胃肠宁胶囊的提取工艺研究

刘 瑛，陈景勇，黄劲松，黄彩珠，何 梅，欧文星

(1. 清远华能制药有限公司，广东 清远 511517;2. 清远职业技术学院，广东 清远 511510)

肠宁胶囊由扭肚藤、火炭母、石榴皮三味中药制得，可用于治疗胃肠炎、消化不良、腹痛痢疾等疾病。其中扭肚藤、火炭母的主要功效是清热利湿、止痛止泻，石榴皮的主要功效为涩肠止泻，三药合用具有良好的止泻止痛作用［1，2］。胃肠宁方为民间验方，传统使用方法是加水煎煮成汤剂直接服用，使用不便，不易保存。本课题组采用水提醇沉工艺提取其内有效成分，加入淀粉等辅料，制得胃肠宁胶囊，使用携带方便，符合中药“三效三小五方便”的发展原则。胃肠宁胶囊中扭肚藤为君药，东莨菪内酯为其主要药效成分［3］。为有效控制胃肠宁胶囊的质量，本实验采用正交实验设计，以提取液中东莨菪内酯的含量和干膏得率为评价指标，对胶囊提取工艺进行了优化。

1 仪器与试药

230 系列高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司，DG230－4 在线脱气机、LU230 低压梯度混合器、P230 高压恒流泵、UV230+紫外－可见检测器及EC2000 工作站);KQ－500 型超声仪(上海恒平科学仪器有限公司);RE－52 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);半自动胶囊填充板(吉首市中诚制药机械厂)。

扭肚藤、火炭母、石榴皮均购自广州至信药业有限公司(批号分别为20131212，20131225，20131220);东莨菪内酯对照品购自中国药品生物制品检定所(批号11538－201201);乙腈(色谱纯，美国Fisher公司);其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 东莨菪内酯HPLC 分析方法的建立

2.1.1 色谱条件 色谱柱Diaomonsil C18色谱柱(250 ×4.6mm，5μm)，ODS 预柱;流动相乙腈－0.2%磷酸水(15:85);流速1.0mL·min－1;检测波长346nm;柱温30℃;进样量20μ L。

2.1.2 溶液的配制 对照品溶液的制备:取东莨菪内酯对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成0.502mg·mL－1的对照品储备液备用。供试品溶液的制备:精密吸取胃肠宁提取液5mL，加甲醇5mL，精密称重，超声20min，取出放冷，称定质量，甲醇补足损失质量，用0.45μm 微孔滤膜过滤，滤液即为供试品溶液。

2.1.3 线性关系考察 精密吸取东莨菪内酯对照品储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL，用甲醇稀释定容至10mL 量瓶中，得系列对照品溶液。按上述色谱条件进行测定，以东莨菪内酯的峰面积(Y)对其浓度(X)进行线性回归，回归方程Y=44.327X+1.1957，r =0.9997。结果表明:东莨菪内酯在5.02 ～40.16μg·mL－1范围内线性关系良好。

2.1.4 精密度实验 取同一浓度的对照品溶液(浓度为30.12μg·mL－1)，连续重复进样6 次，峰面积的RSD 为1.4%，表明仪器精密度良好。

2.1.5 稳定性实验 取同一胃肠宁提取液，按“2.1.2”的方法制成供试品溶液，在上述色谱条件下，分别于0、2、4、6 和8h 进样分析，峰面积的RSD 为1.6%，表明供试品溶液在8h 内稳定。2.1.6 重现性实验 精细吸取同一胃肠宁提取液6 份，按“2.1.2”的方法制成供试品溶液，进样，计算供试品中东莨菪内酯的含量，RSD 为1.8%，表明本法重现性良好。

2.1.7 加样回收实验 精密吸取已知东莨菪内酯含量的胃肠宁提取液6 份，置三角瓶中，分别精密加入对照品50μg，按“2.1.2”的方法制成供试品溶液，进样测定，计算东莨菪内酯平均回收率为98.56%，RSD 为1.3% (n=6)。

2.2 正交实验设计

2.2.1 因素与水平的确立

根据处方中药物性质及预经验结果，以干膏得率和提取液中东莨菪内酯的含量为评价指标，选择煎煮次数，煎煮时间，加水量，醇沉浓度为考察因素对提取工艺进行优化［4］。各因素设计3 水平，因素水平表见表1。

表1 正交试验因素水平表

2.2.2 正交样品溶液的制备

按L9(34)正交试验表进行水提醇沉处理，具体工艺流程如下:原处方药材→加水煎煮→水提液→浓缩至一定体积→醇沉→减压过滤→滤液回收乙醇→浓缩→定容至50mL→得9 份样品溶液。

2.2.3 干膏得率的测定

参照《中国药典》2010 年版一部(附录XA)浸出物测定法［5］，精密吸取正交试验所得的药液10mL，分别置于已干燥至恒重的蒸发皿(设重量为W1)中，水浴挥干，残渣于105℃干燥3h，取出，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量(重量为W2)，通过以下公式计算干膏得率。

2.2.4 正交实验结果分析

表2 正交试验结果

评分标准:综合评分=干膏得率×30% +东莨菪内酯含量×70%。

表3 干膏得率方差分析

表4 东莨菪内酯含量方差分析

表5 综合分析方差分析

以上实验结果表明，影响干膏得率的因素依次为A ＞D ＞C ＞B，影响东莨菪内酯含量提取效率的因素依次为A ＞B ＞D ＞C，通过方差分析表可知，提取次数对东莨菪内酯含量的影响有显著性影响，综合干膏得率和东莨菪内酯含量最优的提取工艺为A3B1C2D2，即为煎煮3 次，每次1h，加10 倍量水，醇沉浓度为60%。将此最佳提取工艺与醇沉工艺，重复试验3 次，结果见表6。

由表6 可知，干膏得率均值为7.45%，东莨菪内酯含量均值为52.35μg/mL，说明该提取工艺条件基本稳定，具有重现性。

表6 提取工艺验证试验结果

3 讨论

胃肠宁原方为汤剂，由扭肚藤、火炭母、石榴皮加水煎煮制得，故胃肠宁胶囊的提取也选择了加水煎煮，但研究发现直接煎煮浓缩得到的浸膏含有较多的鞣质、蛋白质、糖类等，粘度太大，制粒需辅料较多，为纯化提取物，本课题采用了水提醇沉工艺。通过对胃肠宁胶囊提取工艺的正交筛选，确定最优的提取工艺为加10 倍量水，煎煮3 次，每次1h，醇沉浓度为60%，经验证本工艺稳定可行。

东莨菪内酯的含量测定中流动相的选择曾考察了甲醇－水、乙腈－水、甲醇－乙腈－磷酸水、乙腈－磷酸水、甲醇－磷酸水等多个系统多个比例，最终确定乙腈－0.2%磷酸水(15:85)时，东莨菪内酯与各杂质峰能达到较好分离(分离度大于1.5)，峰形较好，满足含量测定要求。

［1］李沛波，王永刚，彭维，等. 复方扭肚藤胶囊对实验性腹泻的影响［J］. 中国中药杂志，2008，33(3):323－325

［2］李沛波，王永刚，彭维，等. 复方扭肚藤胶囊镇痛、抗炎作用的实验研究［J］. 中药材，2008，31(1):118－120

［3］彭维，王小锐，王永刚，等.HPLC 测定扭肚藤药材中东莨菪素的含量［J］. 中药材，2007，30(5):562－563

［4］马燕，韩刚，张晓鹏，等. 正交实验法优选栝楼根胶囊提取工艺的研究［J］. 中国实验方剂学杂志，2011，17(9):4－6

［5］国家药典委员会. 中华人民共和国药典:2010 年版(一部)［S］. 中国医药科出版社，2010:附录62