北五味子繁殖技术1)

张顺捷，刘刚，颜冰，郭玉兰，孟黎明

(黑龙江省林副特产研究所，黑龙江牡丹江157011)

北五味子[Schisandrachinesis(Tuncz.) Baill.]也称五味子，为五味子科五味子属多年生落叶木质藤本植物，因果实甘、酸、辛、苦、咸五味俱全而得名。北五味子主产地为辽宁、黑龙江、吉林等省，俄国东部大部分地区，韩国和日本东北部也有分布[1]。北五味子属约30种，主产于亚洲东部和东南部，我国约有19种，美国东南部有1种分布。中国药典2000年版收载有2种五味子：五味子[Schisandrachinensis(Turcz.) Baill.]及华中五味子(S.sphenantheraRehd. et Wils.)，前者收载为五味子(俗称北五味子)，后者收载为南五味子。《本草纲目》中记载：“五味子今有南北之分，南产者色红，北产者色黑，入滋补药，必用北者为良”[2]。北五味子自古以来就受到我国医药工作者的高度重视，是著名的滋补性中药，以果实和种子入药，有效成分为木脂素类化合物，还含有萜类、有机酸、多糖类等化学成分。北五味子具有降酶保肝、保护中枢神经系统、抗爱滋病毒、抗肿瘤、抗衰老、抑制胆固醇生物合成等作用[1,3]。北五味子还含有多种营养成分，具有丰富的营养价值，为第三代新兴果品，其果实在国际上已成为一种新兴食品工业的重要原料[4]。北五味子育种与栽培技术的研究，是解决扩大北五味子资源量的措施之一。为了保护野生资源和满足越来越大的生产需要，我国从20世纪90年代开始开始重视北五味子的人工栽培研究，系统地开展了规范化栽培、资源收藏评价、新品种选育研究；并选育出我国第一个北五味子无性系新品种“红珍珠”[5]。因为没有成熟的无性繁殖体系，这一优良品种得不到推广。

1 播种育苗技术

北五味子的人工栽培中，因没有成熟的无性繁殖体系，而采用有性繁殖的方法，用种子繁殖的五味子苗，根系发达长势旺，芽苞饱满，有较强的生命力，移栽成活率高。

1.1 种子处理

9月中旬，采收成熟的果实，搓去果皮果肉，漂除瘪粒，用清水浸泡3d，将种皮上的果肉泡净，清洗干净，用1∶3的细湿河沙(多菌灵500倍液消毒处理)混合拌匀，种沙的湿度为55％，以用手捏成团不滴水，轻晃散开为宜。将拌匀的种子放入透气的编织袋中，选择背风向阳不积水地块，挖50～80cm深的土坑中，用土覆盖20cm，在封冻前浇透水，注意种子保持湿度，自然越冬即可。播种前10天左右将种子取出，保持湿度进行催芽处理，当80％种子裂嘴或露出胚芽即可播种。

1.2 圃地选择

苗圃地最好选择地势平坦，水源方便，排水良好，土壤疏松、肥沃的沙壤土和黑腐殖土为好，做到深耕、细耙、亩施腐熟好的农家肥5 000kg，做床宽1.1m，高15cm的苗床，长度适地块而定。

1.3 播种

播种采用条播或撒播均可。条播按行距15～20cm，开沟深3cm，将种子均匀撒入沟内，每亩用种量在6～8kg。播后覆盖2cm厚细土，镇压，上盖一层松针或草帘，浇透水，保持湿度，防止干旱。为防止幼苗发生立枯病和其它病害，在播种后结合浇水喷施800～1 000倍代森锌或敌克松水剂防病。当出苗率达到70％时撤除覆盖物，待幼苗长到5～6cm时，真叶形成，适时松土除草。适当进行叶面施肥和病虫害防治。

2 组织培养技术

2.1 供试材料

在5～6月，选取生长健壮的北五味子的嫩茎段、叶片、叶柄作为外植体。

2.2 试验方法

将采回来的嫩茎段、叶片、叶柄用流水冲洗4～5h，然后将叶片、叶柄和嫩茎段切开移到超净工作台上，先用75％酒精浸泡1min，取出后用无菌水冲洗2～3次，再用0.1％升汞溶液消毒，嫩茎段和叶柄消毒10min，叶片消毒5min，目的是为了防止叶片表皮受损伤。取出后用无菌水冲洗5次，然后将嫩茎段和叶柄切成1.0cm左右的小段，叶片切成1.0cm2的小块，按无菌操作要求，接种于诱导培养基上，接种后将培养瓶置于20～26℃，光照12 h/d，光照强度为1 500～2 000 1x的条件下培养。诱导愈伤组织后，按诱导培养基的种类，接种到愈伤组织分化培养基上。在25℃,12～14h光照条件下进行培养。

2.3 培养基组成

以MS为基本培养基，其中附加不同种类和浓度的细胞分裂素6-BA,KT和生长素NAA,2,4-D,IBA，组成不同种类的培养基，pH值为5.8，琼脂粉9.0g/L， MS基本培养基中蔗糖浓度为30.0g/L。培养基配置成后注入50mL三角瓶，每三角瓶注入20mL培养液，瓶口用锡箔纸封盖，在121℃条件下灭菌15min。

当基本培养基为MS时，加入一定浓度的2,4-D和IBA时对北五味子的嫩茎段、叶片和叶柄有利于愈伤组织的诱导，并且对于北五味子的三个部位的外植体来说，诱导效果最佳的培养基是MS+KT0.1mg/L+NAA0.2mg/L+2,4-D1.0mg/L+IBA0.1mg/L，并且叶片的诱导效果要明显好于嫩茎段和叶柄诱导效果。一定浓度的IBA有利于叶片和嫩茎段愈伤组织的诱导，而当浓度过高时则对叶片和嫩茎段愈伤组织的诱导有抑制作用，诱导的最佳IBA浓度是0.3mg/L ；当采用同种分化培养基时，不同的诱导培养基对分化率有一定的影响，嫩茎段是进行北五味子组织培养研究最佳的外植体；最好的生根培养基是N_6+NAA0.6mg/L+IBA2.0mg/L[6]。生根培养基为1/4MS+BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L+AC0.5mg/L，生根率达到93.48％，平均根长达3.5cm，在炼苗培养中，珍珠岩∶蛙石(1∶l)的混合基质上移栽成活率最高[7]。

[1]Hancke JL,Burgos RA,Ahumada F.Schisandrachinensis(Turcz.) Baill[J]. Fitoterapia,1999,70(5): 451-471.

[2]周以良. 黑龙江树木志[M]. 哈尔滨: 黑龙江科学技术出版社,1986: 238.

[3]Opletal L,Sovova H,Bartlova M. Dibenzo[a,c]cycloo-ctadiene lignans of the genusSchisandra: importance,isolation and determination[J]. J. Chromatography B.,2004,812(4): 357-371.

[4]李爱民,孙宪波,谷万良. 北五味子的利用与栽培概述[J]. 特产研究,1993(1): 36-38.

[5]李爱民,王玉兰,艾军,等. 北五味子新品种“红珍珠”选育报告[J]. 特产研究,2000(1): 31-35.

[6]武立丹. 北五味子组织培养研究[D].延边大学,2009.

[7]吴玲娜. 华中五味子组织培养及其次生代谢物的分析研究[D].中南林业科技大学,2008.

1)黑龙江省财政自拟项目(2011-01)