人乳腺癌组织中GATA3 的表达及其临床意义*

黄 信， 蒋光愉， 李 虹， 庞 钊， 吕荣钊， 张 清， 何伟丽， 王宁霞△

(暨南大学附属第一医院1乳腺外科，2病理科，广东 广州510632)

GATA3 作为转录因子调节多种细胞的遗传分化方向。研究表明GATA3 与乳腺癌的发生发展密切相关，并在不同乳腺癌亚型中所起的作用也有所不同［1］，目前在国外已将其作为分析乳腺癌分子生物学特点及判定预后意义的研究热点，但相关研究结果尚存在争议，国内相关研究甚少。本研究采用免疫组化方法，检测乳腺癌组织中GATA3 的表达，分析其与其它临床病理指标及其预后的关系。

材 料 和 方 法

1 材料

收集暨南大学附属第一医院乳腺外科自2008年2 月至2012 年2 月经手术切除的乳腺癌石蜡组织标本124 例，所有标本均经病理HE 染色及常规相关免疫组化染色，由本院2 位以上高年资病理医师确诊，均具有完整的术后病理资料。其中乳腺浸润性导管癌82 例，浸润性小叶癌26 例，混合癌10 例，髓样癌6 例。患者均为女性，年龄15 ～82 岁(平均年龄54 岁)。

2 主要仪器及试剂

GATA3 兔抗人多克隆抗体购自CST，检测浓度为1∶250;即用型GTVisionTM免疫组化检测试剂盒(鼠兔通用)购自广州达科生物技术开发有限公司，二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)购自福州迈新生物技术有限公司;切片机为Thermo HM325 旋转式显微镜用薄片切片机。

3 免疫组织化学染色

所有乳腺癌组织石蜡标本经切片机连续行4 μm 厚切片，免疫组化染色采用EnVision 两步法。石蜡切片常规经脱蜡后，将石蜡切片完全浸没于0.01 mol/L pH 6.0 的枸橼酸盐缓冲液中，将其密闭放于微波炉中高温加热至沸腾后转为低温中持续加热10 min，自然冷却至室温进行热诱导抗原修复。切片经PBS 洗涤后滴加I 抗兔抗GATA3 多克隆抗体(1∶250)，4 ℃温育过夜。滴加即用型酶标记的II 抗GTVisionTM，室温湿盒中温育30 min。DAB 显色3 min，显微镜下观察切面显色情况以便及时阻断，苏木素衬染，常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明后封片，光学显微镜下观察实验结果。阳性对照片为已知的阳性表达片，阴性对照片为PBS 液代替I 抗进行，每组每次实验均设阴性对照片。

4 结果的判定

4.1 GATA3 染色阳性结果的判定标准 当乳腺癌细胞胞核中出现深棕色及棕黄色染色则为GATA3阳性表达细胞。每张切片随机选择5 个高倍(×100)视野，按阳性细胞数占同类细胞的百分比分类，阳性细胞数≥20%为GATA3 表达阳性切片，见图1［2］。

Figure 1. GATA3 expression in breast cancer tissues detected by immunohistochemical staining.A:GATA3 negative expression (× 400);B:GATA3 positive expression(×100);C:GATA3 positive expression (×400).图1 GATA3 在乳腺癌组织中表达的免疫组化染色

4.2 雌激素受体( estrogen receptor，ER) 、孕激素受体( progesterone receptor，PR) 和人表皮生长因子受体2( human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)染色结果判定标准 ER 阳性表达表现为细胞质中出现棕黄色染色，≥10%即为ER 表达阳性。PR 阳性表达表现为细胞质中出现棕黄色染色，≥10%即为PR 表达阳性。HER-2 阳性判定:2007 年，美国临床病理学协会和临床肿瘤学会推荐HER-2 阳性的定义标准是HER-2 免疫组化检测+ + +(30%肿瘤细胞膜完全染色)或原位荧光免疫杂交检测阳性(HER-2 基因拷贝数 ＞6 或HER-2/CEP17 ＞2.2)。交界性或不确定的HER-2 结果，Fish 评分为1.8 ～2.2 个基因/17 号染色体/细胞［3］。

4.3 乳腺癌术后复发风险评估标准［4-5］根据2009年St.Gallen 专家共识对乳腺癌术后复发风险分组。低危:淋巴结无转移，且同时满足以下6 个条件:标本病灶大小≤2 cm，分级为1 级，脉管无癌栓，ER 和(或)PR 阳性，HER-2 基因无过度表达或扩增，年龄≥35 岁。中危:(1)淋巴结阴性，同时以下6 个条件至少具备1 个:标本病灶大小＞2 cm，分级为2 ～3级，有脉管癌栓，ER 和(或)PR 阴性，HER-2 基因过度表达或扩增，年龄＜35 岁;(2)淋巴结1 ～3 个阳性，ER 和(或)PR 阳性且未见HER-2 基因过度表达。高危:(1)淋巴结1 ～3 个阳性，ER 和PR 阴性或HER-2 基因过度表达;(2)淋巴结≥4 个阳性。

5 统计学处理

采用SPSS 13.0 统计软件阳性率的比较，采用χ2检验进行分析，相关性分析采用Spearman 等级相关。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

结 果

1 乳腺癌组织中GATA3 的表达与ER/PR 及其它相关临床病理指标间的关系

乳腺癌组织中ER 阳性组GATA3 的表达率为70.6%，而ER 阴性组GATA3 的表达率为25.6%，差异有统计学意义(P ＜0.01);在PR 阳性组中GATA3的表达率为69.7%，而PR 阴性组GATA3 的表达率为35.4%，差异有统计学意义(P ＜0.01);相关分析显示GATA3 与ER/PR 呈显著正相关。另外，GATA3 低表达者与高组织学分级、脉管癌栓、p53 突变等表示预后较差的指标相关(P ＜0.05)，但与HER-2表达、肿瘤大小、淋巴结转移、年龄等因素无关(P ＞0.05)，见表1。

表1 乳腺癌组织中GATA3 表达与其它临床病理指标的关系Table 1. The relationship between GATA3 expression in breast cancer tissues and other clinicopathological factors

2 乳腺癌组织中GATA3 表达与乳腺癌分子分型的关系

目前乳腺癌的分子分型是对乳腺癌患者进行个体化治疗的基础，在本实验中将所有乳腺癌分成Luminal 型乳腺癌(luminal A 型和luminal B 型)和非luminal 型乳腺癌(三阴型和HER-2 过表达型)，其中luminal 型乳腺癌86 例(69.4%)，非luminal 型乳腺癌38 例(30.6%)，其中在luminal 型乳腺癌中GATA3 阳性表达58 例，表达率高达68.4%，而在非Luminal 型乳腺癌中的阳性表达12 例，表达率仅为32.6%，luminal 型乳腺癌与非luminal 型乳腺癌之间GATA 的表达有显著差异(P ＜0.05)，见表2。这提示GATA3 高表达的乳腺癌对内分泌治疗敏感，恶性程度低，有较好的预后。

表2 GATA3 表达与乳腺癌分子分型的关系Table 2. The relationship between GATA3 expression and molecular subtypes of breast cancer

3 乳腺癌组织中GATA3 表达与乳腺癌术后复发风险的关系

本实验根据St.Gallen 共识将124 例乳腺癌进行术后复发风险评估，其中中危组77 例(62.1%)，高危组40 例(32.2%)，在中危组中GATA3 表达率为63.6%，而在高危组中GATA3 的表达率为42.5%，中危组与高危组患者GATA3 的表达有显著差异(P ＜0.05)，见表3。这提示GATA3 高表达者术后具有较高的无病生存率(disease-free survival，DFS)及总生存率(overall survival，OS)。

表3 GATA3 表达与术后复发风险的关系Table 3. The relationship between GATA3 expression and recurrence risk after surgery

讨 论

GATA3 是GATA 转录因子家族(GATA1 ～6)中的一员，它们以高亲和力与(A/T)GATA(A/G)共同序列结合，共有一个类固醇激素受体超家族C4 锌指结构的DNA 结合基序，定位于染色体10p 15上［6］。GATA3 作为转录因子在正常乳腺组织中具有调节生长和促进分化的作用。Asselin-Labat 等［7］发现将GATA3 导入多能祖细胞(干细胞)中会引导其向导管上皮细胞分化成熟，证实GATA3 是导管上皮细胞分化的关键调节因子。Kouros-Mehr 等［8］发现敲除GATA3 的小鼠青春期开始后因乳腺组织不能形成末端乳牙，导管上皮组织无法侵入基质而出现严重的乳腺发育缺陷。

Abba 等［9］证实，GATA3 表达与ER/PR 状态密切相关，并与乳腺癌的组织学分级相关。本研究中GATA3 在ER/PR 阳性组及低组织学分级中均呈高表达，且较ER/PR 阴性及高组织学分级差异有统计学意义，与Abba 等的研究结果一致。目前临床上应用常规病理免疫组化指标将乳腺癌大致分为luminal A 型和luminal B 型、HER-2 过表达型和三阴型乳腺癌。大量的临床研究数据已证实在乳腺癌的分子分型中，luminal A 型和luminal B 型乳腺癌预后较好，而三阴型和HER-2 过表达型乳腺癌预后较差。本研究根据ER、PR 和HER-2 表达情况，将乳腺癌分为luminal 型乳腺癌(luminal A 型和luminal B 型)和非luminal 型乳腺癌(三阴型和HER-2 过表达型)，通过比较两组间GATA3 的表达情况知，GATA3 在luminal 型乳腺癌中高表达，且差异有统计学意义。GATA3 与ER/PR 间的关系仍在探讨中，Wilson 等［10］发现GATA3 是构成ER 信号通路所必需的，而luminal型乳腺癌高表达ER，说明GATA3 的表达可能与luminal 型乳腺癌发生有关。Pei 等［11］发现细胞周期素依赖性激酶抑制因子p18INK4c可以抑制通过抑制luminal 祖细胞增殖而抑制luminal 型乳腺癌的发生，而GATA3 能抑制p18INK4c的转录，减少INK4c 的产生，INK4c 低表达与GATA3 高表达往往同时存在于luminal 型乳腺癌中，但GATA3 的表达或过表达能否直接诱发luminal 型乳腺癌尚不明确［12］。

GATA3 在乳腺癌预后分析中的作用是当前研究的热点之一，国外相关研究结果具有一些分歧。Jacquemier 等［13］发现，在240 例接受激素治疗的ER 阳性乳腺癌患者中，多因素分析显示GATA3、血管癌旁浸润、Ki67、P53 的预后价值有统计学意义。Mehra等［14］发现，在预后很差的浸润性癌中GATA3 为主要的低表达蛋白之一，GATA3 低表达的肿瘤较高表达的肿瘤生存期明显缩短。但Ciocca 等［15］在一项为期10 年的随访研究中发现，GATA3 阳性和阴性的肿瘤之间复发率和生存率无显著差异。而在ER 阳性并接受内分泌治疗的患者中，GATA3 的表达具有中等强度的预后价值。在本研究中根据St.Gallen 共识将124 例乳腺癌分为低、中、高危组，中、高危组中GATA3 的表达差异具有统计学意义。

综上所述，由于GATA3 与一些预后较好的指标相关，在luminal 型乳腺癌中高表达，且与ER/PR 阳性表达高度相关，对临床内分泌治疗具有指导价值，可以在一定程度上判定GATA3 阳性患者预后好于GATA3 阴性。但其是否可以作为独立的乳腺癌术后预测因子，仍需要更多的临床试验数据来证实。

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