中性粒细胞CD64定量检测在感染性疾病检测中的应用

蔡鹏威

(福建医科大学省立临床医学院福建省立医院检验科，福建福州350001)

·检验与临床·

中性粒细胞CD64定量检测在感染性疾病检测中的应用

蔡鹏威

(福建医科大学省立临床医学院福建省立医院检验科，福建福州350001)

目的探讨中性粒细胞CD64定量检测在感染性疾病检测中的应用。方法选取382例ICU住院患者，将其分为非细菌感染组、局部感染组和脓毒血症组，同期选取30例健康体检，应用流式细胞仪检测中性粒细胞CD64，同时检测外周血白细胞计数(WBC)及中性粒细胞比例(NE%)、C反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)。结果局部感染组和脓毒血症组的中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%均高于健康对照组及非细菌感染组(P＜0.05)，脓毒血症组的中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%高于局部感染组(P＜0.05)，中性粒细胞CD64的ROC曲线下面积最大(0.903)，当其临界值取1500 MESF时，敏感性为94.5%，特异性为90.6%。结论与PCT、CRP、WBC及NE%相比，中性粒细胞CD64可作为检测和监测感染性疾病的敏感指标。

CD64；中性粒细胞；C反应蛋白；降钙素原；感染性疾病；流式细胞术

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.025

感染性疾病是临床最常见的疾病之一，也是导致ICU病人死亡的主要原因之一，而在临床诊疗过程中，细菌感染和非细菌感染性疾病常依靠外周血白细胞计数(WBC)及中性粒细胞比例(NE%)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)等实验室检查加以判断。近年来，多项研究发现中性粒细胞CD64定量分析是早期诊断和鉴别细菌感染的可靠的敏感指标。本研究通过对本院重症ICU 382例标本的中性粒细胞CD64进行定量分析，探讨中性粒细胞CD64对细菌感染的诊断价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象选取本院2013年8月至2014年6月入院48 h内ICU住院患者为研究对象，共382例，依据临床症状和血培养结果分为3组：⑴非细菌感染组123例，男75例，女48例，年龄19～68岁；⑵局部感染组174例，男100例，女74例，年龄16～70岁，平均年龄44.1±10.3岁；⑶脓毒血症组85例，年龄20～73岁，平均年龄43.7±12.5岁。正常对照组为我院健康体检者30例，男18名，女12名，年龄16～69岁，平均年龄40.7±10.5岁。

1.2 标本采集清晨采集空腹静脉血4ml，其中2 ml于促凝管中，3000r/min离心10min，分离血清用于检测CRP和PCT；采集2ml EDTA－K2抗凝静脉血用于进行血常规和中性粒细胞CD64的测定。

1.3 仪器与试剂中性粒细胞CD64检测使用美国BD FACS Calibur流式细胞仪；CRP检测使用西门子公司BNⅡ全自动特定蛋白仪；血常规采用日本Sysmex公司XE 5000型血液分析仪进行分析，PCT检测使用法国梅里埃公司的mini-VIDAS。QuantiBRITE PE标准微球和中性粒细胞CD64检测试剂由美国BD公司生产；CRP检测试剂为西门子公司配套试剂；血常规试剂为日本Sysmex公司配套产品，PCT为法国梅里埃公司配套试剂，都严格按照操作说明书操作。

1.4 中性粒细胞CD64的检测方法QuantiBRITE PE标准微球是用PE标记使用的，当在同一台流式细胞仪检测QuantiBRITE PE标准微球后，因为已知每个抗体上和微球上标记PE荧光分子的数量，就可将FL2坐标轴上的荧光强度换算为每个细胞所结合PE分子的数量，故可通过每个细胞上PE荧光分子的数量而得出每个细胞结合抗体的数量，即单个细胞抗原结合数量(ABC)。

1.5 统计学方法所有数据采用SPSS 13.0统计软件进行处理。结果以x±s表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。绘制受试者工作特征(ROC)曲线，计算感染指标的敏感性和特异性。

2 结果

2.1 非细菌感染组、局部感染组、脓毒血症组及健康对照组中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%检测结果见表1。

局部感染组和脓毒血症组的中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%均高于健康对照组及非细菌感染组(P＜0.05)，脓毒血症组的中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%高于局部感染组(P＜0.05)，非细菌感染组的WBC、NE%高于健康对照组(P＜0.05)。

2.2 绘制中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%评价感染性疾病的ROC曲线图见图1。

表1 非细菌感染组、局部感染组、脓毒血症组及健康对照组中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%检测结果s)

表1 非细菌感染组、局部感染组、脓毒血症组及健康对照组中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%检测结果s)

注：与健康对照组及非细菌感染组比较，*P＜0.05；非细菌感染组与健康对照组比较；**P＜0.05，脓毒血症组组与局部感染组比较，▲P＜0.05。

组别n C D 6 4 / ( M E S F ) P C T / ( n g / m l ) C R P / ( m g / L ) W B C / ( 1 0 × 1 09/ L ) N E / ( % )健康对照组非细菌感染组局部感染组脓毒血症组3 0 1 2 3 1 7 4 8 5 5 0 9 . 5 ± 2 8 4 . 2 5 2 5 . 5 ± 3 5 5 . 7 3 1 1 3 . 8 ± 3 7 1 0 . 7*4 8 5 4 . 9 ± 4 5 8 2 . 2*▲0 . 1 7 ± 0 . 2 6 0 . 2 1 ± 0 . 1 3 5 . 5 0 ± 2 6 . 6 7*1 3 . 8 9 ± 2 9 . 1 1*▲2 . 3 ± 1 . 7 3 4 . 8 ± 3 8 . 3 7 4 . 8 ± 6 6 . 3*1 3 2 . 3 ± 8 4 . 7*▲5 . 9 6 ± 1 . 9 1 9 . 9 5 ± 4 . 1 5**1 1 . 3 ± 5 . 7 8*1 3 . 9 ± 7 . 9 8*▲5 5 . 0 5 ± 2 . 2 7 6 . 2 ± 9 . 9**7 8 . 3 ± 1 2 . 8*8 3 . 3 ± 1 1 . 3*▲

图1 中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%评价感染性疾病的ROC曲线图

从ROC曲线图中可以计算出中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC及NE%曲线下面积分别为0.903、0.896、0.816、0.618及0.677。

2.3 分别计算中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%评价感染性疾病的敏感性和特异性结果见表2。

表2 中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%评价感染性疾病的敏感性和特异性

3 讨论

感染性疾病可以分为细菌感染和非细菌感染，细菌感染是ICU病人常见的病因之一，也是ICU病人常见的并发症之一。细菌培养是诊断细菌感染的金标准，但由于细菌培养检测周期较长，敏感性较低，加之现在抗生素的广泛使用，细菌培养的阳性率都比较低，因此，临床迫切需要新的细菌感染检测指标，CRP、PCT和中性粒细胞CD64先后应用于临床，为细菌感染诊断提供了较好的实验依据。

CRP是由肝细胞合成的，能与肺炎链球菌C多糖反应形成复合物的急性时相反应蛋白，半衰期为5～7h，CRP在感染后6～12h升高，48h左右达到高峰，炎症消退后迅速下降，因此CRP水平与炎症反应程度呈正相关，本研究显示：脓毒血症组和局部感染组的CRP高于健康对照组和非细菌感染组(P＜0.05)，而且脓毒血症组的CRP也高于局部感染组(P＜0.05)。此外CRP不受性别、年龄、抗生素等其它因素影响，因此常作为细菌感染的诊断和疗效判定的指标之一，虽然CRP敏感性较高，但特异性有限[1]。本研究显示：当CRP的临界值定为5 mg/ L时，敏感性为88.3%，高于WBC和NE%，却低于PCT和中性粒细胞CD64；特异性为76.5%，仅高于WBC，却低于NE%、PCT和中性粒细胞CD64，CRP的ROC曲线下面积为0.816，也比PCT和中性粒细胞CD64低，因此CRP作为细菌感染检测的指标不如PCT和中性粒细胞CD64好。

PCT是降钙素的前肽物质，是无激素活性的糖蛋白，由116个氨基酸组成，相对分子量为13× 103，PCT在甲状腺C细胞中生成并裂解出降钙素，正常人体含量极低。当机体受到非细菌感染时，体内的PCT不升高或仅轻度升高，但当机体受到细菌感染时，体内的PCT可迅速升高，而且感染程度越重，升高越明显，其机制可能是细菌内毒素脂多糖或细胞因子等诱导体内甲状腺外组织产生大量的PCT，因而，PCT是一种较为敏感和特异的细菌感染检测指标[2-4]。本研究显示：局部感染组和脓毒血症组的PCT高于健康对照组及非细菌感染组(P＜0.05)，而且脓毒血症组的PCT高于局部感染组(P＜0.05)，故PCT与细菌感染的程度呈正相关。PCT的ROC曲线下面积为0.896，仅次于中性粒细胞CD64，但优于CRP、WBC、NE%，其诊断的敏感性(89.2%)和特异性(87.3%)也较高，故PCT是一种不错的细菌感染检测指标，但目前PCT检测的费用还比较高，限制了其应用。

CD64即IgG受体Fcγ RI，是Fc受体之一，Fc受体属于免疫球蛋白超家族，分布于白细胞表面，它们参与先天及后天免疫应答。它们在吞噬细菌和免疫复合物的过程起着非常重要的作用。FcγR (CD64)Ⅰ为一种相对分子量为72000的跨膜糖蛋白，属Ig超家族，是IgG高亲和力受体，是介导体液免疫和细胞免疫的桥梁。正常生理情况下CD64表达于巨噬细胞、单核细胞和树突状细胞表面，中性粒细胞不表达或低表达。而当中性粒细胞受到微生物细胞壁成份(如：脂多糖、补体物质)和某些细胞因子(如：IFN-γ，TNF-α，IL-8，IL-12)刺激4～6h后，CD64表达就会增加，增加的程度与细胞因子刺激的强度相关，而且CD64的表达量与细菌感染的严重程度、预后及患者的死亡密切相关，同时CD64表达水平不受性别和年龄等因素影响[5-12]。因此，中性粒细胞CD64是细菌感染检测的理想指标。本研究结果表明：局部感染组和脓毒血症组的中性粒细胞CD64高于健康对照组及非细菌感染组(P＜0.05)，而且脓毒血症组的中性粒细胞CD64高于局部感染组(P＜0.05)，故细菌感染的程度越重，中性粒细胞CD64表达量越高，而且中性粒细胞CD64的ROC曲线下面积最大，达到0.903，说明中性粒细胞CD64的诊断价值最高，加上中性粒细胞CD64的敏感性(94.5%)和特异性(90.6%)优于其它指标，所以中性粒细胞CD64是检测细菌感染的最佳指标。

综上所述，中性粒细胞CD64在细菌感染的检测和监测中具有重要的作用，其ROC曲线下面积、敏感性和特异性均优于PCT、CRP、WBC和NE%。因此，对ICU患者进行中性粒细胞CD64检测，能够较早判断和发现细菌感染，及时采取合理的治疗措施，改善ICU患者的预后，也有助于防止因滥用抗生素而导致耐药菌的产生。临床上应将以上几个项目进行联合检测，以提高阳性率，同时还需结合临床表现综合加以评价。由于所选病例均为ICU患者，故中性粒细胞CD64对临床其它疾病患者的应用价值还需进一步研究。

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R446.62,R446.11+1

A

1674-1129(2014)06-0719-03

2014-08-06；

2014-09-19)