2008至2011年上海单中心住院腹泻儿童轮状病毒基因型别流行特征

卢丽娟 钟华清 苏犁云 曹凌峰 徐梦华 徐 锦

·论著·

2008至2011年上海单中心住院腹泻儿童轮状病毒基因型别流行特征

卢丽娟 钟华清 苏犁云 曹凌峰 徐梦华 徐 锦

目的 监测并分析上海单中心住院腹泻儿童A组轮状病毒(RV)基因型别的变化特征，为RV性腹泻的防治提供基础数据和理论依据。方法 收集2008年1月至2011年12月入住复旦大学附属儿科医院<5岁的腹泻患儿粪便标本，RV抗原阳性者345份，采用套式多重RT-PCR法进行RV的基因分型。结果 ①G基因型：2008至2010年以G3型为主，检出率分别为49.2%、44.6%和78.0%；G9型的流行呈上升趋势，成为2011年最主要的流行型别(51.1%)；G1型在4年中均有检出(8%～20%)；G2型少见，G4型未检出。G混合型中，以G3+G9型为主，其次为G3+G1型，还检出4例3种G基因型的混合。②P基因型：2008、2010和2011年均以P[8]型为主，检出率分别为55.6%、60.0%和68.1%，2009年以P混合基因型(43.2%)为主；P[4]型在4年均有流行；P[6]、P[9]型少见，仅在混合感染中检出P[10]型。P混合型中，以P[8]+P[4]型为主，其次为P[8]+P[10]型。③P[8]G3型是2008至2011年最主要的RV流行株(24.3%)，其次为P[8]G9型及PmG3型。2011年P[8]G9型跃升为最主要的流行型别(40.5%)。结论 与2001至2007年相比，2008至2011年上海地区A组RV基因型出现了新的流行特点，G1型及G9型的流行呈上升趋势，G3的流行有所下降，各种混合型别多见。对RV基因型保持系统性的连续监测对RV疫苗在上海的应用是必要的。

婴幼儿； 轮状病毒； 腹泻； 基因型

A组轮状病毒(Rotavirus, RV)是导致婴幼儿严重腹泻的最主要病原体， WHO估计每年约有50万名5岁以下的患儿因RV腹泻死亡，中国每10万名儿童中有10名左右因RV性肠胃炎而死亡[1]。

RV内含11个片段的双链RNA基因组，分别编码病毒的6种结构蛋白(VP1～VP4、VP6和VP7)以及6种非结构蛋白(NSP1～NSP6)。根据外层衣壳蛋白VP6组特异性抗原表位将RV分为A～G 7组，其中A、B和C组可感染人类，感染儿童以A组为主。随着基因序列分析技术的发展，根据VP4和VP7的核苷酸序列同源性可将A组RV分为33种P基因型及25种G基因型。已在人类中检出12种G基因型(G1～G6，G8～G12，G20)及15种P基因型(P[1]～P[11]，P[14]，P[15],P[19]及P[25])，其中5种G型(G1～G4、G9)、3种P型(P[4]、P[6]、P[8])及5种基因型的组合(P[8]G1、P[4]G2、P[8]G3、P[8]G4及G9P[8])最常见。本研究是继2001至2007年上海单中心A组RV监测[2]的后续研究，通过收集2008至2011年来自上海地区<5岁住院腹泻患儿的粪便标本，对A组RV基因型别的流行特征进行研究，为RV疫苗在上海地区的应用、评价、推广、改进及相应公共卫生措施的调整提供不可或缺的数据基础。

1 方法

1.1 标本纳入标准 ①2008至2011年复旦大学附属儿科医院(我院)的<5岁全部的住院腹泻患儿，符合腹泻诊断标准[3]；②腹泻后1～14 d间采集粪便；③由护士统一收集粪便标本后送至我院病毒室，按标本收到时间顺序编号，-20 ℃保存(超过1年的标本转入-70℃长期保存)；④取RV抗原阳性且顺序编号能被6除尽的标本。

1.2 主要材料和试剂 采用胶体金法检测RV抗原。胶体金试剂盒购自北京万泰生物药业有限公司，TRIzol 购自美国Invitrogen公司，Ex-Taq酶购自宝生物工程(大连)有限公司(TaKaRa)，一步法RT-PCR试剂盒购自上海睿安生物技术有限公司。

1.3 RV 抗原的检测 约100 mg粪便放入装有稀释液的滴管中，震荡混匀，垂直缓慢加2～3滴混匀后的样本(约80 μL)至胶体金试剂盒测试卡加样端中心，5～10 min判断结果，出现两条红线者为阳性。

1.4 A组RV G、P基因型的检测 分别选择编码VP7和VP4基因的高保守序列设计引物，先经一步法RT-PCR获得cDNA及第1次PCR扩增的产物，再分别选择基因内不同血清型的特征序列设计一组分型引物，与另一端保守序列引物配对，经2次PCR，根据得到产物片段的大小区分不同标本RV的基因型[3]。详细步骤如下：用0.9%氯化钠溶液制备10%～20% 的粪便悬液, 离心取 200 μL上清液，加1 mL TRIzol抽提RNA，RNA沉淀以焦碳酸二乙酯(DEPC)水20 μL溶解。各取4 μL RNA分别用于VP7和VP4基因长片段的一步法RT-PCR反应，所用引物分别为G分型的9con1和9con2，P分型的con2和con3。反应体系：引物各0.5 μL，DEPC水6.5 μL，RT-PCR一步法反应液12.5 μL，酶混合物1.0 μL，总体积25 μL。反应条件：RNA和引物混合，97 ℃ 5 min，立即置冰上，加入其他反应物，42℃ 1 h，95 ℃ 2 min；94 ℃ 30 s，42 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，30个循环。取G(或P)分型的第1次PCR产物2 μL，9con1(或con3)作为共同引物，其余G(或P)分型的多条引物同时加入一个反应管中，反应体系：引物0.5 μL，三磷酸脱氧核糖核苷(dNTP)4 μL，10×缓冲液5 μL，Taq酶 2.5 U，总体积50 μL。反应条件：94 ℃ 2 min；94 ℃ 30 s，44 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，30个循环；72 ℃ 7 min。根据电泳条带的长度确定 RV的型别。

2 结果

2.1 一般情况 4年间我院共收集住院腹泻儿童粪便标本5 750份，RV抗原阳性标本2 070份，以顺序编号被6个除尽的标本共345份。男213例，女132例；0～1岁251例，～3岁76例，～5岁18例。96%的标本(331份)是在发病后5 d内收集。

2.2 A组RV G基因型的分布 如图1所示，2008至2011年RV G基因型中，以G3、G9及G1型的流行为主，但每年流行特点各有不同。2008年以G3型为主，检出率为49.2%，其次G9型为21.8%、G1型为17.7%；2009年G3型仍为主要流行型别，但其比例下降至44.6%，其次为G9型(20.3%)和G1型(14.9%)，该年度G混合型别有所上升，为16.2%；2010年G3型以78.0%的检出率成为当年的优势流行型别，而G9型(9.0%)和G1型(8.0%)检出率明显下降；2011年G9型上升成为主要的流行型别(51.1%)，G1型检出率也升至19.1%，G3型则下降至12.8%。345份标本中共检出了8例G2型，未检出G4型。

图1 2008至2011年A组RV G基因型的分布[%(n)]

Fig 1 Distribution of rotavirus G genotypes from 2008 to 2011[%(n)]

2.3 A组RV P基因型的分布 如图2所示，2008至2011年RV的 P基因型，以P[8]、P[4]及P混合型的流行为主。2008年P[8]型占55.6%，其次为P混合型(33.9%)和P[4]型 (9.7%)；而2009年P混合型上升为主要的流行型别，检出率为43.2%, P[8]型则下降为次要流行型别(31.1%)，P[4]型出现上升趋势(25.7%)；2010年P[8]型重新上升成为主要流行型别，检出率为60.0%；2011年P[8]型检出率继续上升，达68.1%，而P混合型检出率降为19.1%；另外2008年及2010年分别检出1例P[6]型及1例P[9]型，P[10]型均以与其他P型混合方式存在。

图2 2008至2011年A组RV P基因型的分布[%(n)]

Fig 2 Distribution of rotavirus P genotypes from 2008 to 2011[%(n)]

2.4 A组RV流行株的基因组合 表1显示，2008年基因组合型别以PmG3为主(22.6%)；2009至2010年基因组合型别均以P[8]G3型为主，检出率分别为17.5%及41.0%，其次为PmG3型，检出率分别为16.2%及21.0%, 位于第 3位的流行型别因年份而不同，分别为2008年的P[8]G9型，2009年的PmG9型及2010年的P[4]G3型。2011年PG组合型别出现了较大变化， P[8]G9型为主要的流行型别，检出率为40.5%，其次为P[8]G1型(10.7%)及PmG9型(8.5%)。除以上主要组合型别外，还可见其他组合型别在不同年份的流行，如P[8]G2 型、P[6]G2型及P[9]G3型等。

2.5 A组RV G混合基因型的分布 图3所示，2008至2011年G混合基因型所占比例为17.6%，混合的G基因型种类较多，2008年和2010年的G混合基因型均以G3+G9型为主，检出率分别为81.8%和60.0%；2009年的混合型种类最多，以G3+G2型、G3+G1型为主，均为25.0%；

表1 2008至2011年上海市住院腹泻儿童RV组合型别[n(%)]

Tab 1 Prevalence of combination rotavirus genotypes among children hospitalized for acute gastroenteritis in Shanghai from 2008 to 2011[n(%)]

Ptypes/Gtypes2008(124)2009(74)2010(100)2011(47)Total(345)P[8]G116(12．9)5(6．8)8(8．0)5(10．6)34(9．8)P[8]G201(1．4)01(2．1)2(0．6)P[8]G326(21．0)13(17．6)41(41．0)4(8．5)84(24．3)P[8]G400000P[8]G922(17．7)2(2．7)7(7．0)19(40．4)50(14．5)P[8]Gm5(4．0)2(2．7)4(4．0)3(6．4)14(4．1)P[4]G12(1．6)1(1．4)02(4．2)5(1．4)P[4]G21(0．8)1(1．4)01(2．1)3(0．9)P[4]G37(5．6)8(10．8)15(15．0)1(2．1)31(9．0)P[4]G400000P[4]G92(1．6)3(4．0)01(2．1)6(1．7)P[4]Gm06(8．1)1(1．0)1(2．1)8(2．3)P[6]G100000P[6]G21(0．8)0001(0．3)P[6]G300000P[6]G400000P[6]G900000P[6]Gm00000P[9]G100000P[9]G200000P[9]G3001(1．0)01(0．3)P[9]G400000P[9]G900000P[9]Gm00000P[10]G100000P[10]G200000P[10]G300000P[10]G400000P[10]G900000P[10]Gm00000PmG14(3．2)5(6．8)02(4．2)11(3．2)PmG21(0．8)1(1．4)002(0．6)PmG328(22．6)12(16．2)21(21．0)1(2．1)62(18．0)PmG400000PmG93(2．4)10(13．5)2(2．0)4(8．5)19(5．5)Pm/Gm6(4．8)4(5．4)02(4．2)12(3．5)

2011年以G1+G9型为主(83.3%)。同时还检出了少量3种不同型别的组合，如G3+G2+G1型、G3+G9+G2型等。

2.6 A组RV P混合基因型的分布 图4所示，相比RV的G混合基因型，P混合基因型较为单一。2008至2010年均以P[8]+P[4]型的混合为主，分别占至100%，96.9%及91.3%；2011年检出的9例P基因混合型均为P[8]与P[10]的混合。

图3 2008至2011年A组RV G混合型分布

Fig 3 Distribution of rotavirus mixed-G types from 2008 to 2011

图4 2008至2011年A组RV P混合型分布

Fig 4 Distribution of rotavirus mixed-P types from 2008 to 2011

3 讨论

本课题组自2001年起对我院<5岁腹泻患儿A组RV的流行规律及特点进行了持续的监测研究，入住我院的腹泻患儿主要来自上海地区，这对于充分认识该地区RV流行株的动态变化、评估疫苗的应用效果和新疫苗的发展是极其必要的。

中国1982年以来流行的RV G基因型主要以G1、G3型为主，1999年之前主要流行型别是G1型，之后则出现了以G3型为主的转变，中国CDC 2003至2007年全国性RV流行病学的监测报道，11个地区的哨点医院均以G3型为主，其次为G1型，仅检出3例G9型的流行[4,5]。但国内尚缺乏2007年至今中国地区RV流行情况的总体分析资料。就上海地区而言，2001至2007年的G基因型仍以G3型为优势流行型别，G1型的流行基本呈下降趋势[3,6]。但2008至2011年G基因型的流行出现了新的变化，整体表现为G3型呈波动性下降趋势，而G9和G1型呈波动性上升趋势，尤其以G9型的变化最为明显。

G9型首次在1983至1984年美国费城的腹泻患儿中检出，该地区1995至1996年G9型检出率近50%[7,8]。此后，G9型开始成为许多国家和地区重要的流行型别之一。在中国1994年首次检出G9型的流行，其后几年只存在散在的流行，2003至2007年中国CDC报道有G9型存在，但比例较低(0.24%)[4,5]。上海地区2001至2005年G9型少见，仅在2001年检出了1例，而自2006年起G9型开始出现了流行，并持续至2011年[3,6]。本研究显示，2008至2011年G9型呈波动性升高趋势，尤其在2011年G9型的总检出率高达51.1%，跃升为该年度的绝对优势流行型别。2000至2002年G9型也以超过30%的比例成为中国台湾地区的主要流行型别之一，2005至2007年其检出率下降为18.0%[9,10]。中国香港地区2001至2002年G9型检出率为5.1%，2007年检出率为10.1%[11]。国内其他地区G9型的流行也各有不同。如广西地区2010年及西北地区2005年均出现了G9型较高水平的流行[12]；而兰州地区某些年份[13]、西北地区1994至2004年[14]、天津地区2007至2009年[15]及南京地区2009至2010年[16]仅存在G9型的少量流行。土耳其报道2008至2009年G9型为该地区的主要流行型别[17]；古巴2006至2008年[18]和意大利2007至2009年[19]G9型的流行也均呈上升趋势。

上海地区2001至2004年G1型的流行逐年减少，2005年始出现波动性回升，2011年其检出率上升至19.1%，仅次于当年G9型的流行。2001至2007年上海地区以G3型的流行为主，2005年流行达高峰，2006年始出现波动性的下降，到2011年该型别降到11年间的最低(12.8%)[3,6]。这提示上海地区可能开始重新进入G1型的流行期，G3型则减少为非主要的流行型别。与上海地区相似，天津地区2007至2009年虽以G3型的流行为主，但G1型的流行呈现上升趋势[15]。中国西北地区1996至2004年以G1、G3型的共同流行为主[13]；四川地区2006至2010年则以G1型为主[20]。尽管G3型在包括上海在内的多个地区占据重要位置，但印度地区G3型的流行一直处于弱势，该地区2005至2007年以G2、G1型的流行为主，仅检出少量的G3型[21]。提示基因型在不同地区的流行可能与地域、环境、气候差异等多种因素有关。

与G基因型的流行不同，全球范围内RV P基因型的流行型比较固定，基本以P[8]、P[4]和P[6]型为主。而在中国以P[8]型和P[4]型的流行为主，P[6]型较少流行。本研究的监测结果显示，P[8]型仍是近年上海地区的优势P基因型，但与2001至2005年(74.9%)相比，2008至2011年P[8]型的比例(53.4%)明显下降。2001至2007年上海地区出现了P[4]型的波动性流行，其中2003至2006年均未检出P[4]型的流行，而P[4]型(36.7%)成为2007年的主要流行型别[3,6]，此后P[4]型呈现下降趋势。11年间还检出了11例P[9]型及6例P[6]型，因为P[6]型和P[9]型主要感染猪和猫，提示RV可在不同的种属间进行传播。

上海地区P[10]型的流行与国内外的流行情况基本一致。2001至2005年未检出P[10]型，2006至2007年检出了10例P[10]型的单独感染及20例P[10]与其他P基因型的混合感染[3,6]，而2008至2011年P[10]型仅以与其他P基因型混合的形式存在，且主要以P[10]+P[8]型为主。中国CDC 2003至2007年全国性的RV流行病学监测中仅检出5例P[10](0.5%)[5]；兰州[14]、四川[21]、广州[22]、南京[16]及广西[12]等地均未报道有P[10]型的流行。土耳其2006至2008年检出7例P[10]单独感染以及4例与其他P基因型的混合感染[17]。到目前为止，还未有地区报道该型别的高流行，这提示P[10]型并不能在人类中广泛传播造成大范围的致病。

本研究中检出较高比例的多种G混合型，为G1、G2、G3及G9型的任意混合，但以G3+G9混合为主，也检出了少量3种不同G型别的混合。与上海地区2001至2007年相比[3,6]，2008至2011年G混合的型别更为多样。 国内其他地区报道的G混合型相比上海地区较为单一。例如，四川地区在2006至2010年检出少量G1+G3混合型的流行，南京地区2009至2010年仅检出2例G2+G3混合型的存在[17,21]。而与国外一些地区相比，上海地区的G混合型别较为固定。例如意大利2008年曾检出11.5%的G混合型感染，为G1、G2、G9与G10型的任意混合[23]；印度2007至2009年与土耳其2008至2009年间分别检出7.3%及13.0%的G混合型，均为G1、G2、G3、G4及G9型的2或3种型别的混合[17,21]。

同时，本研究也检出了较高比例的P混合基因型，为P[4]、P[6]、P[8]及P[10]型的混合，但均为两两混合，以P[8]+P[4]型为主(27.2%)，相比上海地区2001至2005年的P混合型也更为丰富。上海地区P混合型的检出特点与国内其他地区相似，如广州地区2009年检出了24.2%的P混合型，为P[4]、P[8]及P[6]型的混合，且以P[8]、P[4]的混合为主；天津地区2007至2009年P混合型的检出率虽较低，但其混合型别也与上海地区相似[15,22]。国外不同地区P混合型的流行差异较大，如土耳其2008至2009年P混合型的感染检出了17.0%，为P[2]、P[3]、P[4]、P[5]、P[6]、P[8]及P[10]型的任意混合，其中以P[6]+P[8]型为主，还检出了1例P[4]+P[6]+P[8]型[17]；意大利2008年及突尼斯2007至2008年均未检出P混合型的感染[23,24]。本研究中高比例RV G和P混合型的检出显示出RV遗传上的多样易变和由此引起的复杂分子流行病学特点。由于RV为内含11个片段的RNA病毒，不同型之间因基因重配或基因重组极易产生混合型的基因型, 同时存在人畜间相互传播的可能。

世界范围内RV的主要基因组合包括P[8]G1、P[8]G3、P[8]G4、P[4]G2及P[8]G9。中国2003至2007年以P[8]G3型的流行为主，其次为P[8]G1型、P[4]G3型。上海地区2001至2006年以P[8]G3为主，但在2007年以P[4]G3型为主，与呼和浩特地区2008至2010年主要流行型别一致[3,6,25]。虽上海地区2008年后又以P[8]G3型的流行为主，但P[8]G3型的比例整体呈下降趋势，而P[8]G9型明显上升的流行趋势较为明显，尤其在2011年P[8]G9型的检出率高达40.5%，为当年的最主要流行株。与上海地区2011年相似，广西地区2010年以P[8]G9型为主[12]；而我国西北地区1996至2005年[13]及广州地区2009年[22]的RV流行株均以P[8]G1型为主； 兰州地区2009年[26]及南京地区2009至2010年[16]以P[8]G3型为主。阿根廷2004至2007年以P[8]G9型及P[4]G2型为主[27]；韩国的主要流行型与全球范围内的流行型几乎相一致[28]；而土耳其2005至2007年的主要流行株是P[8]G1型和P[4]G2型[29]；同属亚洲地区的日本，2007至2009年则以P[8]G1型为主[30]。

至今，已有3种RV疫苗在全球多个国家和地区进行了应用，包括葛兰素史克公司生产的 Rotarix、默克公司生产的 RotaTeq以及中国兰州生物制品研究所生产的罗特威。Rotarix疫苗是单价口服减毒活疫苗，由人RV P[8]G1株在Vero细胞中经数代培养减毒而获得，分别在婴儿2和4月龄时给予口服。虽是单价疫苗，但对大多数其他血清型RV可产生交叉保护作用。Rotarix疫苗株对全部 RV的G亚型，包括在亚洲、欧洲及拉丁美洲各国流行的非G1、非P[8]和G2P[4]株引起的病毒性腹泻均可提供较好的保护效果，而且该疫苗对发达国家儿童的保护率要高于发展中国家。RotaTeq疫苗为5价人-牛(WC3株)重配株口服减毒活疫苗，5个重配株中包括4个表达人RV -VP7(G1～G4型)的重配株和1个表达人RV-VP4 P[8]型的重配株。分别在婴儿2、4和6月龄时给予3剂口服。RotaTeq疫苗对所有RV引起的腹泻均具有较好的保护效果，尤其对重症腹泻有较高的保护率[31～37]。但最近澳大利亚、墨西哥和巴西的后续临床观察报道，虽然腹泻发生率降低了，但这两种疫苗的接种仍与肠套叠的发生相关[38,39]。 由中国兰州生物制品研究所研制的单价羊RV口服活疫苗(LLR 株)为P[12]G10型，具有良好的免疫原性，对G1～G4型及G10型引起的腹泻均可产生保护作用，这可能与LLR株G10型和G1～G4型 VP7 蛋白具有部分的同源性有关[40]。在婴幼儿2月龄至3岁给予一剂该疫苗。该疫苗于2001年开始在中国地区上市使用，由于未列入计划免疫，其使用范围还相当有限。个别后续的临床观察资料显示，该疫苗对人RV感染具有一定的保护作用。

虽然上海地区RV基因型在近年间处于不断变化中，但G基因型仍以G1、G3及G9型的流行为主，P基因型以P[8]和P[4]型的流行为主。因此，理论上现在上市的几种商品化疫苗均可用于预防上海地区儿童RV性腹泻的发生。由于Rotarix及RotaTeq在中国尚未批准使用，且这两种疫苗的全程免疫费用较高，其应用远景尚不明朗[41]。而LLR疫苗已在中国累计使用了2 600～2 700万剂(人)次，后续临床观察资料也显示了该疫苗的保护作用，且中国自2005年 6月开始建立和实施的疫苗接种异常反应报告体系所获得的资料表明，截至2011年12月，尚未发现与RV疫苗接种相关的肠套叠病例，表明其安全性[42]。

总之，继2001至2007年后，2008至2011年上海地区引起儿童腹泻的RV基因型的流行又出现了新的变化，提示对该地区RV分子流行病学特征进行长期、持续监测的重要性。

[1]Kawai K, O′Brien MA, Goveia MG, et al. Burden of rotavirus gastroenteritis and distribution of rotavirus strains in Asia: a systematic review. Vaccine, 2012 , 30(7):1244-1254

[2]Xu J, Yang Y, Sun JE, et al. Molecular epidemiology of rotavirus infections among children hospitalized for acute gastroenteritis in Shanghai, China, 2001 through 2005. J Clin Virol, 2009, 44(1):58-61

[3] Chen CH(陈昌辉)，Li MJ，Wu Q, et al. Diagnosis and treatment of diarrhea in infants. Journal of modern clinical medicine(现代临床医学), 2011, 37(5):389-397

[4]Orenstein EW, Fang ZY, Xu J, et al. The epidemiology and burden of rotavirus in China: A review of the literature from 1983 to 2005. Vaccine, 2007, 25(3):406-413

[5]Duan ZJ, Liu N, Yang SH, et al. Hospital-Based surveillance of rotavirus diarrhea in the People′s Republic of China, August 2003-July 2007. J Infect Dis, 2009, 200(S1): 167-173

[6]Lu LJ(卢丽娟), Xu J, Zhong HQ, et al. Molecular epidemiology of group A Rotavirus in hospitalized children with diarrhea in Shanghai, during 2006-2008. Chinese Journal of Infectious Diseases (中华传染病杂志), 2011, 30(2):90-94

[7]Clark HF, Hoshino Y, Bell LM, et al. Identification of group A rotavirus gene 4 types by polymerase chain reaction. J Clin Microbiol,1987, 30(6):1757-1762

[8]Clark HF, Lawley DA, Schaffer A, et al. Assessment of the epidemic potential of a new strain of rotavirus associated with the novel G9 serotype which caused an outbreak in the United States for the first time in the 1995-1996 season. J Clin Microbiol, 2004, 42(4):1434-1438

[9]Lin YP, Chang SY, Kao CL, et al. Molecular Epidemiology of G9 Rotaviruses in Taiwan between 2000 and 2002. J Clin Microbiol , 2006, 44(10):3686-3694

[10]Wu FT, Liang SY, Tsao KC, et al.Hospital-based surveillance and molecular epidemiology of rotavirus infection in Taiwan, 2005-2007. Vaccine, 2009 , 27( S5):50-54

[11]Lo JY, Szeto KC, Tsang DN,et al. Changing Epidemiology of Rotavirus G-Type Circulating in Hong Kong, China. J Med Virol, 2005, 75(1):170-173

[12]Dong HJ(董慧瑾), Qian Y, Zhang Y, et al. Prevalence of genotype G9P[8]rotavirus and acute diarrhea in children, Guangxi, China in 2010. China J Viral Dis(中国病毒病杂志), 2012, 3(2):202-206

[13]Yang XL, Matthijnssens J, Sun H, et al. Temporal changes of rotavirus strain distribution in a city in the northwest of China, 1996-2005. Int J Infect Dis, 2008 ,12(6):11-17

[14]Jin Y, Ye XH, Fang ZY, et al. Molecular epidemic features and variation of rotavirus among children with diarrhea in Lanzhou, China, 2001-2006. World J Pediatr, 2008, 4(3):197-201

[15]Zhang ZL(张之伦)，Zhang Y，Li JM，et al.The study on rotavirus infection status among patients with diarrhea in Tianjin from 2007 to 2009. China Tropical Medicine(中国热带医学), 2011, 11(8) : 930-932

[16]Lin Q(林谦), Jin Y, Zhou JS, et al. Molecular epidemiological study on viral diarrhea among pediatric patients under five years old in Nanjing，2009-2010. Chin J Evid Based Pediatr(中国循证儿科杂志), 2011, 7(1):31-36

[17]Tapisiz A, Karahan ZC, Ciftci E, et al. Changing patterns of rotavirus genotypes in Turkey. Curr Microbiol, 2011, 63(6):517-522

[18]Ribas Mde L, Nagashima S, Calzado A, et al. Emergence of G9 as a predominant genotype of human rotaviruses in Cuba. J Med Virol, 2011, 83(4):738-744

[19]Ruggeri FM, Delogu R, Petouchoff T, et al. Molecular characterization of rotavirus strains from children with diarrhea in Italy, 2007-2009. J Med Virol, 2011, 83(9):1657-1668

[20]Liao XC(廖雪春), Xie XL, Ren M, et al.Rotavirus diarrhea in infants and children in Sichuan，2006-2010. J Prev Med Inf(预防医学情报杂志),2012, 28(5):361-363

[21]Kang G, Arora R, Chitambar SD, et al. Multicenter, hospital-based surveillance of rotavirus disease and strains among indian children aged <5 years. J Infect Dis, 2009, 200 (S1):147-153

[22]Xie HP(谢华萍), Geng JM, Wu YJ, et al. Molecular epidemiological characteristics of rotaviruses in Guangzhou,2009. J Prev Med Inf(预防医学情报杂志), 2011, 27(10):773-776

[23]Zuccotti G, Meneghin F, Dilillo D,et al. Epidemiological and clinical features of rotavirus among children younger than 5 years of age hospitalized with acute gastroenteritis in Northern Italy. BMC Infect Dis, 2010, 10 :218

[24]Hassine-Zaafrane M, Sdiri-Loulizi K,Ben Salem I,et al. The molecular epidemiology of circulating rotaviruses: three-year surveillance in the region of Monastir, Tunisia. BMC Infect Dis, 2011, 11:266

[25]Bi XD(毕小朵),Mei H. Molecular epidemiology of group A Rotavirus in hospitalized children with diarrhea in Hohhot, during 2008-2010 . Acta Acad Med Nei Mongol Aug(内蒙古医学院学报), 2010, 32(3),110-112

[26]Luo X(罗璇), Jin Y, Li YN, et al. Molecular and epidemiological study on viral diarrhea among infants in Lanzhou.Chinese J Exp Clin Virol(中华实验和临床病毒学杂志), 2011,25(1):36-38

[27]Esteban LE, Rota RP, Gentsch JR, et al. Molecular epidemiology of group A rotavirus in Buenos Aires, Argentina 2004-2007: reemergence of G2P[4] and emergence of G9P[8] strains. J Med Virol, 2010, 82(6):1083-1093

[28]Han TH, Kim CH, Chung JY, et al.Genetic characterization of rotavirus in children in South Korea from 2007 to 2009. Arch Virol, 2010, 155(10):1663-1673

[29]Ceyhan M, Alhan E, Salman N, et al.Multicenter prospective study on the burden of rotavirus gastroenteritis in Turkey,2005-2006: a hospital-based study. J Infect Dis, 2009, 200(S1) :234-238

[30]Chan-it W, Thongprachum A, Dey SK, et al. Detection and genetic characterization of rotavirus infections in non-hospitalized children with acute gastroenteritis in Japan, 2007-2009.Infect Genet Evol, 2011, 11(2):415-422

[31]Vesikari T, Matson DO, Dennehy P, et al. Safety and efficacy of a pentavalent human-bovine (WC3) reassortant rotavirus vaccine. N Engl J Med, 2006, 354(1): 23-33

[32]Ruiz-Palacios GM, Perez-Schael I, Velazquez FR, et al. Safety and efficacy of an attenuated vaccine against severe rotavirus gastroenteritis. N Engl J Med, 2006, 354(1): 11-22

[33]Buttery JP, Lambert SB, Grimwood K, et al. Reduction in rotavirus-associated acute gastroenteritis following introduction of rotavirus vaccine into Australia＇s National Childhood vaccine schedule. Pediat Infect Dis J, 2011, 30(S1): 25-29

[34]Tate JE, Mutuc JD, Panozzo CA, et al. Sustained decline in rotavirus detections in the United States following the introduction of rotavirus vaccine in 2006．Pediatr Infect Dis J, 2011, 30(S1):30-34

[35]Sáfadi MA, Berezin EN, Munford V, et al．Hospital-based surveillance toevaluate the impact of rotavirus vaccination in Säo Paulo, Brazil. Pediatr Infect Dis J, 2010, 29(11): 1019-1022

[36]Vesikari T, Karvonen A, Prymula R, et al. Efficacy of human rotavirus vaccine against rotavirus gastroenteritis during the first 2 years of life in European infants: randomised, double-blind controlled study. Lancet, 2007, 370(9601): 1757-1763 [37]Patel M, Pedreira C, De Oliveira LH, et al. Association between pentavalent rotavirus vaccine and severe rotavirus diarrhea among children in Nicaragua. JAMA , 2009, 301(21):2243-2251

[38]Patel MM, López-Collada VR, Bulhoes MM, et al. Intussusception risk and health benefits of rotavirus vaccination in Mexico and Brazil. N Engl J Med, 2011, 364( 24) : 2283 -2292

[39]Buttery JP, Danchin MH, Lee KJ, et al. Intussusception following rotavirus vaccine administration: post-marketing surveillance in the national immunization program in Australia. Vaccine, 2011, 29( 16) : 3061-3066

[40]Zhao YJ(赵雅静)，Gao XJ，Liu CM，et al. Heredity and variation of VP7 gene of rotavirus vaccine strain LLR. Chin J Biologicals(中国生物制品杂志), 2008, 21(12) : 1074-1082

[41]Weycker D, Sofrygin O, Kemner JE, et al. Cost of routine immunization of young children against rotavirus infection with Rotarix versus RotaTeq. Vaccine, 2009, 27(36): 4930-4937

[42]Fu C, Tate JE, Jiang B. Effectiveness of Lanzhou lamb rotavirus vaccine against hospitalized gastroenteritis: further analysis and update．Hum Vaccine, 2010, 6( 11) : 953

Epidemical characteries of group A Rotavirus genotypes in children hospitalized with diarrhea in Shanghai, during 2008-2011

LULi-juan,ZHONGHua-qing,SULi-yun,CAOLing-feng,XUMeng-hua,XUJin

(PediatricInstitute,Children′sHospitalofFudanUniversity,Shanghai201102,China)

XU Jin, E-mail:jin030101@yahoo.com.cn

ObjectiveThis study aimed to analyze the dynamic characteristics of group A rotavirus genotypes. MethodsA total of 345 rotavirus-positive stool specimens were collected from inpatients under 5 years old hospitalized with acute gastroenteritis in Children′s Hospital of Fudan University from January 2008 to December 2011. Each fecal specimen was tested for rotavirus with a commercial enzyme immunoassay, and genotypes were characterized using multiplex nested reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR).ResultsG genotypes: The predominant G genotype was G3 which accounted for 49.2%, 44.6% and 78.0% respectively in the year of 2008, 2009 and 2010. The prevalence of G9 was on an upward trend from 2008 to 2011, and dominated as the most common type in 2011(51.1%). G1 was detected each year with a varying prevalence of 8%-20%. G2 was rarely seen and G4 was not detected during the four years. Mixed G infections with G3+G9 were the most prevailing G-mixed types, followed by G3+G1. Otherwise, mixed-G infections with three different G genotypes were detected in 4 cases. P genotypes: P[8] genotype was the dominant strain with prevalence of 55.6%, 60.0% and 68.1% respectively in the year of 2008, 2010 and 2011, whereas mixed P genotype was dominant in 2009(43.2%). P[4] strains were prevalent in four years in a volatility way. P[6] and P[9] could also be found as minor types. Interestingly, P[10] genotype was seen only in combination with P[8]. The major mixed P infection was genotype of P[4]+P[8], and P[8]+P[10] was assigned as follows. A high prevalence of P[8]G3 genotype was determined to be the major rotavirus genotype combination (24.3%) in Shanghai from 2008 to 2011 and the other prevalent genotypes included P[8]G9 and P[m]G3. P[8]G9 strains jumped as the most predominant type in 2011( 40.5%).ConclusionsCompared with the data from the year of 2001-2007, this study shows new epidemiological characteristics of group A rotavirus genotypes during 2008-2011 in Shanghai, including ascending of G1 and G9 proportions, reduction of G3 and diversification of mixed infections. Therefore, it is highly essential to conduct continuous and systematic monitoring for rotavirus strains in anticipation of rotavirus vaccine introduction in Shanghai.

Children; Rotavirus； Diarrhea; Genotype

新世纪优秀人才计划:NECT-09-0320;上海市公共卫生优秀学科带头人计划:GWDTR201221

复旦大学附属儿科医院儿科研究所 上海，201102

徐锦，E-mail:jin030101@yahoo.com.cn

10.3969/j.issn.1673-5501.2013.02.004

2013-01-17

2013-03-21)

张崇凡)