石河子地区规模化猪场主要疫病血清流行病学调查

杨 莉，欧 都，龚子桓，齐亚银

（石河子大学动物科技学院 传染病实验室，新疆 石河子 832000)

随着养猪业的持续性发展，养殖方式也由传统的散养逐步转变为规模化集约化的养殖方式。但由于规模化养殖的饲养密度较高，猪群活动量少而导致抗病力下降。在规模化养殖场的疾病防治当中传染病的防治显得尤为重要，传染病不仅会造成重大的经济损失，又有着波及范围广、扑灭困难、诊断与治疗复杂、 隐性带毒、易复发等特点[1]。同时新的病毒感染性疫病日渐增多，一些传染病的免疫失败时有发生，引起兽医工作者极大的关注。猪蓝耳病、猪瘟以及猪O型口蹄疫是目前对中国养猪业危害最大的3种重要传染病。而通过抗体水平监测数据，了解猪场免疫抗体和感染抗体水平，实时监测群体免疫状况，可为猪场制定更为科学合理的免疫程序提供依据，减少养殖户的损失。

1 材料和试剂

1.1 血清样品

来自A、B、C、D 4个规模化猪场猪只的620份血清均做了猪瘟检测；对其中587份血清又做了猪蓝耳病检测；对620份血清中344份做了口蹄疫检测。无菌采集猪前腔静脉血液样品3～5 mL，室温静置3～6 h待析出血清，取上清置于灭菌的离心管内，逐份进行编号，置于-20 ℃保存备用。

1.2 主要器材与仪器设备

采血器、微量移液器、1次性微量移液器使用的吸头、蒸馏水或去离子水、温箱、TGL-16G高速台式离心机、DNM-9602型酶标分析仪。

1.3 试剂

ELISA试剂：猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒；猪瘟ELISA抗体检测试剂盒；猪O型口蹄疫ELISA抗体检测试剂盒均由武汉科前动物生物制品有限责任公司提供。

ELISA试剂盒包括：96孔抗原包被板（2块）、血清稀释板（2块）、20倍浓缩洗涤液（30 mL）、样品稀释液（50 mL）、阳性对照血清（1 mL）、阴性对照血清（1 mL）、羊抗猪酶标二抗（20 mL）、底物液A（10 mL）、底物液B（10 mL）、终止液（10 mL）、说明书 1 份。

2 方法与结果判定

2.1 操作步骤

2.1.1 加样 取抗原包被板，将稀释好的样品血清和对照血清分别按照100μL对应从稀释板转入抗原包被板中，待检样品每份加一个孔，对照样品每份加2个孔，在振荡器上微微振匀孔中的样品，然后置37 ℃温育30 min。

2.1.2 洗板 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置3 min倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次。

2.1.3 加酶 每孔加羊抗猪酶标二抗100 μL，置37 ℃再温育30 min。

2.1.4 洗涤 做法同2.1.2。

2.1.5 显色 每个孔分别加入底物A和B（50μL）混匀，室温避光显色10 min。

2.1.6 终止反应 加终止液50μL利用酶标仪检测。

2.2 判断标准

猪瘟：样品OD630nm值＞0.35，判为抗体阳性；样品OD630nm值＜0.35，判为抗体阴性。

猪蓝耳病：样品KQ≥20，判为蓝耳病抗体阳性，若KQ＜20，判为蓝耳病抗体阴性。

猪口蹄疫病毒：样品OD630nm值＞0.4，判为抗体阳性，样品OD630nm值≤0.4，判为抗体阴性。

3 结果与分析

3.1 猪蓝耳病毒抗体检测结果与分析

4个规模化猪场共送检620份血清样品中有587份血清检测了猪蓝耳病毒抗体水平，总阳性率为88.42%（详见表1）。不同年龄猪蓝耳病毒抗体检测结果存在差异（详见表2）。

3.2 猪瘟抗体检测结果与分析

4个规模化猪场共送检620份血清检测猪瘟抗体水平，总阳性率为81.77%（详见表3）。不同年龄猪瘟抗体检测结果不同（详见表4）。

3.3 猪O型口蹄疫抗体检测结果与分析

对石河子地区共4个规模猪场送检的344份血清样品进行猪O型口蹄疫抗体检测发现，4个猪场抗体阳性率从84%～93%不等（详见表5）。不同年龄段的猪只血清抗体阳性率在81%～100%之间（详见表6）。

4 讨论

疫苗接种被规模化猪场作为防控传染病的主要方式，是通过免疫使易感猪变为对传染病具有抵抗力的非易感猪。只有在接种疫苗后机体产生相应的免疫应答后才会起到预防传染病的作用，而免疫应答是一种复杂的生物学过程，易受多种因素的影响。因此想要达到理想的免疫效果，需要监测猪群抗体水平的消长，掌握猪群免疫状态，判断动物对某传染病的抵抗力或某疫苗的免疫效果至关重要[2]，抗体水平的高低可直接反映出免疫效果以及未免疫的猪群是否存在野毒感染。

猪蓝耳病是由一种动脉炎病毒引发猪呼吸道疾病和繁殖障碍的传染病[3]。我国于1995年首次在北京郊区猪群发现有该病的流行[4]，近年来该病传播范围日渐广泛，成为危害养猪业的重要疫病之一。从抗体检测结果中不难看出，按照抗体阳性率大于75%为猪群免疫合格，石河子地区A猪场的猪蓝耳病的免疫效果差，防疫体系脆弱，极易受蓝耳病病毒强度攻击，从而暴发蓝耳病。因猪蓝耳病是以病猪和带毒猪为主要传染源，传播途径以胎盘、精液等垂直传播和水平传播。而母猪的抗体阳性率较低，导致其哺乳仔猪的血清抗体阳性率也相对较低，应加强对蓝耳病的积极预防。因此建议在哺乳母猪的生产周期再加一次蓝耳病疫苗的免疫，实行全进全出制，严格隔离、检疫、消毒工作，逐步淘汰阳性猪。

表1 4个规模化养猪场送检血清的猪蓝耳病毒抗体阳性率

表2 不同年龄猪蓝耳病毒抗体检测结果

表3 4个规模化养猪场送检血清的猪瘟抗体阳性率

表4 不同年龄猪瘟抗体检测结果

表5 4个规模化养猪场送检血清的猪O型口蹄疫抗体阳性率

表6 不同年龄猪口蹄疫抗体检测结果

我国猪瘟的流行现状是长期持续存在并呈多点散发，临床上呈现了典型猪瘟的病猪数量减少，而非典型猪瘟病例增多以及免疫失败现象，其主要特征是持续感染及隐性感染和免疫耐受，猪死亡率下降，严重地影响了我国猪瘟的防控效果[5]。而通过对猪瘟血清抗体检测结果说明猪场的抗体阳性率参差不齐，A猪场的疫苗免疫效价较低，容易导致猪群处于易感状态不足以抵抗强毒侵袭而发病或成为隐性带毒者，威胁易感猪群。同时不同年龄段的猪群猪瘟血清抗体水平差异较大，公猪的抗体阳性率最高，育肥猪的血清抗体阳性率最低，引起这一现象的原因可能是由于公猪的抗体水平的高低直接影响到母猪的配种，进而影响仔猪的生长发育及其对病原的抵抗力，因此猪场对公猪尤为关注。而育肥猪的饲养时间较短且重复利用率低，因此养殖场对其不够重视。

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病[6]，由于其血清型多，传播迅速且传播途径广，国际兽疫局(OIE)一直将本病列为发病必须报告的A类动物疫病名单之首。ELISA试验结果显示各猪场的抗体阳性率均较高，说明石河子地区规模化猪场的口蹄疫免疫效果较好；保育猪的抗体阳性率较低，应及时进行免疫补充。

从4个猪场的3种传染病的检测结果来看，A猪场整体的免疫效果不理想，而B猪场3种传染病的抗体阳性率均达到90%以上，可能原因是由于A猪场的免疫程序不科学、免疫时机不适宜，不能产生良好的免疫应答而导致的免疫失败。建议A猪场调整免疫程序同时加强猪场的隔离消毒，减少环境中的病毒及加强饲养管理。3种传染病中猪瘟的抗体阳性率最低，口蹄疫的血清抗体阳性率最高，说明石河子地区养殖场应加强对猪瘟的预防接种，防止猪瘟的暴发。

[1] 陈溥言.兽医传染病学[M]. 第5 版.北京：中国农业出版社，2006.

[2] 杨汉春.动物免疫学[M].第2版.北京：中国农业大学出版社,2003：255-258.

[3] 吴清明.兽医传染病学[M].北京：中国农业大学出版社,2001.

[4] 郭宝清,陈章水,刘文兴,等.从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J].中国畜禽传染病,1996,18(2)：1-41．

[5] 李智丽,马静云,曾喜多,等.高致病性猪蓝耳病综合防控体会[J].中国动物保健, 2011(11): 44-47.

[6] 蔡宝祥.家畜传染病学[M].北京：中国农业出版社,2001：149-156.