隐球菌的免疫检验分析

于 洋

黑龙江省第四医院道外分院，黑龙江 哈尔滨 150050

为隐球菌病中某些种或其变种所致的深部真菌病，其中以新生隐球菌感染所致急性、亚急性或深部真菌病为最多，可引起急性或慢性脑膜炎、脑膜脑炎、也可致肝、心、肺、骨、皮肤、眼、淋巴结感染。在免疫功能低下时，微白隐球菌、劳伦特隐球菌也可致病［1］。

1 微生物检验

1.1 直接镜检

用病人脑脊液作墨汁负染色检查，涂片中可见圆型、厚壁、出芽或不出芽的厚壁孢子，外围有一圈透光的荚膜，其厚度可与菌体相等。厚荚膜有诊断意义，也是鉴别致病与不致病的依据之一。在黑色背景下可镜检到透亮菌体和宽厚荚膜。非致病性隐球菌无荚膜。

1.2 乳胶凝集试验

为一种凝集试验，系颗粒性抗原（细菌、真菌、红细胞、胶乳等）或吸附于表面的抗原（或抗体）与相应的抗体（或抗原）结合出现肉眼可见的凝集块（凝集反应）。而乳胶凝集反应是利用聚苯乙烯胶乳颗粒具有吸附蛋白质—类生物高分子的性能，以它作为载体直接吸附抗体（或抗原）形成致敏胶乳颗粒，与相应抗原（或抗体）产生反应使胶乳凝集为肉眼可见的白色沉淀即为乳胶凝集反应。待检标本有脑脊液、血清、尿或皮肤组织浸出液，先56℃ 30 min灭活其中可能存在的其它病原（包括HIV），标本如混浊者先取120 μl离心沉淀，再加入 pronase 20 μl，以消化非特异蛋白以增加标本的敏感性，再加入酶中止液，如为尿液，应以缓冲液稀释一倍。取40 μl待检液滴加于特制的乳胶板第一孔内（也可以洁净载玻片）；第二孔内加入兔抗正常球蛋白抗体（LN）致敏乳胶液40 μl（阴性对照）；第三孔内加入抗隐球菌抗原乳胶液40 μd；于上述各孔内各加抗隐球菌抗体致敏乳胶液10μl；充分混合各孔内的液体（以小玻棒）并置于160 rpm振荡器10 min或前后缓缓摆动玻板，判定结果。

1.3 酶联免疫试验（EIA）

为标记免疫测定方法之一，系将抗原、抗体等成分以各类标记物标记之，使抗原抗体反应更为敏感而成为肉眼可检测的方法。例如以酶标记后，定量测定标记于抗原或抗体上的酶活性以间接测定抗原抗体的存在及其相应含量，由于酶反应可沿催化反应而放大，抗原及抗体的酶标记物甚稳定，致本方法具高度敏感及特异。具体测定方法有间接法、双抗体夹心法及标记抗原竞争法，双扰体夹心法尚可用以测抗原。以酶联免疫法测定隐球菌荚膜多糖抗原系列系用抗体具有结合固相载体（聚氯乙烯塑料板）表面而不影响其免疫活性的特点，将已知抗体吸附于聚氯乙烯板孔内，加入待检的相应抗原的标本与之结合后，再加入标以酶的相应抗体，如能结合，最后加入适当基质使酶分解，从酶分解后出现的颜色反应可计算出待检标本的抗原含量［2］。此双抗体中，第一抗体针对标本中的抗原，第二个标有酶的抗体是针对复合物的抗体（这些可购自生物制品所或按上法制备）。

1.4 荧光免疫测定法（FA）

以已知特异抗体来测定抗原。本法多用于免疫病理中，即测定福尔马林固定的组织切片或新鲜冰冻切片中测定新生隐球菌及其多糖产物等抗原，本方法如以念珠菌的某些种（如克柔氏念珠菌）抗体吸收后，可提高其特异性。

2 隐球菌病常见疾病

隐球菌病是新型隐球菌感染所致的全身感染性疾病，中枢神经系统隐球菌感染临床最常见，其中脑膜炎型以脑膜刺激症状为主要临床表现；脑膜脑炎型，除脑膜病变外，还有脑实质的损害，可出现相应部位的临床症状和体征；肉芽肿型，可因颅内肿块的压迫造成相应的神经系统症状和体征。肺隐球菌病，患者可表现为低热、胸痛、咳嗽和乏力等症状。

3 临床意义

当机体免疫力降低时，新生隐球菌经呼吸道吸入而感染，引起肺部轻度炎症，并可播散至全身其他部位，包括皮肤、骨、心脏等组织，最易侵犯中枢神经系统，引起隐球菌性脑膜炎。临床表现类似结核性脑膜炎，预后不良。由于临床上抗生素、激素和免疫抑制剂的广泛使用.近年来新生隐球菌感染的病例有增多的趋势。

［1］ 秦启贤，翁心华，朱利萍.临床真菌学［M］.上海：复旦大学出版社，2001（5）：346-363.

［2］ 许金国，丁海峰.隐球菌病的研究进展［J］.中国麻风皮肤病杂志，2005，21（4）：288-291.