叶下珠化学成分研究

祖鲁宁，杨 帆,，李大同，栾路军，孟庆国 (. 中国人民解放军404医院，山东 威海 6400；.烟台大学药学院，山东 烟台 64005)

叶下珠(Phyllanthusurinaria)为大戟科叶下珠属植物，主要分布于我国长江以南地区。叶下珠全株，微苦、甘、酸，性凉，有清热利尿、明目、消积的功能。常用于治疗腹泻、下痢、尿路感染、肾炎水肿和黄疸性肝炎等疾病。由于在同属植物中发现了生物碱、黄酮、木质素、鞣质、萜类、甾体、有机酸等化学成分，并且筛选出了具有抗肿瘤，治疗肝炎，抗菌消炎等药理活性的活性成分[1]。经过对叶下珠乙醇提取部位系统分离，从中分离鉴定了9个化合物(图1)。

1 仪器与材料

熔点采用毛细管法在Yamato model MP-21型熔点测定仪上测定，温度未经校正。核磁共振氢谱用Bruker Spectmspin AC-P600型核磁共振仪测定。柱色谱用硅胶100～200目、200～300目，薄层色谱用硅胶H，HSGF-254 TLC板(烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂)，葡聚糖凝胶Sephadex LH-20。所用试剂均为市售分析纯。药材叶下珠经第二军医大学药学院吴秋业教授鉴定。

2 提取与分离

叶下珠全草10 kg，用75%乙醇回流提取，得到提取物浓缩的浸膏1.5 kg。浸膏依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，浓缩得到各萃取部分浸膏。氯仿部分用硅胶拌样(100～200目)，依次用石油醚-乙酸乙酯，氯仿-甲醇梯度洗脱，分别得到A、B、C、D，E5个部分。B、C、D部分分别经过硅胶柱色谱分离(石油醚-乙酸乙酯，氯仿-甲醇梯度洗脱)，Sephadex LH-20柱色谱分离(氯仿-甲醇=1:1洗脱)，制备薄层方法，得到化合物1～9，结构见图1。

3 结构鉴定

化合物1：白色针状结晶(氯仿-甲醇)；mp: 238.0～240.7 ℃；1H-NMR (600 Hz, CD3OD-d6) δ: 7.06 (2H, s, H-2, 6)；13C-NMR (150 Hz, CD3OD-d6) δ: 169.7 (C-1′), 147.3 (C-3, C-5), 141.3 (C-4), 125.6 (C-1), 115.2 (C-2, C-6)。与已知物没食子酸对照，Rf值相同，混合熔点不下降。由以上结果确定此化合物为没食子酸(gallic acid)。

化合物2：无色针状结晶(甲醇)；mp: 152.5～154.7 ℃;1H-NMR (600 Hz, CD3OD-d6) δ: 7.90 (2H, s, H-2, 6), 4.35 (2H, q, H-2′), 1.25 ( 3H, t, H-3′);13C-NMR (150 Hz, CD3OD-d6) δ : 167.5 (C-1′), 147.5 (C-3, 5), 141.2 (C-4), 121.7 (C-1), 110.8 (C-2, 6), 61.8 (C-2′), 15.2 (C-3′), 38.0 (C-6)，以上数据与陈云等[2]报道的绿原酸一致，故确定化合物为绿原酸。

化合物3：黄色粉末(甲醇)；1H-NMR (600 Hz, DMSO-d6) δ: 7.69 (1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 7.61 (1H, dd,J=2.0 Hz, 8.0 Hz, H-6′), 6.93 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5′), 6.35 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.09 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6);13C-NMR (150 Hz, DMSO-d6) δ: 181.6 (C-4), 163.7 (C-7), 161.2 (C-2), 161.0 (C-9), 158.5 (C-5), 149.5 (C-4′), 145.2 (C-3′), 120.8 (C-1′), 118.3 (C-6′), 115.2 (C-5′), 113 (C-2′), 105.3 (C-3), 103.0 (C-10), 98.4 (C-6), 94.5 (C-8);13C-NMR谱中可见所有碳信号均分布于芳香区, 其中含有一个不饱和羰基信号，5个次甲基信号和9个季碳信号，由此推测此化合物可能是黄酮类化合物。上述数据与马美民等[3]报道的槲皮素的数据一致，故化合物被鉴定为槲皮素。

化合物4：淡黄色粉末(氯仿-甲醇)；mp: 187.3～189.5 ℃; 盐酸镁粉反应阳性，三氯化铝反应阳性，推测化合物为黄酮类化合物；1H-NMR (600 Hz, DMSO-d6) δ: 7.66 (1H, d,J=2.1 Hz, H-2′), 7.62 (1H, dd,J=2.1 Hz, 8.4 Hz, H-6′), 6.86 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5′), 6.39 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.14 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6), 5.47 (1H, d,J=8.0 Hz), 4.73 (1H, s, rha H-1);13C-NMR (150 Hz, DMSO-d6) δ: 180.2 (C-4), 164.7 (C-7), 160.2 (C-2), 159.3 (C-9), 158.5 (C-5), 149.5 (C-4′), 145.2 (C-3′), 135.3 (C-3), 120.2 (C-1′), 116.0 (C-6′), 114.7 (C-5′), 112.2 (C-2′), 103.5 (C-10), 96.4 (C-6), 94.1 (C-8); glc: 105.2 (C-1), 76.6 (C-2), 78.5 (C-3), 71.8 (C-4), 71.6 (C-5), 66.4 (C-6); rha: 101.7 (C-1), 73.5 (C-2), 74.2 (C-3), 73.9 (C-4), 68.2 (C-5), 17.9 (C-6); 上述数据与孟泽彬[4]和王银朝等[5]报道的芸香苷的数据一致，故化合物被鉴定为芸香苷。

化合物5：白色针状结晶(甲醇)；mp: 165.3～169.5 ℃;1H-NMR (600 Hz, CDCl3-d6) δ: 5.37 (1H, t, H-6), 5.27 (1H, m, H-22), 5.16 (1H, m, H-23), 3.34 (1H, m, H-3);13C-NMR (150 Hz, CDCl3-d6) δ: 37.5 (C-1), 30.2 (C-2), 71.6 (C-3), 43.0 (C-4), 142.3 (C-5), 121.7 (C-6), 32.2 (C-7), 31.8 (C-8), 50.1 (C-9), 36.6 (C-10), 22.8 (C-11), 40.8 (C-12), 42.5 (C-13), 55.9 (C-14), 24.2 (C-15), 30.5 (C-16), 56.0 (C-17), 12.4 (C-18), 20.0 (C-19), 41.9 (C-20), 20.8 (C-21), 141.2 (C-22), 128.5 (C-23), 51.4 (C-24), 30.6 (C-25), 20.8 (C-26), 31.4 (C-27), 25.6 (C-28), 21.6 (C-29); TLC展开后紫外灯下无荧光，浓硫酸/乙醇显紫红色，与豆甾醇标准品在多种溶剂体系做TLC对照，Rf值相同，确定化合物5为豆甾醇，参见张雁冰等[6-8]报道。

化合物6：淡黄色粉末(甲醇)；盐酸镁粉反应阳性，三氯化铝反应阳性，推测化合物为黄酮类化合物；1H-NMR (600 Hz, CD3OD) δ: 7.25 (2H, d,J=8.4Hz, H-2′, H-6′), 6.70 (1H, d,J=2.4 Hz, H-8), 6.63 (2H, d,J=8.4 Hz, H-3′, H-5′), 6.22 (1H, d, H-6);13C-NMR (150 Hz, CD3OD) δ: 115.4 (C-2), 146.2 (C-3), 178.5 (C-4), 160.4 (C-5), 101.4 (C-6), 163.4 (C-7), 113.2 (C-8), 140.3 (C-9), 112.5 (C-10), 132.0 (C-1′), 130.5 (C-2′, 6′), 115.4 (C-3′, 5′), 155.9 (C-4′); 与山奈酚标准品在3种溶剂体系做TLC对照，Rf值相同，确定化合物6为豆甾醇，参见吴秋月等[9]报道。

化合物7：白色粉末；mp: 207.2～209.0 ℃;1H-NMR (600 Hz, CDCl3-d6) δ: 7.43 (1H, d,J=16.2 Hz, H-β), 7.06 (1H, s, H-2′), 6.96 ( 1H, d,J=7.8 Hz, H-6′) , 6.74 (1H, d,J=7.8 Hz, H-5′) , 6.21(1H, d,J=16.2 Hz, H-α), 5.16 ( 1H, s, H-3), 3.46 (1H, d,J=7.8 Hz, H-5), 3.89 (1H, s, H-4) , 1.79 (4H, m, H-2, 6);13C-NMR (150 Hz, DMSO-d6) δ : 176.5(C-7), 166.3 (C-8), 148.6 (C-4′), 145.8 (C-3′), 144.6 (C-β), 125.4 (C-1′), 121.7 (C-6′), 115.8 (C-2′), 114.7 (C-5′), 114.5 (C-α), 75.2 (C-1), 73.3(C-4), 71.6 (C-3), 71.4 (C-5), 39.5 (C-2), 38.0 (C-6),以上数据与陈德昌[10]报道的绿原酸一致结果，故确定化合物7为绿原酸。

化合物8：1H-NMR (600 Hz, DMSO-d6) δ: 8.25～9.80 (2H, br, OH), 6.96 (2H, s, H-2, 6), 4.19～4.24 (2H, m, H-1″), 1.26～1.30 (3H, t, H-2″);13C-NMR (150 Hz, DMSO-d6) δ: 169.3 (C-1′), 152.3 (C-3,5), 142.9 (C-4), 125.7 (C-1), 105.4 (C-2,6), 69.5 (C-1″), 16.5 (C-2″); FeCl3乙醇溶液显色反应呈阳性，且碳谱显示为对称结构，由此确定化合物8为4-乙氧基没食子酸。

化合物9：黄色粉末(氯仿-甲醇)；mp: 231～233 ℃; 盐酸-镁粉反应阳性，三氯化铝反应阳性，推测化合物为黄酮类化合物；1H-NMR (600Hz, DMSO-d6) δ: 11.94 (1H, s, 5-OH), 9.70 (1H, s, 7-OH), 7.50 (1H, dd,J=8.4, 2.1Hz, H-6′), 7.45 (1H, d,J=2.1 Hz, H-2′), 6.89 (1H, d,J=8.4 Hz, H-6′), 6.67 (1H, s, H-8), 6.60 (1H, s, H-3), 4.12, 3.84, 3.70 (9H, s, 3×OCH3);13C-NMR (150 Hz, DMSO-d6) δ: 182.1 (C-3), 163.6 (C-1), 157.5 (C-7), 157.1 (C-9), 152.5 (C-5), 149.3 (C-3′), 149.0 (C-4′), 131.8 (C-6), 122.1 (C-1′), 121.0 (C-6′), 111.7 (C-5′), 108.8 (C-2′), 106.5 (C-4), 104.6 (C-2), 95.6 (C-8), 60.6 (6-OCH3), 56.1 (3′,4′-OCH3);上述数据与文献[11]报道的数据一致，确定化合物8为异泽兰黄素。

4 讨论

作者对叶下珠提取物的氯仿部位进行了化学成分的系统分离，鉴定了9个化合物。其中，化合物7～9为首次从该植物中分离得到化合物(1)、 (2)、(8) 为植物多酚类化合物，而植物多酚多具有抗菌消炎的活性，这可能也是叶下珠具有抗菌消炎作用的原因。

【参考文献】

[1] 万振先, 周国平, 易杨华. 叶下珠化学成分的研究[J]. 中草药, 1995, 25 (9)：455-456.

[2] 陈云，王国凯，武 璨，等. 红花龙胆化学成分研究[J]. 中国中药杂志，2013, 38(3)：362--365.

[3] 马养民, 姜少娟, 史清华. 沙棘果渣中异鼠李素和槲皮素的提取与分离[J]. 西北林学院学报, 2009, 24 (5): 121-124.

[4] 孟泽彬, 国兴明, 张素英. 直葶石豆兰化学成分的研究[J]. 贵州教育学院学报, 2008, 19 (6): 20-22.

[5] 王银朝, 赵宝玉, 谭承建, 等. 变异黄芪地上部分化学成分研究[J]. 西北农业学报, 2006, 15 (5): 14-16, 20.

[6] 张雁冰, 李 玲, 刘宏民, 等. 马桑化学成分研究[J]. 郑州大学学报, 2005, 31 (1): 75-77.

[7] 潘晓辉, 李 硕, 李 瑜. 驼绒藜化学成分研究[J]. 天然产物研究与开发, 2005, 17 (3): 290-293.

[8] 吴 希, 夏厚林, 黄立华, 等. 香附化学成分研究[J]. 中药材, 2008, 31 (7): 990-992.

[9] 吴秋月，齐 洁，李默影，等. 牦牛儿苗的化学成分研究[J]. 中医药学报，2012, 40 (1): 76-78.

[10] 陈德昌. 中药化学对照品工作手册[M]. 北京:中国医药科技出版社, 1999: 154.

[11] Nakasugi T, Nakashima M, Komai K. Antimutagens in Gaiyou[J]. J Agric Food Chem, 2000, 48: 3256-3266.