苏木乙酸乙酯提取物对大鼠外周血细胞因子的影响

汪洋，周亚滨

(黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040)

苏木(Lignum Sappan)又名苏方、苏方木、红柴、赤木、棕木，为豆科云实属植物苏木(Caesalpinia sappan L．)的干燥心材。主要产于缅甸、印度、马来半岛、越南及斯里兰卡，我国主要分布于贵州、云南、四川、福建、两广及台湾等地［1］。

大量研究已经证实，苏木具有免疫抑制、抗氧化、抗炎及抗肿瘤作用。苏木乙酸乙酯提取物可以抑制大鼠移植心脏心肌组织中穿孔素(PFP)、颗粒酶 B(GrB)、FasL的表达，调节CD4+/CD8+值，抑制心肌细胞的过度凋亡［2－5］。本实验采用不同浓度苏木乙酸乙酯提取物作用于健康Wistar大鼠，观察其对健康大鼠外周血细胞因子的影响。

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．1．1 实验动物

健康雄性Wistar大鼠，体质量150～200g，由黑龙江中医药大学动物实验中心提供。

1．1．2 实验药品及试剂

苏木购自黑龙江省药材公司。将苏木粗粉(40目)用75%乙醇浸泡，加热至85℃，连续回流提取2h，过滤，反复2次，将滤液混合，经旋转蒸发仪回收后，于真空干燥箱中烘干，制成乙醇提取干粉。将乙醇提取物加入双蒸水混悬，再用乙酸乙酯萃取，回收得到乙酸乙酯提取物。大鼠 IL－1、IL－2、IL－12 及 IFN－γ ELISA检测试剂盒购自晶美生物。

1．1．3 实验仪器

TCS－500型电子秤(武汉电子称重仪器公司);CR21型低温高速离心机(日本日立公司);电热恒温水浴箱(上海医疗仪器厂);低温冰箱MDF－U50V(日本三洋公司产品);电子分析天平［梅特勒－托利多仪器(上海)有限公司］。

1．2 实验方法

1．2．1 动物分组

健康Wistar大鼠32只，随机分为空白组、高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组8只。

1．2．2 动物给药

高、中、低剂量组分别按照 2．3g/kg/d、1．15g/kg/d、0．58g/kg/d给予苏木乙酸乙酯提取物橄榄油溶液灌胃;空白组给予同体积橄榄油灌胃，各组连续灌胃7天。

1．2．3 取材

各组连续灌胃7天后，眼球取血1ml，以 5000r/min，4℃离心5min后留取血清备用。

1．2．4 检测指标

采用ELISA法检测大鼠血清IL－1、IL－2、IL－12及IFN－γ含量的变化，具体流程参照ELISA试剂说明书操作。

1．3 统计学处理

采用SPSS 16．0 统计分析软件，所有数据以均数±标准差(±s)表示，多组间比较用F检验。

2 结果

苏木高、中、低剂量组及空白组细胞因子的表达见表1。

表1 苏木高、中、低剂量组及空白组细胞因子的表达(±s，n=8)

表1 苏木高、中、低剂量组及空白组细胞因子的表达(±s，n=8)

注:与空白组比较，*P ＜0．05;与高剂量组比较，#P ＜0．05;与中剂量组比较，▲P ＜0．05;与低剂量组比较，●P ＜0．05。

空白组 69．300 ±25．916 169．913 ±17．012#▲ 64．838 ±8．085#▲● 136．400 ±29．822#▲高剂量组 66．075±20．699 79．350±15．994＊▲● 28．925±4．258＊▲● 76．588±8．605＊●中剂量组 66．131 ±20．108 118．913 ±18．093*# 40．438 ±8．287*# 86．738 ±10．493*低剂量组 71．488 ±28．125 153．425 ±36．435# 48．513 ±6．732*# 121．038 ±23．159#▲

由表1可知，苏木乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组与空白组IL－1的表达无明显差异(P＞0．05)。苏木乙酸乙酯提取物高、中剂量组IL－2的表达均降低，与空白组比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)，且高剂量组IL－2的表达明显低于中剂量组，差异具有统计学意义(P＜0．05)，苏木乙酸乙酯提取物低剂量组IL－2的表达与空白组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

苏木乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组IL－12的表达均降低，与空白组比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)，且高剂量组表达明显低于中、低剂量组，差异具有统计学意义(P＜0．05)，中、低剂量组间没有明显差异(P ＞0．05)。

苏木乙酸乙酯提取物高、中剂量组IFN－γ的表达均降低，且与空白组比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)，但高、中剂量组之间没有明显差异(P＞0.05)，苏木乙酸乙酯提取物低剂量组IFN－γ的表达与空白组比较，差异无统计学意义(P＞0．05)。

3 讨论

白细胞介素，简称白介素，指在白细胞或免疫细胞间相互作用的淋巴因子，它与血细胞生长因子同属细胞因子。两者相互协调，作用共同完成造血和免疫调节功能。白介素在激活、调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。

IL－1 是多种类型细胞如单核细胞等在免疫应答时产生的细胞因子，血小板生长因子能刺激集落刺激因子等细胞因子的产生并且能够促进T细胞产生IL－2，在免疫应答和组织修复中起作用。IL－2主要由活化的CD4+T细胞和CD8+T细胞产生，是所有T细胞亚群的生长因子，并能够促进B细胞增殖，是调控免疫应答的重要因子［6］。IL－12是一种异源二聚体分子，主要由单核/巨噬细胞及B淋巴细胞产生，在肿瘤、感染以及自体免疫性疾病中起重要作用。IFN是具有广泛生物活性的一种蛋白质，具有抗肿瘤、调节免疫功能、抗病毒等多种作用。IFN可调动机体免疫系统，增强机体的细胞免疫功能，是机体防御系统的重要组成部分。

本研究结果显示，苏木乙酸乙酯提取物可以抑制大鼠外周血IL－2、IL－12、TNF－γ的表达，且与药物浓度有关，高、中、低剂量组均可以抑制IL－12、TNF－γ的表达，且高剂量组作用明显强于中、低剂量组。高、中剂量组均可以抑制IL－2的表达，且高剂量组作用强于中剂量组，低剂量组对IL－2的表达没有明显的抑制作用。由此提示，苏木乙酸乙酯提取物具有一定的免疫抑制作用，且作用强度与药物剂量有关，其作用机理可能为:1)通过抑制IL－2、TNF－γ的表达，抑制单核巨噬细胞的活化，使单核巨噬细胞MHCⅠ类分子、Ⅱ类分子和共刺激分子的表达水平显著降低，从而抑制单核巨噬细胞的抗原提升作用。2)通过抑制IL－12的表达，使NK细胞分泌IFN－γ水平降低，从而抑制Th0 向Th1 细胞方向分化，抑制T细胞的增殖和巨噬细胞的活化，从而抑制T细胞和巨噬细胞介导的免疫应答。3)通过降低IL－2、IL－12的表达，抑制NK细胞的活化，从而减弱其细胞毒作用。

［1］ 中国科学院中国植物志编写委员会．中国植物志［M］．北京:科学出版社，1986:105．

［2］ 周亚滨．苏木对大鼠同种异位心脏移植心肌颗粒酶B mRNA表达的影响［J］．上海免疫学杂志，2002，22(2):110－112．

［3］ 周亚滨．苏木对同种异位心脏移植大鼠心肌穿孔素mRNA表达的影响［J］．中国中西医结合杂志，2003，23(5):370－372．

［4］ 于波．苏木提取物对心脏移植大鼠T淋巴细胞亚群的免疫抑制和对心肌的保护作用［J］．中国地方病学杂志，2004，23(6):539－542．

［5］ 姜斌，周亚滨．苏木乙酸乙酯提取物对大鼠心脏移植慢性排斥模型血清IL－10 水平的影响［J］．中医药学报，2012，40(5):30－31．

［6］ 覃仕化，汪悦．痹痛灵颗粒对胶原诱导关节炎大鼠血清及滑膜组织匀浆中 IL－2的影响［J］．西部中医药，2011，24(11):26－27．