头孢地尼对细菌感染小鼠的体内抗菌作用

刘 琳 ，卢亚兰，杜 娟(．郑州大学附属郑州中心医院药学部，郑州 450007;．河南省肿瘤医院药剂科，郑州 450008)

头孢地尼(cefdinir，CD)为广谱第3 代头孢菌素，与其他β-内酰胺类抗菌药物一样，通过与细菌细胞壁上的青霉素结合蛋白(PBP)结合，使细菌细胞壁变厚，在隔膜形成部位发生水解并最终导致细菌死亡。头孢地尼对革兰阳性菌和革兰阴性菌有广谱抗菌活性，可抑制90%～100%的临床分离菌，头孢地尼可与金黄色葡萄球菌PBP1、2、3 及4 结合，与大肠埃希菌PBP1A、1B、2 及4 结合，研究表明［1-2］其对肺炎链球菌与肺炎克雷伯菌A、B、C 及G 群有相当有效的抗菌活性，对常见的β-内酰胺酶稳定。从药动学/药效学(PK/PD)的观点看，头孢地尼为时间依赖性抗菌药物，T＞最小抑菌浓度(MIC)的时间要求为40%～70%。研究报道［3-4］，头孢地尼对大多数菌株体外抗菌活性的MIC 为0．031～1．00 mg/L，最小杀菌浓度(MBC)为1．21～5．67 mg/L。头孢地尼口服后迅速从胃肠道吸收，组织分布广泛，对多种细菌具有一定的体外抗菌后效应，很少被代谢，主要以原形药从尿液中排出，消除t1/2约为1．7 h。国内未见报道细菌感染小鼠的体内抗菌活性的研究，因此本试验研究头孢地尼对郑州市分离的致病菌感染小鼠的体内抗菌作用。

1 材料

头孢地尼分散片(天津市津兰药业有限公司生产，批号:2L7803T，规格:100 mg);头孢妥仑匹酯片(汕头经济特区明治医药有限公司生产，批号:20110712，规格:100 mg);高活性干酵母(安琪酵母股份有限公司生产)。2 种药物均用0．5%羧甲基纤维素钠(CMC)在使用前配制成混悬液供试验用。非产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌(20100256)、肺炎克雷伯菌(20100214)、敏感金黄色葡萄球菌(20101211)和肺炎链球菌(20101334)(均为郑州市区临床分离的致病菌，由郑州大学基础医学院微生物学教研室鉴定和提供)。清洁级昆明种小鼠［体质量18～22 g，雌雄各半，由郑州大学实验动物中心提供，动物合格证号:SCXK(豫)2005-0001］。

2 方法

2.1 菌液稀释方法

按文献方法［5］，在超净工作台内用无菌接种环挑取金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌菌苔少许，分别接种于2 ml 营养肉汤液体培养基中。37 ℃恒温箱中培养6 h 后，取2 ml 该肉汤细菌混悬液转种至200 ml 营养肉汤液体培养基中，37 ℃恒温培养18 h 后为原菌液。临用前用灭菌高活性酵母液配制成适当浓度的菌液备用，悬液中酵母的终浓度为5%。

2.2 药液稀释方法

采用低比值系列稀释法［6］，2 个相临剂量组剂量差值为0．413。根据预试验结果按比例分别称药、溶解、混匀。

2.3 感染菌量预试

感染菌量预试取空腹体质量18～22 g 小鼠分为若干组，每组6 只，分别腹腔注射(ip)0．5 ml 不同浓度的金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染菌液，观察48 h 内各组小鼠存活情况，粗略计算各菌株感染小鼠的100%最小致死量(MLD)。

2.4 药物对感染致病菌小鼠的半数有效量(ED50)观察

将试验动物按空腹体质量、性别(♂、♀各半)均匀随机分为16 组(每组10 只):试验药(头孢地尼)、对照药(头孢妥仑匹酯)各7 组;MLD 阳性对照组;最高药物浓度阴性对照组。腹腔感染小鼠每只注射菌量为MLD 0．5 ml，定时观察7 d 内动物生存数。

2.5 数据处理

按Bliss 法分别计算头孢地尼及其对照药头孢妥仑匹酯(cefditoren，CTN)对上述各菌株感染小鼠的体内抗菌作用ED50和95%有效量(ED95)的95%可信区间，应用方差分析LSD 检验法对每组均数进行两两比较，P＜0．05 为差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 头孢地尼及头孢妥仑匹酯对4 株细菌的MIC 值

头孢地尼及头孢妥仑匹酯对4 株细菌(大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、青霉素敏感肺炎链球菌和苯唑西林敏感金黄色葡萄球菌)的MIC 值分别为3．8、0．92、0．68、0．57 与2．5、1．8、0．91、0．78 mg/L。

3.2 头孢地尼及头孢妥仑匹酯对4 株细菌感染小鼠的体内抗菌作用

头孢地尼及头孢妥仑匹酯对4 株细菌感染小鼠的体内抗菌作用见表1。在观察期内，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌感染的对照组小鼠全部死亡，其平均存活时间(n=10)分别为(34．37 ±5．19)、(28．64 ±2．56)、(19．60 ±7．20)和(21．63 ±6．48)h，观察各剂量头孢地尼与头孢妥仑匹酯治疗组小鼠7 d 内死亡率，结果表明2 种药物对金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌全身感染小鼠具有保护作用。头孢地尼与头孢妥仑匹酯对非产ESBL 大肠埃希菌的ED50分别为2．18、1．65 mg/kg，2 组比较差异无统计学意义(P＞0．05)，说明2 药对非产ESBL 大肠埃希菌的治疗作用无明显差异。头孢地尼对肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的ED50值为0．12～1．25 mg/kg，ED95值为2．16～9．87 mg/kg，与头孢妥仑匹酯比较，差异有统计学意义(P＜0．01)。头孢地尼和头孢妥仑匹酯对本株肺炎克雷伯菌的MIC 值相差较大，因此体内抗菌作用也有明显差别，头孢地尼的ED50及ED95值分别为1．25、9．87 mg/kg，头孢妥仑匹酯的ED50及ED95值分别为7．12、56．38 mg/kg，两者比较，差异有统计学意义(P＜0．01)，按等效剂量计算，头抱地尼对肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的治疗作用约比头孢妥仑匹酯强6 倍。

表1 头孢地尼与头孢妥仑匹酯对4 株菌感染小鼠的体内抗菌作用比较(¯x±s，n=10)Tab 1 In vivo antibacterial activity of cefdinir vs. Cefditoren proxetil on four different bacteria strain in mice(¯x±s，n=10)

4 讨论

4.1 头孢地尼的体外抗菌活性

体外抗菌活性显示头孢地尼在治疗轻、中度细菌感染有较好的疗效，头孢地尼对很多革兰阳性和革兰阴性需氧球菌如肺炎链球菌、化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及卡他莫拉菌等都有良好的抗菌活性。俞桑洁等［8］研究表明，头孢地尼对5 种常见致病菌的体外抗菌活性MIC90值均＜1 mg/L，证实其体外抗菌活性与体内抗菌活性作用基本一致。

4.2 头孢地尼的体内外抗菌活性

本试验结果显示，头孢地尼对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、青霉素敏感肺炎链球菌和苯唑西林敏感金黄色葡萄球菌均有很好的体内抗菌保护作用，ED50值为0．12～2．18 mg/kg。头孢地尼口服给药对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌腹腔感染小鼠具有较好的体内抗菌活性，其中对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌感染小鼠的体内疗效明显优于头孢妥仑酯(P＜0．01)，对大肠埃希菌感染小鼠的体内疗效与头孢妥仑酯相近(P＞0．05)。大肠埃希菌对2 药敏感性相差不多，但头孢地尼的体内保护作用明显优于头孢妥仑匹酯。头孢地尼对大肠埃希菌的MIC 值为3．8 mg/L，ED50值为2．18 mg/kg，低于文献报道的研究结果［9］;头孢地尼对肺炎链球菌的MIC 值为0．68 mg/L，ED50值为0．98 mg/kg，高于文献报道的研究结果［9］;头孢地尼对金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的MIC 值和ED50值与文献报道的研究结果相一致［10］。头孢地尼的体内试验结果表明，其对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和肺炎克雷伯菌引起的感染具有治疗作用，并且优于头孢妥仑酯;对大肠埃希菌有很好的体内抗菌活性，与头孢妥仑酯相似，进一步证明其对革兰球菌的体内抗菌作用较优。

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