延胡索加工炮制一体化饮片与传统炮制饮片镇痛作用比较

杨毅，孙乙铭，徐建中，俞旭平(浙江省中药研究所，杭州 310023)

延胡索为罂粟科植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T.Wang)的干燥块茎，别名元胡。延胡索是常用理气止痛药，具活血化淤、行气止痛功效，临床常用于胸胁、脘腹疼痛、经闭痛经、产后淤阻、跌打肿痛等证[1]。延胡索乙素为延胡索主要化学成分之一，具有显著的镇痛作用。现代药理实验亦证明其有镇痛作用[2]。目前临床用延胡索多为炮制品；其传统的加工炮制分为 2个阶段，即产地加工和入药前炮制。

传统的延胡索加工炮制方法不仅工艺繁琐，实际应用费时费力，其质量也不稳定。而且，传统延胡索饮片呈块状或粒状，质地坚硬，有效成分煎出率低。将延胡索的产地加工与炮制结合起来的一体化加工技术，生产出的延胡索饮片不仅能提高延胡索药材的质量，还能减少药材中有效成分的流失。经检测，加工炮制一体化的延胡索饮片中延胡索乙素的含量高出药典 50%以上。加工炮制一体化延胡索饮片不仅质量稳定，品质得到了保证，同时也为中药生产企业减少了能源的消耗，提高其生产效率，增加产业效益。

本研究利用扭体法、热板法和热水缩尾法比较加工炮制一体化延胡索饮片与传统炮制延胡索饮片的镇痛作用的差异性，为延胡索的加工炮制一体化工艺技术提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 动物

ICR小鼠，♀♂皆用，体质量18～22 g，由浙江省实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(浙)2003-0001。

1.2 试剂

0.6 %醋酸溶液，由中国杭州化学试剂有限公司生产，生产许可证：XK13-201-00067。阿司匹林肠溶片(德国拜耳公司，批号：20110978，规格：0.1 g)。

1.3 仪器

APT457A型工业电子天平(深圳安普特电子科技有限公司)；ACS-6型电子天平(花潮公司)；YJ501S型超级恒温浴槽(上海跃进医疗器械厂)；秒表(上海秒表厂)。

1.4 试验样品制备

试验样品制备见表1。

延胡索乙素测定方法根据孙乙铭等[3]的文献方法进行测定。给药样品采用称取不同延胡索样品50 g浸泡1 h，水煎煮2次，第1煎加入400 mL水，第2煎加入250 mL水，2次煎煮微沸25 min，过滤，合并滤液，水浴浓缩。制成水煎液1 g·mL-1。

2 方法与结果

2.1 小鼠扭体法镇痛试验

取体质量18～22 g小鼠(♀♂各半)随机分为5组，每组16只，分别为延胡索加工炮制一体化样品1、传统炮制延胡索样品、延胡索加工炮制一体化样品 2、阳性对照组及生理盐水组。灌胃给药3 d，给药剂量为 1 0 g·kg-1。末次给药前禁食 4 h，灌胃 30 min后腹腔注射 0.6%醋酸溶液，剂量为0.1 mL·(10 g)-1，观察并记录 2 0 min 内出现扭体反应的动物数及其平均扭体次数(以后肢伸展，身体扭曲拉长，腹肌内凹，间歇性收缩为痛指标)。结果见表2。

表1 试验样品制备Tab 1 The preparation of samples

表2 不同延胡索样品及阳性药对小鼠醋酸扭体反应的影响(n=16， s )Tab 2 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on the twisting response of mice induced by acetic acid(n=16, s )

表2 不同延胡索样品及阳性药对小鼠醋酸扭体反应的影响(n=16， s )Tab 2 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on the twisting response of mice induced by acetic acid(n=16, s )

注：与生理盐水组相比，1)P<0.01Note: Compared with saline group, 1)P<0.01

组 别 扭体潜伏期/s 扭体次数(20 min)/次 抑 制率/%样品 1 547.40±347.48 5.33±4.351) 63.3样品 2 473.47±340.48 9.33±8.62 35.8样品 3 518.13±289.17 11.47±7.85 21.1阳性对照组 551.56±298.59 4.42±4.591) 69.6生理盐水组 428.13±249.21 14.53±11.98 -

由表2可见，3种延胡索醋制样品和阳性对照组均可使醋酸所致小鼠扭体反应的潜伏期延长，20 min内扭体次数减少，均具有镇痛作用。与生理盐水组相比，在醋酸诱发小鼠扭体反应试验中，3种炮制延胡索，镇痛率分别达到63.3%，35.8%，21.1%和69.6%。尤其样品1抑制率达到63.3%，在20 min内样品1和阳性对照组扭体次数显著减少(P<0.01)。

2.2 小鼠热板法镇痛实验

在室温为 13～18 ℃的环境下，取体质量 18～22 g小鼠，♀，在恒温水浴(55±0.5)℃条件下，依次测量各小鼠的痛阈值(用秒表记录，自小鼠投入热浴板中至出现舔后足的反应时间为痛阈指标。选择痛反应潜伏期在5～60 s的小鼠为合格鼠，剔除过敏(<5 s)或反应迟钝(>60 s)的个体。取合格小鼠，按痛阈时间分为 5组，分别为延胡索加工炮制一体化样品1、传统炮制延胡索样品、延胡索加工炮制一体化样品2、阳性对照组及生理盐水组。每组22只，给药3 d后进行实验。末次给药前将小鼠置于(55±0.5)℃的热板上，首先测定5个实验组的基础潜伏期，给药前测2次(间隔10 min)，取其平均值，然后给对照组用生理盐水灌胃，其余4个给药组分别用对应样品灌胃，测定各组在给药后30，60，90，120 min舔足潜伏期的变化。超过90 s无反应者，潜伏期按90 s计。结果见表3。

表3 不同延胡索样品及阳性药对小鼠热板测试舔足反应潜伏期的影响(n=22， s )Tab 3 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by hot-plate test(n=22, s )

表3 不同延胡索样品及阳性药对小鼠热板测试舔足反应潜伏期的影响(n=22， s )Tab 3 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by hot-plate test(n=22, s )

注：与生理盐水组相比较，1)P<0.05, 2)P<0.01；与样品3组比较，3)P<0.05Notes: Compared with saline group, 1)P<0.05, 2)P<0.01; compared with sample 3 group, 3)P<0.05

组 别 基础潜伏期/s 给药后各时间段的舔足潜伏期/s 30 min 60 min 90 min 120 min样品 1 33.55±14.73 36.35±19.49 34.13±22.712)3) 41.30±18.812) 32.39±19.571)样品 2 33.73±12.47 34.43±22.56 30.86±18.682)3) 34.62±19.75 30.38±15.251)样品 3 33.23±17.01 29.86±15.81 19.10±11.92 30.38±24.45 21.57±20.05阳性对照组 33.83±15.23 35.90±17.56 37.56±15.632) 48.68±23.562) 30.56±18.671)生理盐水组 33.45±12.42 27.27±16.69 15.64±7.13 20.32±10.54 20.73±10.42

表3结果表明，与生理盐水组相比，3种炮制延胡索给药组与阳性对照组在给药60 min以后均具有提高小鼠热刺激痛阈的作用。给药 120 min后，样品1、样品2和阳性组仍具有明显镇痛作用。样品3在给药后30，60，90，120 min痛阈值有所延长，但与生理盐水组比较差异不具有统计学意义(P>0.05)。

2.3 热水缩尾法疼痛模型的制备及给药方案[4]

取小鼠，♀♂兼用，将小鼠尾尖端3 cm浸入 48 ℃恒温水浴锅中，记录其缩尾的潜伏期为痛阈指标，测2次(间隔10 min)，求其平均值，取潜伏期是5～30 s的为合格鼠，剔除过敏(<5 s)或反应迟钝(>30 s)的个体。24 h后进行实验，取合格小鼠50只，分别为延胡索加工炮制一体化样品 1、传统炮制延胡索样品、延胡索加工炮制一体化样品 2、阳性对照组及生理盐水组，每组小鼠10只。给药3 d后进行实验。末次给药前将小鼠尾尖端3 cm浸入48 ℃的恒温水浴锅中，测定5个实验组的基础潜伏期，测两2次(间隔10 min)，取其平均值，然后给对照组用生理盐水灌胃，其余4个给药组分别用对应样品灌胃，测定各组30，60，90，120 min 小鼠的缩尾潜伏期的变化，超过60 s无反应者，痛阈按60 s计。结果见表4和表5。

表4 不同延胡索样品及阳性药对小鼠热水缩尾法疼痛潜伏期的影响(n=10， s )Tab 4 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by tail-immersion test(n=10, s )

表4 不同延胡索样品及阳性药对小鼠热水缩尾法疼痛潜伏期的影响(n=10， s )Tab 4 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by tail-immersion test(n=10, s )

注：与生理盐水组相比，1)P<0.05，2)P<0.01Note: Compared with saline group, 1)P<0.05, 2)P<0.01

组 别 基础潜伏期/s 给药后各时间段的疼痛潜伏期/s 30 min 60 min 90 min 120 min样品 1 6.94±0.44 8.86±1.10 10.23±0.962) 8.85±0.332) 9.85±0.782)样品 2 6.88±0.43 8.25±0.76 8.69±0.951) 7.68±0.641) 8.55±0.561)样品 3 6.79±0.48 8.37±0.86 8.65±0.651) 7.54±1.12 8.54±1.36阳性对照组 6.82±0.51 9.25±1.121) 9.58±1.252) 10.28±2.682) 9.78±1.022)生理盐水组 6.85±0.46 7.98±0.88 7.68±0.65 6.95±0.54 7.54±0.98

表5 不同延胡索样品及阳性药对小鼠热水缩尾实验中的痛阈提高率Tab 5 Analgesic ratio of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs by tail-immersion test

表4与表5结果表明，与生理盐水组相比，阳性对照组在给药30 min后具有显著提高小鼠疼痛痛阈的时间，3种炮制延胡索给药组给药60 min以后也均具有提高小鼠疼痛痛阈的时间。给药120 min后，样品1、样品2和阳性组仍具有显著提高小鼠疼痛痛阈的时间。样品3在给药后30，60，90，120 min痛阈值有所延长，其中只有在给药60 min痛阈延长有显著性差异，其他3个时间点与生理盐水组比较差异不具有统计学意义(P>0.05)。表5的结果表明，3种炮制延胡索给药组和阳性组都能提高小鼠疼痛的痛阈时间，尤其是样品1在给药60 min后痛阈提高百分率分别为33.20%，27.34%，30.64%，其中60 min和120 min的痛阈提高率还高于阳性组。数据表明延胡索加工炮制一体化样品的痛阈提高率均高于传统炮制延胡索样品，说明延胡索加工炮制一体化样品延胡索优于传统炮制的加工方法。

3 讨论

将延胡索的产地加工与炮制结合起来的一体化加工技术，不仅能提高延胡索药材的质量，减少药材中有效成分的流失，使其质量稳定，品质得到了保证。从延胡索乙素检测结果看，加工炮制一体化延胡索的延胡索乙素含量远高于传统炮制延胡索；且扭体法、热板法、热水缩尾法都证实了加工炮制一体化延胡索与传统醋制均有镇痛作用，加工炮制一体化延胡索的镇痛作用比传统醋制延胡索的镇痛作用更强。说明延胡索加工炮制一体化技术较优，该技术同时也为中药生产企业减少了能源的消耗，提高其生产效率，增加产业效益。本研究试验为延胡索的加工炮制一体化提供科学依据。

[1]Ch.P(2010)VolⅠ(中国药典2010年版.一部)[S]. 2010: 130.

[2]HUANG J Y, FANG M, LI Y J, et al. Analgesic effect of Corydalis yanhusuo in a rat model of trigeminal neuropathic pain [J]. J Southern Med Univ(南方医科大学学报), 2010,30(9): 2161-2164.

[3]SUN Y M, YU X P, XU J Z, et al. Study on the original procesing techonology in production place of Corydalis Rhizome [J]. Chin J Mod Appl Pharm(中国现代应用药学),2011, 28(10): 923-926.

[4]XU S Y, BIAN R L, CHEN X. The Pharmacological Experimental Methods(药理实验方法学)[M]. Beijing:People's Medical Publishing House, 2001: 882-888.