按前述方法操作，制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，计算回收率，测定结果见表4。

RSD=1.49%

3 讨论

3.1 分别取大黄素和大黄酚对照品溶液在200-600nm波长范围内扫描，结果大黄素在254nm、287nm、429nm波长处均有最大吸收，两者均在254nm、289nm、438nm，大黄酚在254nm、287nm、429nm波长处均有最大吸收，两者均在254nm波长处吸收最大，灵敏度高，可同时测定大黄素和大黄酚的含量，故选择测定波长为254nm，基线稳定，分离效果好。

3.2 按处方和工艺制备不含大黄的阴性对照样品，但供试液方法配制并按上述色谱条件测定，表明阴性对照液不干扰大黄素和大黄酚总量的测定。

3.3 本实验建立的方法，参考中国药典（2000年版一部），实验证明，本法灵敏度高，重现性好，其平均回收率为98.92%，可为大黄结康片质量控制提供一个有效质控指标。

参考文献

[1]江苏新医学院编.中药大词典.上海科学技术出版社[M].1986年.

[2]薛漓.HPLC法测定痔疮片中大黄素和大黄酚的含量[J].中国现代应用药学，2003，20（5）：404.

[3]陈勇，李耀华，陈新.HPLC法测定益肝口服液中大黄素和大黄酚含量的研究[J].中医药学刊，2003，21（8）：1334.

[4]赵莉，晁若冰.HPLC法测定大黄通便胶囊中大黄素和大黄酚[J].华西药学杂志，2003，18（4）：283.

[5]许乾丽，茅向军.HPLC法测定座疮愈中大黄素、大黄酚的含量测定[J].中国中药杂志，2003.28（1）：85.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2000年版一部18页.