HPLC法测定金菊五花茶颗粒中芦丁和蒙花苷的含量

舒金富，罗红梅

（衢州市食品药品检验所，浙江衢州324000）

HPLC法测定金菊五花茶颗粒中芦丁和蒙花苷的含量

舒金富，罗红梅

（衢州市食品药品检验所，浙江衢州324000）

目的建立金菊五花茶颗粒中芦丁和蒙花苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱E-clipse XDB－C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm），流动相为甲醇（A）－乙腈（B）－0.1%磷酸溶液（C），梯度洗脱，流速1.0 mL·min－1；检测波长334 nm；柱温30℃。结果芦丁线性范围在21.22～339.58μg，r＝0.999 4，样品加样平均回收率为100.0%（RSD＝1.10%）；蒙花苷线性范围在1.75～28.08μg，r＝0.999 3，样品加样平均回收率为99.2%（RSD＝1.17%）。结论该方法简便、准确，可用于制剂的质量控制。

高效液相色谱法；金菊五花茶颗粒；芦丁；蒙花苷；含量测定

金菊五花茶颗粒是由金银花、木棉花、葛花、野菊花、槐花、甘草等组成，具有清热利湿，凉血解毒，清肝明目的功效。芦丁为槐花的主要成分，蒙花苷为野菊花的主要成分，因此有必要对此两种成分进行质量控制，本文采用高效液相色谱法测定其芦丁和蒙花苷的含量，进行了质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪，二极管阵列检测器（DAD）；Mettler XP205电子天平；超声仪（250 W，华南超声设备厂）。

1.2 药品与试剂 芦丁对照品（批号：100080－200707，含量90.5%），蒙花苷对照品（批号：111528－2000606，含量86.7%）、均由中国药品生物制品检定所供；甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇为分析纯，水为屈臣氏蒸馏水；金菊五花茶颗粒样品3批（广东嘉应制药股份有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Eclipse XDB－C18（4.6 mm×150mm，5μm）；柱温30℃；流动相：甲醇（A）－乙腈（B）－0.1%磷酸溶液（C），梯度洗脱［0～4 min，4%（A）：14%（B）：82%（C）；4～10 min，7%（A）：20%（B）：73%（C）；10～28 min，10%（A）：25%（B）：65%（C）］；流速1.0 mL·min－1；检测波长334 nm；进样量20μL。

2.2 对照品溶液制备 精密称取芦丁对照品58.62 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照贮备液（1）。精密称取蒙花苷对照品10.12 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照贮备液（2）。精取上述两种对照品贮备液各2 mL，置与50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取样品约2 g，置100 mL量瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声30 min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液制备 取除去槐花、野菊花以外的其他药材，按金菊五花茶颗粒生产过程所得阴性样本，再按样品制备方法制成阴性溶液。

图1 金菊五花茶的色谱图

2.5 线性关系考察 分别各精密吸取“2.2”项下的对照品贮备液（1）、（2）各0.25、0.50、1.0、2.0、4.0 mL分别置于25 mL量瓶中，加甲醇稀至刻度，摇匀，各取20μL注入液相色谱仪中测定，以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，进行线性回归。

芦丁回归方程为Y＝17.197X－85.006 r＝0.999 4，可见芦丁在21.22～339.58μg范围内线性关系良好。

蒙花苷回归方程为Y＝41.818X＋11.055，r＝0.999 3，可见蒙花苷在1.75～28.08μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液20μL重复进样6次，记录对照品峰面积，计算芦丁RSD为1.65%，蒙花苷RSD为1.46%，表明本实验精密度良好。

2.7 稳定性试验 取供试品溶液，在上述色谱条件下，分别在溶液制备后的0、1、3、5、7、9 h进行测定，以峰面积计算芦丁RSD为1.58%，蒙花苷RSD为1.75%，表明供试品溶液在9 h内基本稳定。

2.8 重现性实验 取同一批样品6份，精密称定，按上述供试液的制备方法和色谱条件进行测定，芦丁及蒙花苷的RSD分别为1.36%和1.51%，结果表明本方法的重现性良好。

2.9 加样回收率实验 精密称取已知含量的同一批样品9份，每份约1 g，按低、中、高三个剂量分别各加入0.8、1.0、1.2 mL的上述两种对照品贮备液，每个剂量平行3次，按“2.3”项下制成供试品溶液，测定其中的芦丁和蒙花苷的含量，并计算回收率。芦丁平均回收率为100.0%，RSD为1.10%，蒙花苷平均回收率为99.2%，RSD为1.17%。结果见表1，2。

表1 芦丁回收率实验考察结果

表2 蒙花苷回收率实验考察结果

2.10 样品的含量测定 取样品3批，按照供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，分别精取对照品溶液和供试品溶液和20μL，按上述色谱条件测定蒙花苷和芦丁的含量，结果见表3。

表3 样品的含量测定

3 讨论

3.1 在流动相的选择中，采用了甲醇－0.1%磷酸溶液，乙腈－0.1%磷酸溶液，甲醇－乙腈－0.1%磷酸溶液，甲醇－0.2%磷酸溶液等不同梯度不同流动相组成的实验中，结果采用甲醇－乙腈－0.1%磷酸溶液的本方法梯度较为合适。

3.2 对芦丁和蒙花苷分别进行紫外扫描两者的最大吸收波长分别为325 nm（蒙花苷）和359 nm（芦丁），考虑蒙花苷在325 nm和334 nm测得响应值变化不大而芦丁的含量比蒙花苷大近20倍，因此选择334 nm作为测定波长。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：295.

［2］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂（第十册）［S］.Z10－92.

［3］王琳.HPLC测定金菊五花茶冲剂中芦丁的含量［J］，中国实用医药.2007，2（21）：50－51.

Determ ination of rutin and linarin in Jinju W uhuacha Granules by HPLC

SHU Jin-fu，LUO Hong-mei
（Quzhou Institute for Food and Drug Control，Quzhou 324000，China）

ObjectiveTo establish amethod for determining the contents of rutin and linarin in Jinju Wuhuacha Granules by HPLC.M ethodsAn Eclipse XDB－C18column（4.6mm×150mm，5μm）was used withmethanol（A）－acetonitrile（B）－0.1%phosphoric acid（C）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min－1，and the UV－detection wavelength was set at 334 nm，column temperature at30℃.Resu ltsThe calibration curves for rutin between 21.22 and 339.58μg（r＝0.999 4）and for linarin between 1.75 and 28.08μg（r＝0.999 3）were linear.Recoverieswere 100.0% with RSD 1.10%for rutin and 99.2%with RSD 1.17%for linarin.ConclusionThemethod was simple and reliable for the quality control of Jinjuwuhuacha Granules.

HPLC；Jinju Wuhuacha Granules；Rutin；Linarin；Quantitative determination

R927.2

A

2095－5375（2014）02－0080－003

舒金富，男，研究方向：药品检验，E－mail：qzsjfu＠163.com