绵羊巴氏杆菌病和链球菌病混合感染的诊断和防治初探

施进文，蔡葵蒸

（1.宁夏同心县动物疾病预防控制中心，同心 751300；2.西北民族大学）

疾病防控

绵羊巴氏杆菌病和链球菌病混合感染的诊断和防治初探

施进文1，蔡葵蒸2

（1.宁夏同心县动物疾病预防控制中心，同心 751300；2.西北民族大学）

近年来在我国新疆、河北、辽宁、山东、吉林、甘肃等省（自治区）不断有绵羊巴氏杆菌病发生［1－6］，而链球菌与巴氏杆菌混合感染的较为少见。2011年入冬以来，宁夏回族自治区同心县肉羊育肥区域羊群中相继发生了一种以咳嗽、呼吸困难、流粘浓性鼻液、跛行为主要特征的疫病，疫情延续近半年之久，给广大养殖户造成了严重的经济损失，应该引起动物防疫部门的重视。

1 发病情况

2011 年入冬，同心县肉羊育肥区域兴隆村养殖育肥户王某200只羊群发生咳嗽、呼吸困难、流粘浓性鼻液，发病羊以育肥羔羊和体弱羊为主,发病175只，经过多方抢救治疗，频死期宰杀和死亡共计42只，发病率87.5%，致死率24%。随后同心肉羊育肥区域杨家河湾村养殖育肥户李某400只羊群发病特征同上，并有咽喉肿胀、跛行等症状，发病237只，发病率59.25%，致死率26.16%。该病很快波及其他养殖区，经过笔者调查统计，至2012年6月，养殖区共饲养育肥羊60 545只，发病羊23 289只，死亡羊5 579只，发病率38.46%，死亡率9.21%,致死率23.95%。

2 临床症状

最急性型：突然发病，寒颤，虚弱无力，呼吸困难，可在数分钟至数小时内死亡。急性型：体温达4l～42℃，精神沉郁，食欲废绝，呼吸急促，咳嗽，鼻孔常流血，结膜潮红有黏性分泌物；病初便秘，后期腹泻，有时排血水。颈部和胸下部发生水肿，有角膜炎；触诊肺区有疼痛感，听诊有支气管呼吸音和水泡音。病程长者渐进性消瘦，频死期卧地不起，四肢划动，抽搐死亡。慢性者跛行。

3 剖检变化

可视粘膜充血或出血，皮下组织有淡黄色液体浸润，有水肿、充血和出血。肺脏有灰白色的病灶，有水肿，出血，质地变硬，切面呈大理石样变，有的病例呈纤维素性胸膜肺炎，可见急性坏死性肺炎，胸腔内有大量纤维素性渗出物；气管内有大量泡沫样液体，粘膜点状出血；部分心包积液、心外膜出血，部分心腔内储满血块。肝脏呈土黄色，有坏死灶，胆囊充盈，也有胆囊破裂者。肠系膜淋巴结充血、水肿，间有点状出血；瘤胃空虚，真胃、肠道粘膜及肾外膜有出血点，有些真胃粘膜脱落；腹腔有数量不等的积液，脾未见肿大。

4 诊断

4.1 病料接种培养、致病性试验和PCR扩增

4.1.1 接种支原体培养基（KM2） 取肺脏组织，首先在灭菌的pH值7.2磷酸缓冲液中洗涤2次，然后剪碎加入KM2培养基研磨，4℃5 000 r/min离心10 min，取上清液。上清液一部分用0.45 mm滤器过滤后接种KM2培养基，另一部分直接接种KM2培养基，置37℃、5%的CO2培养箱培养，观察培养基颜色变化，病料过滤接种培养基每隔3天盲传一次，结果培养基颜色未发生变化，即无支原体生长。

4.1.2 接种链球菌培养基 取病料肝脏和肺脏深部组织，各接种THB和THA培养基，置37℃培养箱中培养。取THB和THA培养物进行革兰氏染色,镜检。结果肝脏接种培养物中观察到一种G+链状球菌（图1）。

图1 革兰氏染色观察到的链状球菌

4.1.3 接种巴氏杆菌分离用培养基和PCR扩增 取病料肝脏和肺脏深部组织，各接种马丁肉汤和马丁肉汤琼脂，置37℃培养箱中培养。培养物进行革兰氏染色，镜

检。结果在肺脏接种培养物中观察到一种G-短杆菌（图2）。此菌在麦康凯琼脂培养基上不生长，在鲜血琼脂上生长良好、不溶血。取该菌马丁肉汤培养物，注射体重18 g左右小白鼠，皮下0.2 mL，小鼠在36 h出现死亡。取死亡小鼠心血、肝和脾触片，瑞特氏染色镜检，结果观察到两级浓染的小杆菌。该菌用巴氏杆菌特异性引物进行扩增，结果扩增出了与预期大小相符的457 bp片段（图3）。

图2 革兰氏染色观察到的两极着色倾向的杆菌

图3 巴氏杆菌特异性引物扩增分离菌的结果

4.2 诊断结果

根据细菌分离培养、培养特性观察、细菌染色形态观察，分离出两种菌：一种为链球菌，另一种为多杀性巴氏杆菌（分子生物学方法鉴定亦确定为巴氏杆菌）。实验结果表明，分离的多杀性巴氏杆菌具有很强的致病性。因此，本次疫情可认为是多杀性巴氏杆菌和链球菌混合感染所致，其中多杀性巴氏杆菌是造成死亡的主要原因。

5 防治措施

5.1 发病过程中尝试的治疗措施

处方一：发病羊群上午全部注射。30%安乃近注射液10 mL+板蓝根注射液10 mL+鱼腥草注射液10 mL+160万IU青霉素1支+100万IU链霉素1支，混合摇匀注射成年大羊2只或育肥羔羊3～4只。重症羊下午注射20%氟奇喘无敌（氟苯尼考注射液）10 mL，成年羊注射5 mL，羔羊注射2.5 mL。

处方二：注射用头孢噻呋钠（混分）5 g+注射用灭菌水10 mL混合，注射2只成羊或3～4只育肥羔羊，并注射大退烧（30%安乃近注射液）每只羊10 mL。

处方三：百草传奇（氟苯尼考注射液）+克林新（盐酸林可霉素注射液）各10 mL，注射2只大羊或4只育肥羔羊。

处方四：用中成药清肺止咳散（泰鑫药业生产）拌料使用，每只羊10 g，连用5 d，疗效显著。

处方五：维生素C注射液10 mL+10%葡萄糖溶液250 mL+激能（能量合剂）10 mL+0.9%生理盐水250 mL+注射用头孢噻呋钠（混粉）4 g+地塞米松磷酸钠注射液5 mg，一次静脉注射1只大羊或2只羔羊。

5.2 疫情诊断后所采取的措施

该病确诊后及时隔离病羊，对症治疗；圈舍消毒，彻底清洁病羊圈舍、运动场所及周围环境，对其活动场所、用具用克毒灵消毒粉溶液（二氯异氰脲酸钠，按1∶800稀释消毒）等进行彻底消毒；病死羊及被污染的饲草料和粪便尿等污染物集中深埋，做无害化处理；加强饲养管理，改善卫生条件，消除各种致病因素；同时，禁止贩运病羊和无秩序屠宰，最后使疫情得到了控制。

6 小结与讨论

1）根据细菌分离培养、培养特性观察、细菌染色形态观察、动物实验及分子生物学方法诊断，本次疫情可认为是以多杀性巴氏杆菌为主要致病性并伴发链球菌混合感染的较为复杂的疫病。造成羊只大批死亡的原因是养殖户缺乏科技意识，发病后延误病情，无法应对。笔者经过流行病学调查，病理剖检变化诊断后，列出5个处方，其中处方一药物配伍合理，成本低，疗效好，能够及时控制疫情发生，结合处方二至五，对控制和扑灭疫情发挥了显著的作用。建议养殖户使用处方一和处方四。疫情诊断后，采取综合性防治措施，及时治疗病羊，减少新发病羊只，对重症羊采取打针输液，中西医结合治疗，羊群饮电解多维或葡萄糖口服液，使羊只很快得到康复。

2）对于该病的预防，应加强饲养管理，改善卫生条件，平时应注意避免羊只拥挤和受潮，消除可能降低抗病力的一切因素，圈舍要定期消毒；在春乏季节并遇着天气剧烈变化时，饲料中添加羊只保健药品，如微量元素、维生素、氨基酸等，提高羊群的整体抗病能力。另外，对于该种疾病常发地区，可考虑注射羊巴氏杆菌和链球菌的菌苗来预防。

［1］郭顺有.绵羊绵羊巴氏杆菌病防治［J］.中国畜牧兽医文摘，2012，28（6）：91，127.

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［4］徐万祥.绵羊巴氏杆菌病的诊断和防治［J］.中国草食动物，2010，30（5）：71-72.

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S858.26

A

2095-3887（2014）01-0038-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.01.011

2013-10-08

施进文，男，高级畜牧师。