蛇尾草醇提取物对小鼠抗应激作用的实验研究

廖昌能

（广西百色市人民医院，右江民族医学附属西南医院药剂科，广西 百色 533000）

蛇尾草 ［Herminium Lanceum （Thunb.）Vuijk］又名唇角盘兰、蛇含草、鸡心贝母、人头七、土贝母等，分布于东北至云南、西藏、广西、台湾等地，主要以根茎及全草入药，性甘、平，归肾、肝、肺三经。具有补肾强筋、润肺抗痨、养血止血之功效，用于跌打损伤、筋骨劳伤、肺结核、虚劳、刀伤出血、贫血两眼昏花等疾病治疗［1］，但现代药效学研究报道较少。为了验证该药物是否具有补肾强筋、润肺抗痨功效，该实验从抗疲劳、耐缺氧、耐低温、耐高温入手对抗应激作用进行动物研究，为该植物资源的开发及临床应用提供实验依据。

1 实验材料

1.1 试剂与仪器 钠石灰 （汕头市西陇化工厂，批号：121009）。亚硝酸钠 （上海之臻化工有限公司，批号：130310）；AR224CN 型电子分析天平 （奥豪斯）；RE－301型旋转蒸发仪 （北京瑞成设备有限公司）。

1.2 动物 清洁级昆明种小白鼠，体重 （20±2）g，由右江民族医学院动物实验中心提供。

1.3 药物的制备

1.3.1 药材采集 蛇尾草采购于百色药市，经右江民族医学院附属医院中药房副主任药师刘春荣鉴定为兰科植物蛇尾草。

1.3.2 蛇尾草醇提取物的制备 取蛇尾草全草500g，加适量无水乙醇浸润1h，加入1 000ml无水乙醇，80℃进行回流提取2h，分别回流提取2次，过滤，合并滤液。旋转蒸发仪浓缩至无乙醇味，得到乙醇提取物浸膏，备用。

2 实验方法

2.1 动物分组及处理 取小鼠40只，按体重随机分成4组，每组10只，即生理盐水组和蛇尾草醇提取物高、中、低剂量组 （12g／kg、6g／kg、3g／kg），灌胃给药，2次／天，每次给药容积为0.1ml／10g，连续7d。

2.2 小鼠抗疲劳实验［2－3］末次给药后1h，在各鼠尾根部束一重量为体重10%的铅片，投入水温为 （25±0.5）℃，水深45cm 的水桶中游泳，以头部沉入水中15s内不能游出水面为体力耗竭，观察记录小鼠游泳的持续时间。

2.3 小鼠常压耐缺氧实验［2－3］末次给药后1h，将各小鼠分别置于盛有10g钠石灰的250ml玻璃瓶中，每瓶一只，瓶口用凡士林密封，以呼吸停止为死亡指标，记录小鼠自封入瓶中至死亡的时间为存活时间。

2.4 小鼠耐亚硝酸钠组织中毒性缺氧［2，4］：末次给药后1h，在各小鼠腹腔注射亚硝酸钠溶液240mg／kg，观察并记录小鼠注射亚硝酸钠后的存活时间。

2.5 小鼠耐低温实验［2，4］末次给药后1h，将各组小鼠置于 （－5±1）℃冰柜内，以小鼠呼吸停止为死亡指标，观察记录小鼠在低温条件下的存活时间。

2.6 小鼠耐高温实验［2，4］末次给药后1h，将各组小鼠置于 （45±1）℃恒温箱内，以小鼠呼吸停止为死亡指标，观察记录小鼠在高温条件下的存活时间。

2.7 统计学处理 应用SPSS 17.0for Windows统计分析软件进行处理，实验数据以 （±s）表示，实验结果采用配对样本t检验。

3 结果

3.1 蛇尾草醇提物对小鼠负重游泳时间的影响 从表1的实验结果可以看出，蛇尾草醇提物高剂量组与生理盐水组比较能显著地延长小鼠存活时间，差异有统计学意义 （P ＜0.01）；延长率提高了74.42%；蛇尾草醇提取物中剂量组与生理盐水组比较具有一定的延长小鼠小鼠存活时间，差异有统计学意义 （P ＜0.05）；延长率提高了46.89%；低剂量实验组与生理盐水组比较差异无统计学意义 （P ＞0.05）。

3.2 蛇尾草醇提物对小鼠常压耐缺氧能力的影响 从表2的实验结果可以看出，蛇尾草醇提取物高剂量组、中剂量组与生理盐水组比较能显著地延长小鼠存活时间，差异有统计学意义（P ＜0.01），延长率分别提高了66.67%、37.81%，低剂量实验组与生理盐水组比较差异无统计学意义（P ＞0.05）。

表1 蛇尾草醇提取物对小鼠负重游泳时间的影响 （±s，n＝10）

表1 蛇尾草醇提取物对小鼠负重游泳时间的影响 （±s，n＝10）

注：与生理盐水组比较，a：P ＜0.05，b：P ＜0.01

组别 剂量（g·kg－1）存活时间（t／min）延长率（%）－ 7.65±2.76－蛇尾草醇提取物高剂量组 12 13.35±4.29b 74.42蛇尾草醇提取物中剂量组 6 11.24±3.98a 46.89 3 8.52±2.37 11.33蛇尾草醇提取物低剂量组生理盐水组

表2 蛇尾草醇提取物对小鼠常压耐缺氧能力的影响 （±s，n＝10）

表2 蛇尾草醇提取物对小鼠常压耐缺氧能力的影响 （±s，n＝10）

注：与生理盐水组比较，a：P ＜0.01

组别 剂量（g·kg－1）存活时间（t／min）延长率（%）－ 23.46±4.61－蛇尾草醇提取物高剂量组 12 39.10±5.30a 66.67蛇尾草醇提取物中剂量组 6 32.33±4.7537.81 3 25.75±4.42 9.76 a 蛇尾草醇提取物低剂量组生理盐水组

3.3 蛇尾草醇提取物对小鼠亚硝酸钠组织中毒性缺氧的影响 从表3的实验结果可以看出，蛇尾草醇提取物高剂量组与生理盐水组比较能延长小鼠存活时间，差异有统计学意义（P ＜0.01），延长率提高了35.72%。蛇尾草醇提取物中剂量组与生理盐水组比较 （P ＜0.05）具有一定地延长小鼠小鼠存活时间，延长率提高了26.16%，低剂量实验组与生理盐水组比较差异无统计学意义 （P ＞0.05）。

表3 蛇尾草醇提物对小鼠亚硝酸钠组织中毒性缺氧的影响 （±s，n＝10）

表3 蛇尾草醇提物对小鼠亚硝酸钠组织中毒性缺氧的影响 （±s，n＝10）

注：与生理盐水组比较，a：P ＜0.05，b：P ＜0.01

组别 剂量（g·kg－1）存活时间（t／min）延长率（%）－ 13.55±3.49－蛇尾草醇提取物高剂量组 12 18.39±3.51b 35.72蛇尾草醇提取物中剂量组 6 3 14.11±4.13 4.15 17.10±2.66a 26.16蛇尾草醇提取物低剂量组生理盐水组

3.4 蛇尾草醇提取物对小鼠耐低温的影响 从表4的实验结果可以看出，蛇尾草醇提物高剂量组、中剂量组与生理盐水组比较能显著地延长小鼠存活时间，差异有统计学意义（P ＜0.01），延长率分别提高了51.51%、24.92%；低剂量实验组与生理盐水组比较差异无统计学意义 （P ＞0.05）。

表4 蛇尾草醇提物对小鼠耐低温的影响 （±s，n＝10）

表4 蛇尾草醇提物对小鼠耐低温的影响 （±s，n＝10）

注：与生理盐水组比较，a：P ＜0.01

组别 剂量（g·kg－1）存活时间（t／min）延长率（%）－ 80.56±14.37蛇尾草醇提取物高剂量组 12 123.50±14.03a 51.51蛇尾草醇提取物中剂量组 6 101.82±13.78a 24.92 3 88.20±15.40 8.21蛇尾草醇提取物低剂量组生理盐水组

3.5 蛇尾草醇提取物对小鼠耐高温的影响 从表5的实验结果可以看出，蛇尾草醇提物中剂量组、低剂量组与生理盐水组比较差异无统计学意义 （P ＞0.05），不能显著地延长小鼠高温存活时间，高剂量组与生理盐水组比较能延长小鼠高温存活时间延长率提高了31.02%，差异有统计学意义（P ＜0.01）。

表5 蛇尾草醇提取物对小鼠耐高温的影响 （±s，n＝10）

表5 蛇尾草醇提取物对小鼠耐高温的影响 （±s，n＝10）

注：与生理盐水组比较，a：P ＜0.01

组别 剂量（g·kg－1）存活时间（t／min）延长率（%）－ 43.20±9.89－蛇尾草醇提取物高剂量组 12 56.60±11.35a 31.02蛇尾草醇提取物中剂量组 6 49.20±9.37 13.89 3 5.60±10.56 5.56蛇尾草醇提取物低剂量组生理盐水组

4 讨论

应激是机体受到各种不利因素刺激时出现的非特异性性全身反应，过度的应激反应可造成机体的功能障碍导致疾病或死亡［5］。抗应激能力是机体适应环境变化的一种能力，具有抗应激能力的药物能增强各种对机体不利刺激的非特异性反应的抵抗能力，延长在有害刺激下的存活时间［6］。在实验研究中分别采用小鼠游泳实验、耐缺氧实验、耐寒实验和耐高温实验观察蛇尾草醇提取物的抗应激作用，蛇尾草醇提取物在游泳抗疲劳、常压耐缺氧、耐低温实验中高剂量组小鼠存活延长率分别为74.42%、66.67%、51.51%；中剂量组小鼠存活延长率分别为46.89%、37.81%、24.94%；在耐高温、组织中毒耐缺氧实验中，蛇尾草醇提取物高剂量组小鼠存活延长率分别为35.72%、31.02%。通过实验结果表明在抗疲劳、常压耐缺氧和耐低温下有显著的抗应激能力，在耐高温、组织中毒耐缺氧条件下抗应激能力相对较弱。初步判断蛇尾草醇提取物的抗应激能力与蛇尾草具有补肾强筋、补血、润肺功效相关。

虽然蛇尾草醇提取物具有抗应激作用，但是提高抗应激能力的机制均未清楚，仍需进一步探讨。蛇尾草成分比较复杂，化学成分的研究和其他药理活性均未有相关报道，还需要开展相关实验研究。

［1］ 谢宗万.全国中草药汇编 ［M］.2 版.北京：人民卫生出版社，1996.

［2］ 陈奇.中药药理研究方法学 ［M］.3 版.北京：人民卫生出版社，2011：765，769，770.

［3］ 陈百泉，娄丽杰，杜红岩，等.杜仲雄花茶对小鼠抗应激作用的实验 ［J］.河南大学学报，2010，29 （3）：198.

［4］ 高月娟，孟妍，张艳丽.太子参抗应激作用的实验研究 ［J］.齐齐哈尔医学院学报，2011，32 （12）：1886.

［5］ 孙琪，敖海清，王全年，等.慢性应激动物模型的应用与思考 ［J］.广东医学，2012，33 （14）：2182.

［6］ 梁尚华，童遥，梁尚清.中药对应激动物作用的实验研究概述 ［J］.上海中医药杂志，2004，38 （6）：53.