黑皮果蔗组培脱毒与快繁技术研究

林警周，陈金斌，倪秋凉，邓妍妍，吴松海

(1.福建省龙岩市新罗区种子站 364000;2.福建省龙岩市新罗区苏坂乡;3.福建省龙岩市新罗区农业局;4.福建省农业科学院甘蔗研究所)

福建省龙岩市新罗区是黑皮果蔗的主要产区，2011年全县黑皮果蔗种植面积667 hm2。黑皮果蔗皮薄、茎脆、汁多、味甜，富含人体所需的多种氨基酸、维生素和矿物质等，可以解渴、充饥、消除疲劳，在药用上还有消痰止咳、健脾解酒的功效，是一种深受广大消费者喜爱的果品，市场前景十分广阔，农民种蔗的积极性很高。但由于黑皮果蔗在本地已推广多年，种性退化问题已开始显现，尤其是果蔗花叶病和宿根矮化病发生严重，造成植株变矮、节间变短、品质变劣，致使其商品性变差，产量下降，严重的减产30%左右［1］，已影响新罗区果蔗产业的发展。为了对黑皮果蔗进行提纯复壮，提高其种性，笔者于2010年对黑皮果蔗的脱毒组培技术进行探索研究。

1 材料与方法

1.1 材料

选取无病虫害、长势较好并已露节的黑皮果蔗蔗茎为供试材料，用52℃热水温汤浸种30 min进行脱毒处理，之后种植，待种苗长到20 cm后，取下茎梢。立即对取下的茎梢叶片用RT－PCR检测法进行甘蔗花叶病毒 (SCMV)、甘蔗高粱花叶病毒(SrMV)和甘蔗黄叶病毒 (ScYLV)检测。检测后，将没有带病毒的茎梢作为试验材料。

1.2 方法

1.2.1 材料处理 将茎梢的外叶鞘剥开切段，先用75%酒精对外部及两端切口擦洗，再用75%酒精擦洗1次，环剥外层叶鞘并去除两端切口，之后把茎段进行横切，每段2 mm左右，作为诱导愈伤组织的材料。

1.2.2 培养基 诱导愈伤组织、分化培养、生根培养3个试验各设置4种不同浓度的培养基配方。

诱导愈伤组织培养基:①MS+2，4－D 0.5 mg/L;②MS+2，4－D 1.5 mg/L;③MS+2，4－D2.5 mg/L;④MS+2，4－D 3.5 mg/L。

分化增殖培养基:①MS+BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L;②MS+BA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L;③MS+BA 1.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L;④MS+BA 2.0 mg/L+KT 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

诱导生根培养基:①1/2MS+IBA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L;②1/2 MS+IBA 1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L;③1/2 MS+IBA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L;④1/2 MS+IBA 2.0 mg/L+NAA 1.5 mg/L。

1.2.3 培养条件 在黑暗环境条件下，有利于果蔗愈伤组织的诱导，此阶段要用厚布对组培瓶进行遮盖。绿苗分化增殖及生根培养则需要光照，在培养室用日光灯进行照射，每天光照10 h以上，光照度为1 500～2 000 lx，培养室温度保持在26～28℃。

2 结果与分析

2.1 诱导愈伤组织

在诱导愈伤组织阶段，以MS作为基本培养基，通过调节2，4－D浓度，从中选取合适诱导愈伤组织的2，4－D浓度。在愈伤组织诱导阶段，每种浓度处理接种200粒、10 d左右，诱导出淡黄色的愈伤组织，长成结构较为紧密的菜花状;25 d后，进行观察记载。从表1数据看出，2，4－D 1.5 mg/L浓度及2.5 mg/L浓度处理的诱导率达到90%以上。其中2，4－D浓度为2.5 mg/L处理的诱导率达到94.0%，且诱导质量较高，是愈伤组织诱导的适宜浓度。

表1 不同浓度的2，4－D对愈伤组织诱导的影响

2.2 分化培养

2.2.1 细胞分裂素含量对分化绿苗的影响 在绿苗分化阶段，通过调节6－BA和KT的浓度，观察其对绿苗分化的影响，从中确定适宜的细胞分裂素浓度水平。

从表2数据看出，愈伤组织经过25 d的培养，不同浓度处理均能分化出绿苗，分化率都达到80%以上。其中MS+BA 1.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L处理的绿苗分化率最高，质量最好，苗较高较壮。

表2 细胞分裂素含量对绿苗分化的影响

2.2.2 细胞分裂素含量对绿苗增殖培养的影响在绿苗增殖阶段，继续采用上述4种细胞分裂素的浓度组合。培养25 d后，4个处理均可见绿苗增殖，但增殖数量和苗的长势存在一定的差别。

从表3数据看出，MS+BA 1.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L处理的效果最好，苗数多，苗较高较壮，长势最好，且增殖系数最高，达到4.0倍;MS+BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L处理的效果最差，苗小且少，增殖系数只有2.0倍;其他2种浓度处理的表现中等，苗数较多，增殖系数都达到3.0倍以上。试验结果表明，适宜绿苗增殖的培养基为MS+BA 1.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

表3 细胞分裂素含量对绿苗增殖培养的影响

2.3 生根培养

由于生根阶段对大量元素需求较少，因此对MS基本培养基进行减半处理，通过调节IBA和NAA的浓度，观察对果蔗生根的影响。

从表4数据看出，4个处理的生根率都达到80%以上，其中1/2 MS+IBA 2.0 mg/L+NAA 1.0mg/L处理的生根率达到92.0%，苗高且壮，根较长且壮;1/2 MS+IBA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L处理的生根率较低，苗细小，长势较差。因此，适宜的生根培养基配方为1/2 MS+IBA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L。

表4 IBA对生根的影响

2.4 假植阶段

待根系较为发达后，可假植到苗床，用甲基托布津进行消毒，盖上地膜保温保湿，成活率可达90%以上。

3 讨论

在组培过程中，发现光照强度对芽苗长势有较大影响，当光照强度大于1 500 lx时，芽苗粗壮，叶片浓绿，肥厚;反之，长势较差。