HPLC法测定维生素B6乳膏中维生素B6的含量

王 慧

（洛阳市食品药品检验所，河南洛阳471023）

HPLC法测定维生素B6乳膏中维生素B6的含量

王 慧

（洛阳市食品药品检验所，河南洛阳471023）

目的建立高效液相色谱法测定维生素B6乳膏中维生素B6的含量。方法采用Purospher STAR RP－18e色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相为0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节pH值至3.0）－甲醇（85∶15）；柱温为30℃；流速为1.0 mL·min－1；检测波长为291 nm。结果维生素B6在0.021 6～0.216mg·mL－1（r＝0.999 8）的浓度范围内呈良好的线性关系；维生素B6的平均加样回收率为98.57%（RSD＝0.72%）。结论该方法简便、准确，结果稳定，可为维生素B6乳膏的质量评价提供依据。

维生素B6乳膏；维生素B6；含量；高效液相色谱法

维生素B6乳膏［批准文号：豫食药监注制（2004）030031号］是以维生素B6和乳膏基质混合而成的医院制剂，临床主要用于痤疮、酒渣鼻、脂溢性湿疹、皱皮症。为提高该制剂的质量标准，更好的控制制剂质量，本文采用HPLC法测定维生素B6乳膏中维生素B6的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 美国DIONEX U3000色谱系统；Chromeleon 7.10色谱工作站；岛津UV－2401PC紫外－可见分光光度计；KQ5200DE型数控超声波清洗器；Precisa 92SM－202A－DR电子分析天平。

1.2 试药 维生素B6对照品（批号：100116－200502，供含量测定用），购自中国药品生物制品检定所。维生素B6乳膏（批号：20130223、20130308、20130412，规格：20 g∶200 mg），由河南科技大学第二附属医院制剂室提供。甲醇为色谱纯；水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：Purospher STAR RP－18e（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节pH值至3.0）－甲醇（85∶15）；流速：1.0 mL·min－1，检测波长：291 nm；柱温：30℃；进样量：10μL。在此条件下，理论塔板数不低于4 000。

2.2 对照品溶液的制备 取维生素B6对照品适量，精密称定，加盐酸溶液（9→1 000）使溶解，并稀释制成1.3 mg·mL－1的维生素B6对照品储备液。精密吸取对照品储备液5 mL，置50 mL量瓶中，加盐酸溶液（9→1 000）稀释制成0.13 mg·mL－1的维生素B6对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取本品约2.5 g，精密称定，加水温热并搅拌，充分溶解，用盐酸溶液（9→1 000）80mL移至200mL量瓶中，超声25min使维生素B6溶解，放冷，加盐酸溶液（9→1 000）稀释至刻度，摇匀，过微孔滤膜（0.45μm），即得。

2.4 阴性对照溶液的制备 取乳膏基质适量，按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.5 干扰试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，在“2.1”色谱条件下进行测试，结果显示，乳膏基质对维生素B6的含量测定无干扰。

2.6 线性关系考察 精密称取维生素B6对照品10.82 mg，置25 mL量瓶中，加盐酸溶液（9→1 000）稀释至刻度，摇匀，即得标准储备液。精密吸取标准储备液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL，分别置10 mL量瓶中，用盐酸溶液（9→1 000）稀释至刻度，摇匀，分别配制成浓度为0.021 6、0.043 3、0.086 6、0.129 8、0.216 0 mg·mL－1的标准溶液。精密吸取上述溶液各10μL，按上述色谱条件测定峰面积，以维生素B6对照品浓度（X）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y＝327.92X＋0.023 6，r＝0.999 8。表明维生素B6在0.021 6～0.216 mg·mL－1范围内线性关系良好。

2.7 精密度试验 精密吸取浓度为0.13 mg·mL－1的维生素B6对照品溶液10μL，按上述色谱条件，重复进样6次，测得平均峰面积RSD为0.67%，表明仪器精密度良好。

2.8 稳定性试验 精密吸取“2.3”项下的供试品溶液10μL，分别于配制后0、2、4、6、8、10、12 h进样，测得平均峰面积RSD为1.02%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.9 重复性试验 取同一批号维生素B6乳膏（批号：20130223）6份，按“2.3”项下平行制备供试品溶液，各精密吸取10μL，按上述色谱条件测定。样品中维生素B6的平均含量为10.07 mg·g－1，RSD为0.32%。

2.10 加样回收率试验 取已知含量的维生素B6乳膏（10.07 mg·g－1）6份，每份约1.3 g，精密称定，用微量加样移液枪分别精密加入“2.2”项下的对照品储备液8、10、12 mL，混合均匀后，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，进样10μL，测定回收率。平均加样回收率为98.57%，RSD为0.72%。

2.11 样品含量测定 分别取不同批号的维生素B6乳膏，每批2份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行分析测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算维生素B6的含量，结果见表1。

表1 维生素B6乳膏含量测定结果（mg·g－1，n＝2）

3 讨论

3.1 系统适应性试验的考察 参照相关文献［1，2］，选择0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节pH值至3.0）－甲醇（85∶15）为流动相，在291 nm的波长处测定，结果主成分峰形良好，洗脱时间适中，色谱图基线稳定，故选其作为流动相及检测波长。

3.2 提取溶剂、提取方法的选择 在提取溶剂的选择上，首先采用的是0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节pH值至3.0）－甲醇（85∶15）［1］，由于乳膏基质中含有硬脂酸、凡士林、单硬脂酸甘油酯以及尼泊金甲酯等成分，这些成分易溶于有机溶剂而对实验结果造成干扰，而维生素B6又是一种水溶性维生素，易溶于水及乙醇，且在酸液中稳定，故最后采用先用少量水搅拌使维生素B6充分溶解，再用盐酸溶液（9→1 000）转移至量瓶稀释溶解的方法。经试验表明，此方法对水溶性的维生素B6提取效率高，维生素B6也很稳定，经过滤，乳膏基质基本被滤除，对实验结果无干扰。

在提取方法的选择上，比较了超声和水浴两种提取方法。试验结果表明，维生素B6遇热不稳定，故舍弃水浴的提取方法。同一批号维生素B6乳膏（批号：20130223）按“2.3”项下方法除超声时间分别为10、15、20、25和30 min外，其他步骤平行操作，含量测得结果分别为9.22、9.64、9.88、10.07、10.06。因此，采用超声25 min提取法提取维生素B6乳膏中的维生素B6。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社2010：899－900.

［2］乜红磊，张磊.HPLC法测定复方硫唑乳膏中甲硝唑含量［J］.齐鲁药事，2012，31（8）：468－469.

Determ ination of Vitam in B6in Vitam in B6Cream by HPLC

WANG Hui
（Luoyang Institute for Food and Drug Control，Luoyang 471023，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of Vitamin B6in Vitamin B6Cream.M ethodsThe HPLC was performed on a Purospher STAR RP－18e analytical column（4.6 mm×250 mm，5 μm），and themobile phase consists of0.04%pentance sulfonic acid sodium solution（adjusting pH to3.0 by glacial acetic acid）－methanol（85∶15）at the column temperature of 30℃.The flow rate was 1.0 mL·min－1and the detection wavelength was 297 nm.ResultsThe linear range of vitamin B6was 0.021 6～0.216 mg·mL－1（r＝0.999 8）.The average recovery was 98.57%（RSD＝0.72%）.ConclusionThemethod was sensitive，accurate and reliable for the quality control and evaluation of Vitamin B6Cream.

Vitamin B6Cream；Vitamin B6；Determination；HPLC

R927.2

A

2095－5375（2014）02－0094－002

王慧，女，研究方向：药物分析，E－mail：wang.hui83＠163.com