HPV检测在宫颈病变病理诊断及CIN术后随访中的临床意义

冯晓洁

（云南省昆明市第一人民医院 昆明 650011）

HPV检测在宫颈病变病理诊断及CIN术后随访中的临床意义

冯晓洁

（云南省昆明市第一人民医院 昆明 650011）

目的：探讨宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒（HPV）亚型检测在宫颈疾病诊断和宫颈上皮内瘤变（CIN）术后随访的意义。方法：选择我院妇科行HPV病理检测患者533例，其中HPV阳性120例，采用导流杂交基因芯片技术进行HPV亚型检测，29例手术治疗CIN患者随访3～12个月。结果：CIN及宫颈癌高危HPV感染率分别为93.3%、100%，均显著高于宫颈炎组（P＜0.05）；随着CIN宫颈病变程度的加重，HPV亚型转阴率降低，但不同级别术后3、5、12个月的转阴率相比无统计学意义（P＞0.05）。结论：HPV分型检测用于宫颈疾病的筛查，可确定HPV类型，判断是否为多重感染，为宫颈病变转归提供警示，也可作为CIN患者术后监测的重要指标。

HPV亚型；宫颈病变；病理诊断；CIN；随访

本文以2009年4月～2010年12月于我院病理科行HPV检测患者533例作为研究对象，旨在探讨HPV分型检测在宫颈疾病诊断与治疗中的意义以及在CIN术后随访的价值。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2009年4月～2010年12月期间于我院妇科行HPV病理检测的533例宫颈病变患者，从中筛选出HPV阳性患者120例（阳性率22.5%），年龄21～73岁，平均39.5岁；病理诊断结果：宫颈炎81例，CINⅠ11例，CINⅡ10例，CINⅢ9例，宫颈癌9例。120例患者均接受21种HPV亚型检测。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 样本采集前3 d叮嘱患者不得阴道内放药或做阴道冲洗。患者取膀胱截石位，窥阴器扩开阴道，暴露宫颈，宫颈或阴道残端分泌物过多时，无菌生理盐水棉球擦拭。专用取样器在宫颈外口2 cm处轻柔搓动，顺时针旋转5圈，慢慢取出采样器，置入盛有专用细胞保存液的取样管中，拧断刷头入管中，拧紧瓶盖送检。

1.2.2 HPV基因分型检测 采用医用核酸分子快速杂交基因分型试剂盒（凯普生物科技有限公司生产）检测21种HPV亚型，包括16种高危亚型（HPV16亚型、18亚型、31亚型、33亚型、35亚型、39亚型、45亚型、51亚型、52亚型、53亚型、56亚型、58亚型、59亚型、66亚型、68亚型及HPVCP8304亚型）和5种低危亚型（HPV6亚型、11亚型、42亚型、43亚型、44亚型）。

1.2.3 DNA提取 均匀震荡取样管，取0.5 mL样本，12 000 rmp离心3 min，去除上清液，加生理盐水漂洗1～2次，再去上清液，加裂解酶50 μL，煮沸裂解，DNA释放。

1.2.4 HPV-DNA聚合酶链反应（PCR）扩增 按照23.5 μL∶0.75 μL的比例兑PCR-Mix与DNA Taq酶，摇匀后加入1 μL DNA模板，均匀混合后进行PCR扩增，仪器采用美国PE9600PCR扩增仪。95℃变性20 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，扩增40个循环后继续72℃延伸，计时5 min停止。

1.2.5 导流杂交基因分型 杂交仪预热45℃，杂交平台上放入配套的21种HPV基因寡核苷酸探针的低密度基因芯片，单次可同时检测15个样本。杂交反应前，将23.5 μL生物素标记的PCR扩增物加热至95℃，变性10 min，置入冰水浴2 min，加入杂交液。导流杂交仪HybriMax TM上25℃孵育10 min，进行导流杂交。杂交后，0.5 mL杂交液冲洗3次，封阻液25℃环境下封阻孵育5 min，再加入0.5 mL酶标液，孵育3 min。冲洗液反复冲洗杂交膜，彻底去除未结合酶标液。调节温度至36℃，加入0.5 mL NBT/BCIP底物（Roche）显色剂，至显色完成。1 h内观察检测结果。

1.3 评定与分级 显色剂显示出蓝紫色圆点视为阳性，根据膜条上HPV亚型分布判定感染的HPV亚型，一个圆点阳性为单一HPV亚型感染，两个或两个以上圆点阳性则为HPV亚型多重感染。病理检查结果按照细胞异型性程度和范围分为：宫颈上皮细胞正常良性细胞改变（BCC）、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级以及鳞状上皮癌（SCC）。

1.4 统计学处理 采用SPSS13.0软件对数据进行统计学处理，采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同宫颈疾病与HPV感染关系 120例HPV阳性患者21种HPV亚型全部检出。随着病变程度的加重，高危亚型HPV检出率逐渐增高。CIN不同分级患者HPV感染率相比无显著性差异（P＞0.05）；CIN及宫颈癌高危HPV感染率分别为93.3%、100%，均显著高于宫颈炎组（P＜0.05）。见表1。

表1 不同宫颈病变组织活检病理结果与HPV感染的关系 例

2.2 术后不同时间内HPV亚型检测结果 术后随访12个月，其中术后6个月内1例患者失访，至术后12个月，失访8例，均因联系方式更改。见表2。

表2 CIN患者治疗后3个月、6个月、12个月HPV亚型检测结果 例

3 讨论

高危性HPV亚型是宫颈癌发生的主要因素，早期检测诊断，提高宫颈癌检出率对女性的健康意义重大[1～2]。本研究中CIN不同分级的高危HPV亚型感染率为90.9%、90.0%和100%，呈现增高的趋势，但差异无统计学意义；宫颈炎、CIN及宫颈癌高危HPV感染率分别为80.2%、93.3%、100%，差异具有统计学差异。因此，高危亚型HPV感染所致CIN和宫颈癌发病率明显高于低危型，且随着宫颈病变的加重，患者高危HPV感染率增高，与卓晓娟等的报道一致[3]。

本研究全部CIN接受LEEP治疗，术后严密随访。术后3个月CINⅠ转阴率100%，CINⅡ转阴率90.0%，CINⅢ转阴率77.8%；术后6个月转阴率分别为100%、88.9%和77.8%；术后1年随访22例，转阴率分别为100%、87.5%、80.0%。提示LEEP手术对各级CIN的HPV均有清除能力，可彻底解除CINⅠ的HPV感染情况，对CINⅡ和CINⅢ的HPV清除能力略低，但这一情况可随着术后随访时间的延长得到改善。建议在CIN患者接受治疗后，应当定期复查，提高重视。

[1]支园园,尹格平.HPV检测在宫颈病变诊断及CIN术后随访中的价值[J].现代妇产科进展,2012,21(7):563-564,567

[2]侯文静,张蓉,朱华.TCT联合HPV亚型检测在CIN诊断和随访中的临床意义[J].中国妇幼保健,2010,25(33):4 853-4 855

[3]卓晓娟,陈昭日,李阳明,等.高危型HPV检测在CINⅡ-Ⅲ治疗后随访中的意义[J].潍坊医学院学报,2012,34(2):128-129

R711.74

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2014.02.039

2013-10-25）

●研究生论坛●