乌腺金丝桃与丹参抗实验性快速心律失常的配伍研究

李冀，何增芬，马育轩，王艳丽，付殷，黄艳霞，高彦宇

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

在前期的实验研究中，本课题组的研究结果表明乌腺金丝桃单味药提取物具有显著的抗心律失常［1］、抗心肌缺血作用［2］。另有研究结果表明，相同条件下乌腺金丝桃与丹参按一定比例配伍提取物对实验动物心肌缺血的保护作用优于单味药组［3］。但未见丹参与乌腺金丝桃配伍应用预防和治疗心律失常的报道。因此，本实验分别建立氯仿引起小鼠心室颤动模型和氯化钙诱发大鼠心律失常模型，观察和统计乌腺金丝桃与丹参不同比例配伍对心律失常模型动物的影响，为进一步研究提供实验依据。

1 实验材料

1．1 动物 SPF级昆明种小鼠，84只，雌雄各半，体质量(35±2)g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供;SPF级Wistar大鼠，64只，雌雄各半，体质量(200±10)g，由黑龙江中医药大学实验动物中心代购，许可证号:SCXK(京)2012－0001。均给予标准饲料，自由饮食水。

1．2 药品与试剂 乌腺金丝桃提取物，丹参提取物，乌腺金丝桃与丹参1∶1(按生药质量比，下同)提取物，乌腺金丝桃与丹参1∶2提取物，乌腺金丝桃与丹参2∶1提取物。乌腺金丝桃、丹参均由黑龙江中医药大学方剂学实验室提供。

药品的制备:将乌腺金丝桃植株剪段，与丹参的生药饮片按既定质量比分组混匀，每组生药先以蒸馏水提取2次，第1次加8倍量水浸泡15min，冷凝回流提取60min，第2次加6倍量蒸馏水，冷凝回流提取40min;再以95%乙醇提取2次，煎煮方法、时间分别与两次水提相同。将4次所得药液混合，减压浓缩至所需体积，即得各组提取物。

盐酸普萘洛尔片(规格:10mg/片，大同市云岗制药有限公司，国药准字H14020563，批号111021);盐酸维拉帕米片(规格:40mg/片，天津市中央药业有限公司，国药准字H12020051，批号120402);注射用生理盐水(哈尔滨三联药业有限公司，批号120723A6);氯仿(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司，批号101206);无水氯化钙(分析纯，汕头市西陇化工厂有限公司，批号0903122);乌来糖(化学纯，上海山浦化工有限公司，批号20080110);碘伏(山东利尔康消毒科技股份有限公司，批号120311A)。

1．3 仪器 98－1－B型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司);SZKW－D－1型电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂);SHB－Ⅲ型循环水真空泵(郑州长盛实验仪器有限公司);R－201型旋转蒸发器(上海申胜生物技术有限公司);BL－420S型BL系列生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司)。

2 实验方法

2．1 实验动物的筛选 昆明种小鼠、Wistar大鼠分别适应性喂养7天后，选取健康小鼠、大鼠，再以Ⅱ导联心电图筛选出心电图正常的小鼠84只、大鼠64只，进行实验。

2．2 氯仿引起小鼠心室颤动实验 把经过筛选的84只小鼠按体质量随机分为7组，每组12只(雌雄各半)，即乌腺金丝桃提取物组(以下简称乌提组)、丹参提取物组(以下简称丹提组)、乌腺金丝桃与丹参1∶1提取物组(以下简称1∶1组)、乌腺金丝桃与丹参1∶2提取物组(以下简称1∶2组)、乌腺金丝桃与丹参2∶1提取物组(以下简称2∶1组)、盐酸普萘洛尔组即阳性药物对照组(以下称简阳对组)、模型对照组(以下简称模型组)。乌提组、丹提组、1∶1 组、1∶2 组、2∶1 组分别给予相应提取物，乌腺金丝桃给药剂量8．32g/kg(按生药，下同)，丹参给药剂量8．32g/kg，阳对组给予盐酸普萘洛尔3．90mg/kg，模型组给予生理盐水，各组实验动物均经灌胃给药，灌胃体积为0．2ml/10g，1次/天，连续灌胃14天。末次给药1h后，依次将小鼠放入含有3～4ml氯仿的棉球(更换小鼠时以氯仿饱和棉球)倒置的600ml烧杯内，至呼吸停止立即取出剖开胸腔，肉眼检查心律，统计心室颤动发生率［4］。

2．3 氯化钙诱发大鼠心律失常实验 将筛选后的64只大鼠按体质量随机分为8组，每组8只(雌雄各4只)，即乌提组、丹提组、1∶1 组、1∶2 组、2∶1 组、盐酸维拉帕米组即阳性药物对照组(以下简称阳对组)、模型组、空白对照组(以下简称空白组)。乌提组、丹提组、1:1组、1:2组、2:1组分别给予相应提取物，乌腺金丝桃给药剂量为5．76g/kg，丹参给药剂量为5．76g/kg，阳对组给予盐酸维拉帕米片43．2mg/kg，模型组和空白组均给以相应体积的生理盐水，灌胃体积为1ml/100g，1次/天，连续灌胃14天。末次给药1小时后，20%乌拉坦 0．6ml/100g(1．2g/kg)［5］腹腔麻醉，仰位固定，碘伏棉球消毒手术部位，暴露一侧股静脉以备给药。按使用说明连接BL系列生物机能实验系统，记录标准正常Ⅱ导联心电图，10min后，乌提组、丹提组、1∶1 组、1∶2 组、2∶1 组、阳对组、模型组以2．5%氯化钙0．4ml/100g(100mg/kg)［6］，空白组以生理盐水 0．4ml/100g，10s内匀速推注，并记录心电图Ⅱ导联，观察其心律失常情况，实验结果以心律失常潜伏时间、心律失常持续时间、死亡率做指标统计受试药物抗心律失常作用。

3 实验结果

3．1 实验各组小鼠心室颤动发生率比较 表1提示各给药组小鼠心室颤动发生率分别为:模型组91.67%、阳对组 16．67%、乌提组 50．0%、丹提组58.33%、1∶1 组 41．67%、1∶2 组 25．0%、2∶1 组66.67%，与模型组比较，1∶1组、1∶2组均有非常显著性差异(P ＜0．01)，乌提组有显著性差异(P ＜0．05)。说明乌腺金丝桃提取物、1∶1提取物、1∶2提取物、2∶1提取物均能不同程度降低氯仿诱发的小鼠心室颤动发生率，对小鼠心脏均有一定保护作用，其中1∶1提取物、1∶2提取物对心室颤动小鼠心脏保护作用尤为显著。

表1 各实验组小鼠氯仿诱发心室颤动发生率比较

图1 正常心电图

图2 注射氯化钙溶液后心电图

图3 恢复正常节律后心电图

3．2 实验各组大鼠心律失常潜伏时间、持续时间比较 经股静脉注射氯化钙溶液前后大鼠心电图如图1、2和3，图1为注药前正常心电图，图2为注射氯化钙溶液后心电图，图3为恢复正常节律后心电图。表2表明，各给药组心律失常潜伏时间与模型组比较，乌提组、丹提组、1∶1 组均有显著性差异(P ＜0．05)，阳对组、1∶2组有非常显著性差异(P＜0．01)。与模型组比较，各给药组大鼠心律失常持续时间，乌提组、1∶1组有显著性差异(P＜0．05)，阳对组、1∶2组有非常显著性差异(P＜0．01)。说明乌腺金丝桃提取物、丹参提取物、1∶1提取物、1∶2提取物均能延长大鼠心律失常潜伏时间、缩短心律失常持续时间，具有抗氯化钙引起的大鼠心律失常作用，其中1∶2提取物对氯化钙引起心律失常大鼠心脏保护作用优于其他提取物。

表2 各实验组大鼠氯化钙引起心律失常潜伏时间、持续时间比较(±s)

表2 各实验组大鼠氯化钙引起心律失常潜伏时间、持续时间比较(±s)

注:与模型组比较，*P ＜0．05，＊＊P ＜0．01。

组别 数量(只)心律失常潜伏时间(s)心律失常持续时间(s)空白组8－－模型组 8 7．75 ±1．76 113．80 ±3．81阳对组 8 15．10±2．58＊＊ 84．95±4．84＊＊乌提组 8 11．42 ±1．96* 104．02 ±3．202*丹提组 8 11．38 ±1．77* 104．99 ±7．061∶1 组 8 11．97 ±2．28* 102．55 ±4．44*1∶2 组 8 13．35 ±2．09＊＊ 93．13 ±2．94＊＊2∶1 组9．52 ±2．18 108．38 ±5．068

3．3 各实验组氯化钙引起心律失常大鼠死亡率比较

由表3可见，阳对组死亡率为12．5%，乌提组死亡率为37．5%，丹提组死亡率为 50．0%，1∶1组死亡率为25．0%，1∶2 组死亡率为12．5%，2∶1 组死亡率为75.0%。与模型组比较，阳对组、1∶2有非常显著性差异(P ＜0．01)，乌提组、1∶1组有显著性差异(P ＜0.05)，说明乌腺金丝桃提取物、乌腺金丝桃与丹参1∶1提取物、乌腺金丝桃与丹参1∶2提取物能降低氯化钙引起心律失常大鼠死亡率，对心脏有保护作用，且乌腺金丝桃与丹参1∶2提取物抗心律失常作用优于其他提取物。

表3 各实验组大鼠死亡率比较

4 讨论

心律失常(cardiac arrhythmia)是指心脏冲动的频率、节律、起源部位、传导速度或激动次序的异常［7］。心律失常是疾病名，可作为临床诊断单独发生，也是症状，作为合并症、并发症存在。心律失常在冠心病、扩张性心肌病等心血管疾病中发病广，是危害较为严重的疾病之一。心律失常的造模方法有多种且导致心律失常的机制各异。本实验选取氯仿和氯化钙建立心律失常模型。氯仿诱发的小鼠心室纤颤与植物神经紊乱及递质释放有关［8］。氯化钙诱发心律失常的作用机制较复杂，不仅是钙离子对心脏的直接作用，而且与肾上腺素能神经对心脏的作用也有关。本实验研究结果表明，乌腺金丝桃与丹参1:2配伍提取物组能明显降低氯仿引起小鼠心室颤动发生率、延长氯化钙诱发大鼠心律失常潜伏时间、缩短氯化钙诱发大鼠心律失常持续时间。且在相同实验条件下，对实验动物心脏的保护作用优于单味药组和其他配伍组，本实验结果将为后续研究提供实验基础。

［1］ 李冀，滕林，高彦宇．乌腺金丝桃抗心律失常作用的研究［J］．中医药信息，2008，25(6):32－33．

［2］ 李冀，滕林，高彦宇．乌腺金丝桃提取物对小鼠心肌缺血的保护作用［J］．中国中医药信息杂志，2009，16(1):38－39．

［3］ 李冀，曹明明，高彦宇．乌腺金丝桃与丹参配伍对心肌缺血模型动物影响的研究［J］．中医药学报，2012，40(1):17－19．

［4］ 魏伟，吴希美，李元建．药理实验方法学［M］．北京:人民卫生出版社，2010:978－982．

［5］ 胡久略，黄显章．炙甘草汤抗心律失常作用的实验研究［J］．时珍国医国药，2008，19(5):1189－1190．

［6］ 刘演波，刘苗苗，毛飞鹏，等．牛磺酸对氯化钙引起的大鼠心律失常的保护作用［J］．广东药学院学报，1998，14(4):331－332．

［7］ 叶任高，陆再英．内科学［M］．北京:人民卫生出版社，2007:178．

［8］ 李敏，朱静，王祥．充血性心力衰竭患者血浆脑钠素水平与其心功能关系的研究［J］．心血管康复医学杂志，2007，16(1):30－32．