两种细胞辅助脂肪移植隆乳的临床效果观察

王 琳 陆 毅 傅敏刚 何继银 黄一雄 范志宏

两种细胞辅助脂肪移植隆乳的临床效果观察

王 琳 陆 毅 傅敏刚 何继银 黄一雄 范志宏

目的观察两种细胞辅助脂肪移植技术（Cell-assisted lipotransfer，CAL）隆乳的临床疗效。方法CAL技术隆胸30例，根据术中提取的基质血管成分细胞（Stromal vascular fraction，SVF）来源分为两组，来源于脂肪组织的称为固相组（S组，n=24），来源于吸脂液的为液相组（L组，n=6）。术后均随访12个月。流式细胞仪检测两种来源SVF中脂肪干细胞（Adipose-derived stem cells，ADSCs）比例，MRI检测术前及术后6、12个月的乳房体积，计算移植脂肪组织的吸收率。结果两组新鲜分离的SVF细胞群中，ADSCs平均比例分别为S组40.73%、L组3.75%。MRI测量及统计结果显示，S组术后6、12个月时乳房体积均明显大于术前（P＜0.05），术后6个月与12个月时无明显差异（P＞0.05）。12个月时脂肪吸收率为（51.83±15.28）%，与6个月时相比无明显差异（P＞0.05）；L组12个月时脂肪吸收率为（75.47±12.20）%，与6个月时相比无明显差异（P＞0.05）；MRI影像见囊肿2例，均来自S组。结论脂肪组织相比吸脂液，其SVF细胞群中ADSCs含量明显更高；CAL辅助脂肪移植技术隆乳术安全有效，术后6个月乳房体积即可保持基本稳定。

细胞辅助脂肪移植技术隆乳术乳房体积

2008年,细胞辅助的脂肪移植技术（Cell-assisted lipotransfer，CAL）隆乳被首次报道。此技术旨在利用基质血管成分（Stromal vascular fraction，SVF）中含有的脂肪干细胞（Adipose derived stromal/stem cells，ADSCs）降低移植脂肪组织的吸收率。根据术中SVF来源于固相的脂肪组织或液相的吸脂液，可分为固相CAL和液相CAL[1]。我科自2009年6月至2014年5月共进行了CAL隆胸30例，我们通过MRI测量术后6、12个月的乳房体积，计算移植脂肪组织的吸收率，对比手术前后乳房MRI影像的变化，对两种CAL隆乳术的临床效果进行观察比较。

1 一般资料

共30例健康女性，按术中提取SVF细胞来源分为固相组（S组，n=24）（离心后脂肪组织250 mL）和液相组（L组，n=6）（静置后吸脂液500 mL）。无其他乳房疾病。手术在全麻下进行，供脂部位为大腿后方、侧腰和下腹部。所有患者随访12个月。

主要试剂和仪器：0.075%胶原酶（Wako Pure Chemical Industries，日本）；CD29、CD34、CD31、CD73、CD105、CD45、CD90及IgG同型对照（eBioscience公司，美国）；Lipokit吸脂离心机（韩国）。

2 方法

2.1 SVF成分的获取

取常规吸脂术中的离心后脂肪组织250 mL或静置后吸脂液500 mL送细胞分离室。0.075%胶原酶消化脂肪组织45 min，离心，弃上层液，DMEM重悬下层混合的细胞沉淀。离心，重悬，反复洗涤3次去除胶原酶。吸脂液500 mL经800 g离心5 min，弃上层液，吹打，加生理盐水200 mL，震荡30 sec，22.2 mL的10×PBS恢复等张，离心，重悬，共3次。每组各取50 μL，加M199培养基200 μL，100目滤网过滤，细胞计数，调整细胞数至1×107cells/mL。

2.2 SVF中ADSC的含量检测

获取的细胞数达1×107cells/mL的SVF留样每组各1 mL，分为每份1～3×105个细胞，加抗体CD29 -PE、CD34-PE、CD31-FITC、CD73-FITC、CD105-FITC、CD45-APC、CD90-PECy5，IgG同型对照。4℃孵育30 min，含4%FBS的PBS洗涤后用流式细胞仪进行分析检测，结果取平均值。

2.3 CAL技术隆胸

脂肪组织700 g离心3 min，收集中间部分的脂肪于合适的无菌容器中，置于冰水混合物中保存。将2.1中提取的SVF成分与离心后脂肪组织充分混匀，静置15 min，吸去表面油脂，剪碎条索，移入18 g内径1 mm的特制注射针管中。以乳房外下象限6、7、8、9点为进针点，多隧道注射，注射平面和体积比例为深层的胸大肌内∶浅层皮下=1∶1，避免刺穿胸膜。

2.4 疗效观察

①大体观察：查体并参照术前术后照片，对乳房体积改变、组织柔软度、有无硬结、供脂区有无凸凹不平等方面进行综合评估；②MRI测量乳房体积：术前、术后6、12个月行双侧乳房平扫，由本院放射科3位专业技师对所得影像资料进行体积测量，反复3次，取平均值，分别记为V（S/L）0、V（S/L）6及V（S/L）12。按公式计算吸收率，记为R（S/L）6及R（S/ L）12；数据采用Student's t-test进行分析，P＜0.05为差异具有统计学意义；③评价乳房MRI影像的变化：主要观察有无结节、囊肿或钙化。

R=1-(V6/12-V0)/注入脂肪体积×100%

3 结果

3.1 流式细胞检测结果

S组SVF中ADSCs相关表面标志CD29、CD34、CD73、CD90、CD105高表达，而内皮细胞表面标志CD31及造血细胞表面标志CD45低表达（图1A），ADSCs平均占40.73%（图1B）。L组SVF中ADSCs相关表面标志低表达，而内皮细胞及造血细胞表面标志高表达（图2A），ADSCs平均仅占3.75%（图2B）。

3.2 MRI测量及统计结果

S组和L组的脂肪注射体积分别为每侧（253.67±17.40）mL和每侧（208.37±13.38）mL。MRI测量及统计结果显示，术后12个月，两组移植脂肪吸收率分别为（51.83±15.28）%和（75.47±12.20）%。S组术后6个月乳房体积较术前明显增大，但术后6～12个月间，乳房体积无显著变化。L组各时间点间乳房体积无显著变化。术后6个月MRI检测，S组2例患者检测到囊肿，直径分别约1.2 cm和0.7 cm，术后12个月MRI未见囊肿增大，密切随访中。所有患者未见钙化改变（表1、图3、图4）。

图1 S组SVF的细胞成分Fig.1 The components of SVF in group S

图2 L组SVF的细胞成分Fig.2 The components of SVF in group L

表1 两组各时间点MRI测量的乳房体积及移植脂肪吸收率Table1 Breast volume and the resorption rate of transplanted adipose tissue at each time point of the 2 groups

图3 典型病例Fig.3 Typical case

图4 MRI影像Fig.4 MRI images

4 讨论

研究表明，以ADSCs为主的活性细胞成分的缺乏和丢失，是传统脂肪移植成活率低的主要原因[2]。Sterodimas等[3]认为，与完整脂肪组织相比，抽吸得到的脂肪组织中ADSCs的数量只有原来的一半。尽管大量动物实验研究已经证明，ADSCs能增加游离移植脂肪组织内的血管密度，提高移植物的成活率[4]，但由于ADSCs无特异性的表面标志，而高纯度的ADSCs的富集需要经过体外培养、扩增和诱导鉴定等步骤，临床应用的安全性和可行性无法保障。

CAL技术因无需体外培养扩增即能提供含有ADSCs的SVF成分，因此具有较高的临床应用价值。根据术中SVF来源于固相的脂肪组织或液相的吸脂液，可分为固相CAL和液相CAL[1]。其中液相CAL技术有望将以往废弃的吸脂液“变废为宝”，成为ADSCs的来源之一，但由于所获得的ADSCs含量较低，液相CAL技术用于较大体积的脂肪移植（如隆胸）的效果尚有待评估。

MRI技术对软组织分辨率高，且三维实体的计算机数字化取样已臻完备[5]。本研究采用MRI为检测手段，测量乳房体积，通过对比手术前后乳房软组织的影像学变化并观察有无结节、囊肿、钙化等并发症的发生，评估两种CAL技术隆乳的安全性和有效性。本研究结果显示，术后6、12个月时乳房体积均明显大于术前（P＜0.05），术后6个月与术后12个月时无明显差异（P＞0.05），说明与术前相比，S组术后乳房体积明显增大，外观有明显改善。但L组各时间点乳房体积差异无统计学意义，说明液相CAL技术未能有效增大乳房体积。术后6、12个月的移植脂肪吸收率均无明显差异（P＞0.05），说明术后6～12个月间，乳房体积未见明显缩小，结果与大体观察一致，即至术后6个月乳房体积基本稳定。MRI影像未见钙化，但2例S组患者于皮下脂肪层内发现直径1 cm左右的囊肿，未见增大趋势，予以密切随访。上述研究结果表明，固相CAL技术隆乳安全有效，但仍有约（51.83±15.28）%的吸收率，相较于传统脂肪移植隆乳术40%～60%的吸收率[6]，未见明显优势。主要原因可能是：相较于较大的注射脂肪体积每侧（253.67±17.40）mL，ADSCs的数量仍不足够。尽管S组SVF中的ADSCs占40.73%，远高于L组的3.75%，但250 mL脂肪获得的ADSCs数量仅为107～108个[7]。动物实验发现，移植后4周，固相CAL组的移植物重量高于单纯脂肪移植组，并有较好的血管化，但提供SVF的脂肪体积：注射脂肪体积为4∶1[8]。按此体积比计算，相对于S组平均每侧约250 mL的注射脂肪，用于提取SVF的脂肪体积将达2 000 mL，而本研究中仅为250 mL。可见，应用固相CAL技术隆乳时，提供SVF的脂肪与注射脂肪的体积比应尽可能增大。对于脂肪储备充足的患者，有望获得1∶1甚至是2∶1的体积比。L组乳房体积无显著改善，术后12个月时的脂肪吸收率为（75.47±12.20）%，除液相CAL技术提取的SVF中ADSCs含量较低外，还可能的原因是，相较于S组患者，L组患者均为体型偏瘦者，乳房皮肤张力较高，加重了移植脂肪的缺血缺氧情况。与单纯脂肪移植技术相似，对于脂肪储备不足、乳房发育较差的患者，液相CAL隆乳术有一定的局限性。

本研究证实了固相CAL技术隆胸的有效性，为CAL技术的临床应用提供了一定的参考。但如何进一步降低术后移植脂肪的吸收率，尚需大量深入的基础及临床研究。

[1]Yoshimura K,Sato K,Aoi N,et al.Cell-assisted lipotransfer (CAL)for cosmetic breast augmentation:supportive use of adiposederived stem/stromal cell[J].Aesthetic Plast Surg,2008,32(1):48-55.

[2]Spalding KL,Arner E,Westermark PO,et al.Dynamics of fat cell turnover in humans[J].Nature,2008,453(7196):783-787.

[3]Sterodimas A,de Faria J,Nicaretta B,et al.Cell-Assisted Lipotransfer[J].Aesthet Surg J,2010,30(1):78-82.

[4]Hong SJ,Traktuev DO,March KL.Therapeutic potential of adiposederived stem cells in vascular growth and tissue repair[J].Curr Opin Organ Transplant,2010,15(1):86-91.

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[6]ELFadl D,Garimella V,Mahapatra TK,et al.Lipomodelling of the breast:a review[J].Breast,2010,19(3):202-209.

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Evaluation on Two Kinds of Cell-assisted Lipotransfer for Breast Augmentation

WANG Lin,LU Yi,FU Mingang,HE Jiyin,HUANG yixiong,FAN Zhihong.

Department of Aesthetic and Plastic Surgery,Renji Hospital,Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai 200127,China.Corresponding author:FAN Zhihong(E-mail:fanzhihong0815@163. com).

ObjectiveTo evaluate the effect of two kinds of cell-assisted lipotransfer for breast augmentation.Methods Thirty patients accepted breast augmentation using cell-assisted lipotransfer(CAL),and completed 12-month follow-up. According to the stromal vascular fraction(SVF)distilled from adipose tissue or aspirated liquid,the patients were divided into 2 groups:S group and L group.Flow-cytometry was used to detect the percentage of adipose-derived stem cells(ADSCs) in distilled SVF.The breast volumes and images were evaluated by MRI pre-operative,6 and 12 months post-operative.The data of breast volume were markedandthe resorption rate of transplanted adipose tissue was calculated.Results Averagely,the percentage of ADSCs in freshly distilled SVF in S group is 40.73%and 3.75%in L group.MRI showed that the breast volume 6－month post-operative and 12－month post-operative were both larger than that of preoperative in S group (P＜0.05),while no significant difference between the breast volume 6－month post-operative and 12－month post-operative were observed(P＞0.05),neither the resorption rate of 6 and 12-month post-operative(P＞0.05),and the resorption rate of transplanted adipose tissue 12－month post-operative in S group was(51.83±15.28)%.However,there were no significant difference of breast volume among three time points in L group(P＞0.05),neither the resorption rate of 6 and 12-month postoperative(P＞0.05),and the resorption rate of transplanted adipose tissue 12－month post-operative in L group was(75.47± 12.20)%.In addition,no calcification was seen in all MRI images but cysts were found in two cases of S group.Conclusion In process of breast augmentaion using cell-assissted lipotransfer,the distilled SVF from adipose tissue contains more ADSCs than that from aspirated liquid.The cell-assisted lipotransfer for breast augmentation is effective,safe,and the shrinkage stalls at 6-month post-operative.

Cell-assissted lipotransfer;Breast augmentation;Breast volume

R622

A

1673－0364（2014）06－0339－04

2014年7月4日；

2014年8月13日）

10.3969/j.issn.1673-0364.2014.06.010

200127上海市上海交通大学医学院附属仁济医院整形外科。

范志宏（E-mail：zhihongfan0815@163.com）。