Eotaxin在鼻腔分泌物中的表达及意义

兰 宁，徐 红

（南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉-头颈外科，南昌330000）

鼻息肉是耳鼻咽喉科常见的鼻部慢性病之一，可发生在任何的社会阶层及种族之间，发病率为1%～2%，男女之比为2～4∶1，多见于20岁以后的成年人［1］。虽然目前对鼻息肉的发病机制还不是很明确，但嗜酸性粒细胞作为鼻息肉最主要的组织学特点，其相关因子都是近几年研究的热点。本文就鼻息肉、慢性鼻窦炎、鼻中隔偏曲患者鼻腔分泌物中嗜酸性粒细胞趋化因子eotaxin浓度比较来探讨eotaxin在鼻息肉疾病发生、发展中所起的作用及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 共选取40例患者鼻腔分泌物，其中15例为鼻息肉患者，15例为慢性鼻窦炎患者，10例为单纯鼻中隔偏曲患者。女17例，男23例，年龄18～50岁。所有患者均来源于本院住院部2012年7～9月的患者，所选患者入院时均经过鼻内窥镜及副鼻窦CT检查确诊为鼻息肉、慢性鼻窦炎或单纯鼻中隔偏曲。鼻息肉、慢性鼻窦炎患者术后病理也得到证实。所选患者1个月前全身或局部均未使用抗生素、抗组胺药、皮质类固醇激素，术前均通过血清学检测IgG、IgE，皮肤点刺试验以排除过敏性鼻炎。所选患者均哮喘、寄生虫病等过敏反应性疾病病史。

1.2 标本采集 所选患者入院后在鼻内窥镜下通过负压吸引法收集鼻腔分泌物1mL，所有标本用PBS缓冲液稀释10倍，混匀，4 000r／min离心10min，细胞等有形成分沉入管底，取1mL上清液置于离心塑料管，放于-20℃冰箱保存待用。

1.3 实验方法 用人eotaxin定量酶联免疫测定试剂盒，购于武汉优尔生科技公司。严格按照试剂说明书操作，实验结束后在波长为450nm的酶标仪中检测得出标准品及每个标本的OD值，使用CurveExpert 1.4系统绘出七点图并算出每份标本的eotaxin浓度。

1.4 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行统计学分析，计量资料用±s表示，组间比较采用独立样本t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

鼻息肉患者鼻腔分泌物eotaxin的平均浓度为（468.82±440.64）pg／mL，慢性鼻窦炎患者鼻腔分泌物eotaxin的平均浓度为（443.85±334.68）pg／mL，单纯鼻中隔偏曲患者eotaxin的平均浓度为（149.23±49.01）pg／mL。鼻息肉、慢性鼻窦炎患者鼻腔分泌物eotaxin浓度均高于鼻中隔偏曲患者鼻腔分泌物eotaxin浓度，差异均有统计学意义（t＝2.26、2.74，P＜0.05），但鼻息肉、慢性鼻窦炎鼻腔分泌物eotaxin浓度之间比较差异无统计学意义（t＝0.17，P＞0.05），见表1。

表1 40例患者鼻腔分泌物中eotaxin浓度比较（±s）

表1 40例患者鼻腔分泌物中eotaxin浓度比较（±s）

a：P＜0.05，与鼻中隔偏曲组比较。

组别 n eotaxin（pg／mL）鼻息肉组 15 468.82±440.64a鼻中隔偏曲组 10 149.23±49.01慢性鼻窦炎组 15 443.85±334.68a

3 讨 论

Eotaxin最早于致敏豚鼠的支气管肺泡灌洗液中分离获得［2］，属于C-C类化学趋化因子，目前发现eotaxin家族有eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3，虽然它们之间的结构不同，但它们的功能相似，都对嗜酸性粒细胞具有趋化作用。Eotaxin主要来源为上皮细胞、内皮细胞和活化的白细胞、成纤维细胞，然而，在鼻息肉组织的炎性反应中渗出性巨噬细胞和EOS在某种程度上都是eotaxin的主要来源，使eotaxin生成增加［3］。eotaxin主要作用于CCR3受体上，与CCR3受体特异性的结合促进嗜酸性粒细胞经内皮迁移至鼻息肉黏膜的固有层，对嗜酸性粒细胞产生特异性的趋化作用。eotaxin不仅与嗜酸性粒细胞炎症关系密切，还与其他炎性细胞（T淋巴细胞，碱性粒细胞，单核细胞等）的趋化或活化有关，但由于CCR3受体在嗜酸性粒细胞上大量存在，因此eotaxin与嗜酸性粒细胞有高度的亲和性。虽然对嗜酸性粒细胞具有趋化作用的细胞因子不止eotaxin，还有IL-5、白三烯B4、血小板衍生生长因子等，其中IL-5是EOS家族最具特异性及对EOS选择性终端分化负责的细胞因子，同时IL-5也能刺激EOS从骨髓释放到外周循环中［4］。但与其他作用于嗜酸性粒细胞的细胞因子相比，eotaxin是一种表现出对嗜酸性粒细胞迁移更高选择性的趋化因子。Toru Yao等发现在嗜酸性粒细胞鼻息肉中eotaxin浓度比非嗜酸性粒细胞鼻息肉中eotaxin浓度明显增加，进一步指出在鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞的募集是一个自我放大的过程［5］。

CCR3最早从单核细胞、嗜酸性粒细胞克隆而来，属于G蛋白耦联受体家族。它主要表达在嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和TH2细胞，介导迁移及脱颗粒反应。CCR3是一种非特异性趋化因子受体，可与多种趋化因子结合发生作用，包括eotaxin、eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3、RANTES等。趋化因子与CCR3结合后可产生一系列生化反应，选择性促进嗜酸性粒细胞募集浸润到炎症部位。Bryan等［6］研究发现，eotaxin可通过与CCR3的结合可诱导部分CCR3内陷和嗜酸性粒细胞变形，有助于嗜酸性粒细胞的活化和迁移。

Eotaxin最早于致敏豚鼠的支气管肺泡灌洗液中分离获得，指出eotaxin在气道疾病中起了一定的作用。既然eotaxin能在支气管肺泡灌洗液中发现，作者也能假设在鼻息肉患者的鼻腔分泌物中分离获得。鉴于这个假设及获取鼻腔分泌物法与血清及鼻息肉匀浆组织法相比具有无创性，简便性、费用低、随访性高等特点，根据先前学者文献资料提供提取鼻腔分泌物的办法及自己的临床实验寻找到一种方便、简单的负压吸引法（将婴儿吸痰管一端接负压装置，一端接吸引器，通过鼻内窥镜将鼻腔分泌物吸入储留瓶中保存）此法时间短，有效减轻患者的痛苦，费用低，提取量充足。避免了明胶海绵填塞法的时间长，提取量少等缺点，也避免了鼻腔灌洗法的患者配合不佳、稀释倍数计算不精确等缺点。实验结果显示鼻息肉、慢性鼻窦炎患者鼻腔分泌物eotaxin浓度比鼻中隔患者鼻腔分泌物eotaxin浓度显著增加（P＜0.05），表明通过提取鼻息肉、慢性鼻窦炎、鼻中隔偏曲患者的鼻腔分泌物经ELISA实验来检测鼻腔分泌物中eotaxin浓度的方法是具有可行性的。避免了免疫组织化学法及RT-PCR法时间长、费用高、操作复杂等特点，是个值得在临床上推广的方法。

Shin等［7］用原位杂交方法检测显示鼻息肉组织与正常下鼻甲组织中eotaxin基因的表达差异有统计学意义。Hiroyuki Seto等［8］通过免疫组织化学法可发现在正常上颌窦黏膜组织中少量的eotaxin蛋白阳性细胞，但在鼻息肉组织固有层中可见大量的eotaxin蛋白阳性细胞。OIze等［9］通过免疫组化方法研究显示，eotaxin家族的eotaxin、eotaxin-2、eotaxin-3蛋白在鼻息肉组织中的表达明显高于正常下鼻甲组织，且3者蛋白水平与组织中EOS数量呈正相关。国内学者用免疫组化和RT-PCR从蛋白和基因两个水平检测鼻息肉组织和正常下鼻甲中的eotaxin的表达，结果显示两者间蛋白表达量为（18.56±3.59）和（0.97±0.11）；两组 mRNA 表达水平为（1.02±0.193）与（0.19±0.126），差异均有统计学意义（P＜0.05）［10］。Chao等［11］使用 ELISA 试验检测亚洲人慢性鼻窦炎、鼻息肉患者的血清中eotaxin比健康对照组的血清eotaxin明显的提高（P＜0.01），表明趋化因子与疾病的炎症程度具有密切的相关性。而本次实验结果得出鼻息肉患者鼻腔分泌物eotaxin浓度为（468.82±440.64）pg／mL，慢性鼻窦患者鼻腔分泌物eotaxin浓度为（443.85±334.68）pg／mL，鼻中隔偏曲患者鼻腔分泌物eotaxin浓度为（149.23±49.01）pg／mL。鼻息肉、慢性鼻窦炎患者鼻腔分泌物eotaxin浓度比鼻中隔偏曲患者鼻腔分泌物eotaxin浓度显著升高（P＜0.05），这与先前文献得出的鼻息肉患者比健康对照组eotaxin量显著增加的结论是一致的。

虽然目前对eotaxin研究的文献不少，但通过使用ELISA方法检测鼻腔分泌物中eotaxin浓度的方法还是很少的，本研究结果得出鼻息肉组、慢性鼻窦炎组鼻腔分泌物eotaxin浓度均高于鼻中隔偏曲组鼻腔分泌物eotaxin浓度，差异有统计学意义（P＜0.05）。进一步说明eotaxin在鼻息肉疾病发生、发展中所起重要作用，本实验不足之处在于并没有对eotaxin家族eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3在鼻息肉发病的不同时期所起的作用进行研究，鉴于eotaxin家族eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3在哮喘不同时期所起的作用不同，今后也可在这方面进行研究。之前有研究也发现CCR3在以嗜酸性粒细胞聚集为主的变态反应性疾病中同样也起了重要作用，如：哮喘，变应性鼻炎等。Joubert等［12］发现，eotaxin作用于气道平滑肌细胞CCR3可诱导平滑肌细胞迁移和增殖，使细胞内Ca2＋增高，哮喘患者支气管黏膜中CCR3mRNA表达增加。而目前临床上广泛使用CCR3拮抗剂治疗哮喘及变应性鼻炎，如抗CCR3单克隆抗体已是目前最具有研究价值的药物，它通过有效的抑制嗜酸性粒细胞在局部组织的募集从而在变应性鼻炎中发挥重要作用。这为今后进一步研究CCR3拮抗剂治疗鼻息肉提供了一定的理论依据。

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