抗凝剂对布氏杆菌病检测结果的影响

蒙文娟

广西壮族自治区融水县动物疫病预防控制中心，广西融水 545300

在融水县2013年家畜布氏杆菌病血清流行病学调查中，某乡镇送检的猪、牛、羊血样出现了在虎红平板凝集试验检测中100%为阳性、试管凝集试验中100%为阴性的现象。针对这两种试验结果的差异，笔者经过分析，怀疑是该乡兽医站技术人员使用含肝素钠的真空采血管采样造成的。为进一步了解是否因抗凝剂对布氏杆菌病虎红平板凝集试验结果造成了假阳性，即血浆、血清对布氏杆菌病虎红平板凝集试验检测结果是否有影响，笔者进行了以下对比试验。

1 材料与方法

1.1 采样材料

一次性P E注射器（无抗凝剂）、真空采血管（含肝素钠）和静脉采集管。

1.2 被检血清

某羊场20只成年羊，采用颈静脉采血。

血清样品（A 01-A 20）：用一次性P E注射器从羊只颈静脉处抽取血液5m L，常温静置2h自然凝固，经离心沉淀，取上清液并编号。

血浆样品（B 01-B 20）：用真空采血管从羊只颈静脉处抽取血液5m L，离心沉淀，取上清液并编号。

将分离好的血清和血浆样品于-4℃冷藏保存，次日检测。

1.3 诊断液

布鲁氏菌病标准阳性血清、阴性血清，布鲁氏菌病虎红平扳凝集抗原，以及布鲁氏菌病试管凝集抗原均购自青岛易邦生物工程有限公司。

1.4 虎红平板凝集试验（RBPT）

取被检样品30μL分别置于洁净玻璃片上，各加布氏杆菌病虎红平板凝集抗原悬液30μL，搅拌混匀至直径大小为1c m，然后摇动1～2m i n，于4m i n内在黑色背景下观察结果。阴、阳性血清对照试验成立，即当阴性血清对照不凝集、阳性血清对照出现凝集时，方可对被检样品进行判定。结果判定标准：“++++”，凝集块呈菌丛状，凝集块间液体明显清亮；“+++”，凝集反应较强；“++”，形成较明显卷边，凝集块间液体稍清亮；“+”，稍有凝集，稍有卷边形成，凝集物间液体呈红色；“-”，无凝集，呈均匀粉红色。将4m i n内出现肉眼可见的凝集现象判为阳性（+），无凝集现象、呈均匀粉红色者判为阴性（-）。对出现阳性反应的需作试管凝集试验检测。

1.5 试管凝集试验（SAT）

被检血清样品分别作 1:25、1:50、1:100、1:200稀释，同时设阴、阳性血清对照，阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清相同；阳性血清需稀释到原有滴度，加抗原的方法与被检血清相同。

将0.5m L 1:20稀释的抗原加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，置36～37℃作用24h，取出观察结果并记录。

结果判定标准：按各试管上层液体清亮度判读。“++++”，菌体完全凝集，100%下沉，上层液体100%清亮；“+++”，菌体几乎完全凝集，上层液体75%清亮；“++”，菌体凝集显著，液体50%清亮；“+”，凝集物有沉淀，液体 25%清亮；“-”，凝集物无沉淀，液体均匀浑浊。以产生50%凝集的血清最大稀释度为受检血清的效价。待检血清在1:50（++）以上为阳性，1:25（+）为可疑。

2 结果与分析

血清样品A 01-A 20分别进行布氏杆菌病RBPT、布氏杆菌病SAT的检测结果：20份均为阴性、20份均为阴性；血浆样品B 01-B 20分别进行布氏杆菌病RBPT、布氏杆菌病SAT的检测结果为：20份均为阳性、20份均为阴性。

3 讨 论

1）本试验中，血浆样品在布氏杆菌病RBPT检测中100%呈阳性、而在SAT检测中100%呈阴性的原因，可能是由血清与血浆中的部分差异成分与虎红平板凝集抗原发生非特异性凝集反应造成的。血浆和血清的主要区别是血浆含有纤维蛋白原和少量凝血因子，而血清不含纤维蛋白原和较多的凝血产物[1]。

2）虽然本次试验进行对比检测的样品数量不多，但RBPT检测出现100%阳性率、SAT检测出现0%阳性率的试验结果，对我们的检测工作具有一定的提示意义。今后在布氏杆菌病检测中应避免使用含抗凝剂的材料进行血液采集，避免对养殖户和检测工作造成影响。

3）布氏杆菌病的血清学诊断方法种类较多，每种方法的准确率都不是100%，我们在实际检疫中应使用两种或两种以上的方法相互佐证，最后再做出诊断。

4）布氏杆菌病是一种人畜共患病，主要采取的防治措施是检疫净化。布氏杆菌病的防控除了做好日常监测、引种家畜的隔离观察、消毒、抽样检测等综合措施，还应该严格检疫操作步骤，尽量做到少误差、零错误，这样才能消除传染源、切断传播途径，最终保护人们的健康和养殖业的可持续发展。

[1]血浆在血液中是如何代谢的？[J].健康必读，2013（11）：14.http://www.cqvip.com/QK/81485A/201311/48470070.htmL