P53、P57和Ki-67在绒毛水肿及水泡状胎块中的表达及意义

李军红，程蔚蔚

水泡状胎块以滋养叶细胞增生和胎盘绒毛过度生长为特征，可分为完全性水泡状胎块和部分性水泡状胎块。不同类型的水泡状胎块治疗和预后不同，以往主要靠组织学进行鉴别诊断。近年来，随着超声技术的发展，使得发现和怀疑水泡状胎块的时间不断提前，但由于早期水泡状胎块的组织学特征并不典型，与流产的水肿绒毛鉴别诊断也有困难，这就要求找一些标志物以辅助诊断[1]。近年来有一些文献报道P53、P57及Ki-67在不同的胎盘绒毛水肿性病变中有鉴别诊断的价值，但结果不甚一致。本组应用免疫组化EnVision方法检测15例流产水肿绒毛、20例部分性水泡状胎块及23例完全性水泡状胎块中Ki-67、P53、P57蛋白的表达情况，以探讨和总结其在临床病理诊断中的价值。

1 材料与方法

1.1临床资料收集洛阳市中心医院病理科2002～2012年临床及病理形态学上明确诊断为流产水肿绒毛、部分性水泡状胎块、完全性水泡状胎块各18、23、20例。所选标本均经10%中性缓冲福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，用于HE和免疫组化染色。

1.2方法应用免疫组化EnVision方法检测P53(克隆号SP5)、P57(克隆号57P06)、Ki-67(克隆号MIB-1)鼠抗人单克隆抗体，操作按说明步骤进行，设阴性及阳性对照。所有抗体及其试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3免疫组化结果判定由两位高年资病理医师进行交叉双盲判定。P53阳性均定位于胞核，胞核明确的棕黄色颗粒判定为阳性，选取200个细胞滋养叶细胞观察，≥5%的P53细胞核着色判为阳性，否则为阴性；P57判读参照Kale[2]等报道的方法：P57阳性均定位于胞核，在1张切片中若绒毛间质细胞和细胞滋养叶细胞着色，阳性细胞数>30%左右即判定为阳性；绒毛间质细胞和细胞滋养叶细胞不着色或散在着色，阳性细胞数小于总数的30%判断为阴性。Ki-67阳性定位于细胞核，选取200个细胞滋养叶细胞观察，Ki-67PI为阳性细胞数/计数细胞总数×100%。

1.4统计学处理用SPSS 11.5统计软件包作统计学处理 ，数据采用方差分析，q检验和χ2检验，检验水平均定在α=0.05水平。

2 结果

18例流产水肿绒毛、23例部分性水泡状胎块及20例完全性水泡状胎块中Ki-67、P53、P57蛋白的表达结果见表1。在流产水肿绒毛、部分性水泡状胎块、完全性水泡状胎块的细胞滋养液细胞中，P53的表达分别为1/18(5.6%)、14/23(60.9%)、16/20(80.0%), 部分性水泡状胎块组和完全性水泡状胎块组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，而部分性水泡状胎块和完全性水泡状胎块组与流产水肿绒毛组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；P57的表达分别为18/18(100.0%)、32/23(100.0%)、0(0%)，完全性水泡状胎块组的阳性表达率显著低于流产水肿绒毛和部分性水泡状胎块组，差异有统计学意义(P<0.05), 流产水肿绒毛和部分性水泡状胎块组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；Ki-67 PI的表达分别为(11.0±6.3)%、(57.2±10.8)%、(63.2±16.8)%,完全性水泡状胎块组和部分性水泡状胎块组比较差异无统计学意义(P>0.05)，而完全性水泡状胎块和部分性水泡状胎块组与水肿流产绒毛组比较有统计学意义(P<0.05)。

表1 Ki-67、P53、P57在流产水肿绒毛、部分性水泡状胎块及完全性水泡状胎块中的表达 例(%)

3 讨论

P53基因产物是一种核蛋白，它被认为能参与细胞周期、凋亡和维持基因组稳定性的调控。其突变性P53蛋白不但失去了对细胞增殖和分化的负调节作用，还能正向激活某些促生长基因的表达，促进细胞增殖，导致肿瘤发生。本组结果显示，P53蛋白在流产性绒毛中弱表达(5.6%)，在部分性水泡状胎块和完全性水泡状胎块中的表达率分别为60.9%和80.0%。提示P53在水肿绒毛组织与水泡状胎块中的表达有显著差异，与文献[3]报道的结果一致。由此提示水泡状胎块中可能存在P53抑癌基因的突变，结果同时表明P53蛋白的检测有助于鉴别诊断水肿流产的绒毛和水泡状胎块。

P57蛋白是细胞周期负性调控因子，属于CIP/KIP家族，参与细胞周期调控、促进凋亡、诱导分化。目前在多种肿瘤中发现P57印记缺失或印记错误，导致基因表达下降[4]，表明P57的表达缺失可能促进了肿瘤的增殖。本组研究显示P57在流产水肿绒毛组和部分性水泡状胎块组中的表达率为100.0%，在完全性水泡状胎块组中的无表达。提示P57在流产水肿绒毛组和部分性水泡状胎块组与完全性水泡状胎块组中的表达有显著差异，支持一些学者的观点[5]∶P57标记可以被应用于形态上难以客观区别的部分性水泡状胎块和完全性水泡状胎块的鉴别。

Ki-67表达在所有活动的细胞周期(G1、S、G2和有丝分裂期)中，而在G0期不表达。Ki-67 PI高低与许多肿瘤的分化程度、浸润转移以及预后密切相关。本组研究显示Ki-67 PI在水泡状胎块组和流产水肿绒毛组间表达有显著差异，结果表明Ki-67 PI可较为准确地反映水泡状胎细胞滋养液细胞的增生活性，可作为评估病变是水泡状胎块或是流产水肿绒毛的重要参考指标[6]。值得注意的是Ki-67只计数围绕肿胀绒毛的细胞滋养细胞的Ki-67阳性细胞，然后计算出Ki-67 PI，不应包括绒毛外细胞滋养细胞以及合体滋养细胞，与卢先军等[7]报道的方法一致，提示其在应用中评估的方法也很关键。

总之，在完全性水泡状胎块、部分性水泡状胎块和流产水肿绒毛从形态上不易鉴别时，P53、P57、Ki-67免疫组化指标可作为进一步诊断的依据，具有较高的灵敏性和特异性。

参考文献：

[1]刘从容，惠培.葡萄胎的分子诊断[J].中华病理学杂志，2011,40(1)：6-10.

[2]Kale A，Söylemez F，Ensari A.Expressions of proliferation markers (Ki-67，proliferating cell nucler antigen，and silverstaining nucleolar organizer regions)and of P53 tumor protein in gestational trophoblastic disease[J].Am J Obstet Gynecol，2001,184(4)：567-574.

[3]Chen Y,Shen D,Gu Y,et al.The diagnostic value of Ki-67,P53 and P63 in distinguishing partial Hydatidiform mole from hydropic abortion [J].Wien Klin Wochenschr,2012,124(5-6):184-187.

[4]Popiolek D A,Yee H,Mittal K，et al.Multiplex shorttandem repeat DNA analysis confirms the accuracy of P57 immunostaining in the diagnosis of complete hydatidiform model[J].Hum Pathol，2006,37(11)：1426-1434.

[5]Landolsi H，Missaoui N，Brahem S，et al.The usefulness of P57(KIP2)immunohistochemical staining and genotyping test in the diagnosis of the hydatidiform mole[J].Pathol Res Pract，2011,207(80):498-504.

[6]柯儒斌，徐潮，黄炎，等. Ki-67、P53和P57在水泡状胎块中的表达及意义[J].实用医学杂志，2012,28(21)：3584-3586.

[7]卢先军，姜冰，栗占三. Ki-67和P53在水泡状胎块中的表达及意义[J].医学临床研究，2010,27(10)：1886-1888.