HPLC法同时测定疏血通脉胶囊中3种皂苷的含量

2014-03-07 12:33兰保强伍小燕但旭辉吴玉强张青萍何乾超
药学研究 2014年3期
关键词:通脉皂苷人参

兰保强,刘 泰,伍小燕,但旭辉,曹 斌,吴玉强,张青萍,何乾超

(1.广西中医药研究院,广西南宁530022;2.广西中医药大学第一附属医院,广西南宁530023;3.广西中医药大学制药厂,广西南宁530023)

HPLC法同时测定疏血通脉胶囊中3种皂苷的含量

兰保强1,刘 泰2,伍小燕2,但旭辉3,曹 斌1,吴玉强2,张青萍2,何乾超2

(1.广西中医药研究院,广西南宁530022;2.广西中医药大学第一附属医院,广西南宁530023;3.广西中医药大学制药厂,广西南宁530023)

目的建立测定疏血通脉胶囊中三七有效成分含量的方法。方法采用高效液相色谱法,以Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长203 nm。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1进样量分别在1.02~10.20μg、0.95~9.50μg和0.35~3.50μg范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9),平均回收率分别为100.40%、98.90%和99.61%,RSD分别为1.71%、1.98%和1.69%(n=6)。结论所采用的方法操作简单,可靠,准确,可作为疏血通脉胶囊的质量控制方法。

疏血通脉胶囊;高效液相色谱法;人参皂苷Rg1;人参皂苷Rb1;三七皂苷R1

疏血通脉胶囊是广西名中医刘泰主任医师根据前人的经验,立足中医中风痰淤致病理论而拟定的缺血性脑中风的药物验方。由三七、薤白、地龙等药味组成,多年来临床观察表明其对老年脑梗死的神经功能缺损评分、中医证候疗效等方面均有改善,对缺血性中风急性期有很好的疗效,且不良反应小[1~3]。三七为方中名贵药材,三七总皂苷是其主要有效成分之一,可明显降低血清胆固醇和甘油三酯的含量,显著提高血清高密度脂蛋白胆固醇与胆固醇的比值[4]是反映本制剂功能主治的重要组分,因此选择三七主要皂苷活性成分作为本制剂的主要质量控制指标,本研究采用反向HPLC法,同时测定疏血通脉胶囊中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R13种主要活性成分的含量,为本制剂的质量控制奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-20A高效液相色谱仪,SPD-20A紫外检测器(日本岛津公司);威玛龙色谱工作站。

1.2 试药 人参皂苷Rg1对照品(批号:110703-201027)、人参皂苷Rb1对照品(批号:110704-201122)、三七皂苷R1对照品(批号:110745-200617)均由中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用。乙腈、甲醇为色谱纯,水为重蒸水。疏血通脉胶囊及缺三七的阴性对照样品由广西中医药研究院提供。

2 方法与结果

2.1 混合对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量,加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg10.390 mg、人参皂苷Rb10.394 mg、三七皂苷R10.097 mg的混合溶液,即得。

2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物,研细,取1.0 g,精密称定,精密加入甲醇50 mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率40 kHz)60 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.3 阴性样品溶液的制备 按疏血通脉胶囊制备方法制取缺三七的阴性样品,按“2.2”项下方法制得阴性样品溶液。

2.4 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱;检测波长为203 nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4 000。

表1 流动相梯度表

2.5 色谱行为 分别取混合对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μL注入高效色谱仪中,测定,结果3种皂苷分离度均大于1.5,阴性样品在人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1出峰位置均无吸收峰,表明处方中其他成分对测定无干扰。色谱图见图1。

2.6 方法学考察

2.6.1 线性关系考察 分别精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量,加甲醇溶解,分别稀释成系列浓度,并按“2.4”项下的色谱条件分别进样10μL,记录峰面积,以进样量(X,μg)为横坐标,以峰面积值(Y)为纵坐标,绘制标准曲线,结果各组对照品峰面积和浓度呈良好的线性关系,结果见表2。

图1 样品溶液的色谱图

表2 3种皂苷对照品的回归方程

2.6.2 精密度试验 精密吸取“2.1”项下的混合对照品溶液10μL,连续测定6次,6次测定所得人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1峰面积的RSD分别为0.64%、1.01%和0.79%(n=6)。

2.6.3 稳定性试验 对同一供试品溶液,在24 h内隔一定时间测定一次,共测定8次,结果8次测定供试品溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1峰面积的RSD分别为0.68%、0.66%、0.71%(n=8),试验表明,在24 h内,供试品溶液稳定。

2.6.4 重复性试验 对同一批样品,按“2.2”项下方法提取供试品溶液,平行提取6份,进样测定,结果供试品溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1的平均含量分别为15.88、16.30和4.82 mg·g-1,峰面积的RSD分别为1.61%、0.50%、1.88%(n=6)。

2.6.5 加样回收率试验 取已知含量的样品约0.5 g,共6份,精密称定,分别精密加入含人参皂苷Rg10.219 mg·mL-1、人参皂苷Rb10.188 mg·mL-1和三七皂苷R10.059 mg·mL-13种对照的混合甲醇溶液50 mL,按“2.2”项下方法处理得供试品溶液,分别进样测定,计算回收率。结果疏血通脉胶囊中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1的平均回收率分别为100.40%(RSD=1.71%)、98.90%(RSD=1.98%)和99.61%(RSD=1.69%)(n=6)。

2.7 样品测定 按上文拟订的含量测定方法,测定了本品3批样品的含量,结果见表3。

Sim ultaneous determ ination of three saponins in Shuxue Tongm ai Capsules by HPLC

LAN Bao-qiang1,LIU Tai2,WU Xiao-yan2,DAN Xun-hui3,CAO Bin1,WU Yu-qiang2,ZHANG Qing-ping2,HE Qian-chao2
(1.Guangxi Academy of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences,Nanning 530022,China;2.Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning 530023,China;3.Guangxi University of Chinese Medicine Pharmaceutical Factory,Nanning 530023,China)

ObjectiveTo developed amethod for the simultaneous determination of active ingredients in Shuxue Tongmai Capsules.MethodsHPLC was used with Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)Chromatographic column.Mobile phase consisted of acetonitrile-water with gradient elution at a flow rate of1.0 mL·min-1.The detection wavelength was 203 nm.ResultsThe linear range was 1.02~10.20μg for Ginsenoside Rg1,0.95~9.50μg for Ginsenoside Rb1and 0.35~3.50μg for Notoginsenoside R1(r=0.999 9),the average recovery were 100.40%,98.90%and 99.61%,respectively,with the corresponding RSD of 1.71%,1.98%and 1.69%,respectively.ConclusionThemethod was simple and rapid.Itwas suitable for quality control of Shuxue Tongmai Capsules.

Shuxue Tongmai Capsules;HPLC;Ginsnoside Rg1;Ginsnoside Rb1;Notoginsenoside R1

R927.2

:A

2095-5375(2014)03-0137-003

广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻No.11107009-1-11)、广西自然科学基金项目(No.2011GXNSFA018180)

兰保强,男,助理研究员,研究方向:中药药物及其制剂,E-mail:lanbaoqiang2008@126.com

刘泰,男,主任医师,研究方向:脑血管疾病的中西医结合临床研究,Tel:0771-5869102,E-mail:liutai590216@163.com

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