当归四逆汤成分组合预处理对MIRI大鼠心律失常的影响

钱国强 彭 霞 高宇勤 蔡 川 梁雪冰 郭 军 潘胜军 赵国平

(黄淮学院,河南 驻马店 463000)

再灌注性心律失常(RA)以室性心律失常居多，如室性心动过速和心室颤动等。RA发生的基本条件：①再灌注区必须存在有功能上可以恢复的心肌细胞，这种心肌细胞存在越多，心律失常的发生率越高；②再灌注前缺血时间的长短：实验证明，全冠状动脉阻断后15～45 min再灌注，心律失常的发生率最高，缺血时间过长或过短，其发生率都低；缺血心肌的数量、缺血的程度及再灌注恢复的速度与心律失常的发生率呈正比。NO为内皮依赖性舒张因子，可舒张血管、减少心脏前后负荷而保护心肌，直接增强心室肌的扩张效应来保持心输出量〔1〕。本研究观察当归四逆汤有效成分组合(GFPC)〔2〕，对MIRI大鼠RA的发生率及其与NO的关系，探讨防治MIRI的有效机制。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1动物 SPF级雄性SD大鼠32只，体重280～400 g，购自广东省实验动物中心，许可证号SCXK(粤)2008-0002，本实验共有2只大鼠由于麻醉或手术原因死亡，死亡率为6.3%。

1.1.2药物 芍药苷、阿魏酸、甘草酸、肉桂酸均购自南京泽朗医药科技有限公司。NO试剂盒：购自南京建成生物工程研究所；L-NAME：美国Sigma公司。

1.1.3器材 心电图机(ASB240V生物机能实验系统)，成都遨升电子公司低温离心机(Eppendorf公司)。

1.2方法

1.2.1分组 32只雄性SD大鼠分为4组,每组8只。shame组：未经缺血再灌注处理；I/R组：SD大鼠心肌缺血30 min再灌注120 min后取材；PPC组：灌胃4 d，每天1次，最后一次于实验前30 min灌胃，灌胃剂量为甘草酸50 mg/kg，阿魏酸400 mg/kg，芍药苷100 mg/kg，肉桂酸400 mg/kg，心肌缺血30 min再灌注120 min取材；PPC+L组：灌胃4 d天，每天1次，最后一次于实验前30 min灌胃，灌胃剂量为甘草酸50 mg/kg，阿魏酸400 mg/kg，芍药苷100 mg/kg，肉桂酸400 mg/kg，并于再灌注前15 min给予L-NAME(eNOS选择性抑制剂)30 mg/kg，再灌注120 min取材。

1.2.2心电监测 再灌注心律失常的发生包括早搏、传导阻滞、房扑、房颤、室速、室颤。

1.2.3NO检测方法 血液标本静置30 min，以3 000 r/min，4℃,离心15 min，取上清按照试剂盒说明书操作，根据公式计算NO含量。

2 结 果

2.1MIRI模型大鼠心电图改变 ST段明显抬高≥0.1 mV或T波高耸；心肌颜色变暗红色为结扎成功标志，30 min后松开结扎线，抬高的ST段下降在 1/2以上为缺血再灌注成功。

2.2再灌注心律失常发生率 与shame组(12.5%)比较，I/R组RA发生率(87.5%)显著高于shame组(P<0.05)，与I/R组比较PPC组的发生率(25.0%)显著下降(P<0.05)，PPC+L组发生率为50.0%;GFPC可明显降低MIRI大鼠RA的发生率。

2.3血清NO浓度 与shame组比较，I/R组大鼠血清NO含量(12.98±0.94)明显降低(P<0.05);与I/R组(4.95±0.212)比较,PPC组血清NO含量(9.27±0.73)明显升高(P<0.05);与PPC组比较,PPC+L组血清中NO含量(7.81±0.34)明显降低(P<0.05)。MIRI时，大鼠血清中NO含量明显降低，GFPC可明显升高大鼠血清中NO。

3 讨 论

血管内皮细胞(VEC)作为组织与血液间的第一道屏障，在维持血液循环的稳定中起重要调节作用〔3〕,VEC功能障碍与RA的发生和发展有关,NO合成释放是VEC损伤的标志之一，VEC功能障碍与心律失常的发生和发展有关〔4〕。研究表明，L-精氨酸可明显抑制RA的发生，其机制与升高再灌注时体内NO水平有关，有研究〔5〕指出RA级别与NO含量呈负相关。NO作为重要的信号分子介导多种生理功能,在心律失常的病理状态下,EC功能受损,NOS及NO产物合成减少,并且活性也明显降低,提示NO参与了心肌氧合期的损伤反应〔6〕。MIRI导致的RA包括传导阻滞、早搏、室速、室性并性心律等多种形式。本实验将GFPC联合应用，从多靶点发挥了抑制RA发生、抗MIRI的作用。实验结果表明用eNOS选择性阻断剂L-NAME后，大鼠RA发生率有所上升，但未明显升高，无统计学意义，CFPC药物预处理后，RA发生率明显下降，说明药物组合可明显升高血清中NO的含量，降低RA的发生率，起到对抗RA的作用。RA的发生与NO的量成反比，eNOS蛋白磷酸化后，可以促进L-arg合成释放NO增加，从而激活下游通路发挥NO的抗心律失常、保护心肌作用，此结果与实验报道相一致〔7〕。

4 参考文献

1Förstermann U，Münzel T.Endothelial nitric oxide synthase in vascular disease：from marvel to menace〔J〕.Circulation，2006；113:1708-14.

2钱国强，赵国平.当归四逆汤四种有效成分对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠血管内皮细胞保护的最佳配比研究〔J〕.中药材,2011；34(4):81-5.

3Davies PF.Mechanisms involved in endothelial responses to hemodynamic forces〔J〕.Atherosclerosis，1997；131(Suppl)：15 -7.

4于春霞.一氧化氮与急性心肌梗死后心律失常〔J〕.中国心血管杂志，2006；11(4):149-51.

5张立克，朱盈芬，芦玲巧，等.内源性一氧化氮与缺血/再灌性室性心律失常的关系〔J〕.首都医科大学学，1998；19(2)：113-5.

6王秀红，路方红.内皮素一氧化氮与心血管疾病〔J〕.中国慢性病预防与控制，2005；13(3)：141.

7Pabla R,Curtis MJ.Effect of endogenous nitric oxide on cardiac systolic and diastolic function during ischemia and reperfusion in the rat isolated perfused heart〔J〕.J Mol Cell Cardial,1996；28(10):2111-212.