中药复方外用于大鼠急性痛风性关节炎模型疗效及不同关节肿胀度测量方法效果的比较*

杨 辉 谢志军 温成平

（浙江中医药大学，浙江 杭州 310053）

急性痛风性关节炎是尿酸盐在关节滑膜或软骨沉积，导致滑膜及关节周围组织的炎症反应。本研究通过观察大鼠痛风性关节炎的模型，以足趾容积测量法、关节直径测量法、关节周长测量法3种不同方式对痛风性关节炎的肿胀度进行测量，系统比较了3种方法的优缺点，为相关的疗效评价做参考。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 实验动物 雄性SD大鼠，体质量160～200 g，由上海SIPPR／BK实验动物中心提供。实验操作在浙江中医药大学动物实验中心完成。按随机区组法设计将大鼠均分为6组：模型组、雷公藤低剂量组、雷公藤高剂量组、青风藤低剂量组、青风藤高剂量组、扶他林对照组。每组10只，普通饲料喂养 1周后开始局部造模用药。

1.2 模型制备 实验性尿酸盐性踝关节炎动物模型制作参照Coderre及陈氏法改良进行［1-2］。称取10 g水合氯醛，用蒸馏水溶解、稀释至100 mL，得到10%水合氯醛溶液对大鼠进行腹腔麻醉。称取0.2 g尿酸钠（Sigma 公司生产，批号 12OK5305，规格：每瓶 5 g），充分研细，加入4 mL 0.9%氯化钠注射液，配成5%尿酸钠混悬液，无菌操作，用4号注射针头，将5%尿酸钠溶液0.2 mL注入各组大鼠右后足内踝的胫跗关节腔内，每只动物仅注射1次。针头探及关节囊有落空感为度，注射完成后观察胫跗关节腔肿胀情况。

1.3 处理方法 造模成功5 h后开始用药，分别于24、30 h换药治疗。模型组：只造模不治疗。雷公藤高剂量组：予雷公藤方药（组成：制川乌、雷公藤、细辛、山慈菇、、冰片、石膏）生药浓度18.51 g/kg，外用。雷公藤低剂量组：予雷公藤方药（组成：制川乌、雷公藤、细辛、山慈菇、冰片、石膏）生药浓度6.17 g/kg，外用。青风藤高剂量组：予青风藤方药（组成：制川乌、细辛、山慈菇、青风藤、冰片、石膏）生药浓度20.05 g/kg，外用。青风藤低剂量组：予青风藤方药（组成：制川乌、细辛、山慈菇、青风藤、冰片、石膏）生药浓度6.682 g/kg，外用。扶他林对照组：予扶他林乳胶剂（外用双氯芬酸二乙胺乳胶剂，20 g/支，北京诺华制药有限公司生产）6.682 g/kg，外用。

1.4 检测指标 分别用足趾容积测量仪、游标卡尺和皮尺（所用皮尺的宽度是6 mm，最小刻度是0.5 mm）测量各组大鼠左右后足踝关节下0.5 mm处的足趾容积、直径和周长值。造模前测量左右足踝作为0 h测量值，造模后5、24、30、48 h分别测量大鼠足踝的周长值和直径以及足趾容积。观察右后足（造模侧）关节炎各时间点肿胀度，肿胀度计算公式：肿胀率 （%）=（Vt-Vn）/Vn×100%，Vn、Vt分别代表致炎前后足趾容积值（周长法及直径法与所测周长、直径计算公式同上）。

1.5 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件。计量资料以（）表示。显著性检验先采用重复测量的方差分析，采用非配对t检验进行组间比较。多组间均数比较用单因素方差分析，组内前后比较采用配对t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组足趾肿胀度比较 见表1。雷公藤高剂量组及扶他林对照组与模型组同时段比较，踝关节关节肿胀度明显小于模型组（P＜0.05或0.01）。

表1 各组足趾肿胀率（%，）

表1 各组足趾肿胀率（%，）

与模型组同时段比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

2.2 各组关节直径增加比 见表2。雷公藤高剂量组及扶他林对照组踝关节直径增加比明显小于模型组（P<0.05）。

表2 各组关节直径增加比（%，）

表2 各组关节直径增加比（%，）

2.3 各组关节周长增加比 见表3。各组造模后踝关节周长增加比明显高于造模前（P<0.05），提示造模成功。用药后，雷公藤高剂量组及扶他林对照组踝关节周长增加比明显小于模型组（P<0.05）。

表3 各组关节周长增加比（%，）

表3 各组关节周长增加比（%，）

3 讨 论

大鼠痛风急性期造模后局部肿胀，通过预实验持续对大鼠的局部肿胀度进行测量，急性期的痛风性关节炎在造模后24 h最为明显，在48 h后开始逐步消退，为了便于观察局部用药肿胀度的消退，笔者对大鼠局部进行持续敷贴给药，预实验时采用多种方法进行观察，例如自制小夹板、使用橡皮套，但是均不便于局部给药的剂量控制且容易脱落。最终选用防水性胶布粘好且大小均一的医用干棉球固定于大鼠造模侧，再用去针头的5 mL注射器给干棉球处注入适量的煎煮液，以棉球没有浸出药液为度达到观察目的。

上述结果说明，外用药治疗痛风性关节炎的疗效观察仅采用一种方法的测量是不够的，应多种方法联合，且实施全程监测，但是考虑到测量步骤烦琐，所以应该寻求最佳的测量组合以提高实验效率。足趾容积测量法因为其操作简便且能准确读取测量值，在关节肿胀度的测量中应予以优先考虑。周长法能测量出关节肿胀处的周长，但是当测量对象过多时，不能保证每次测量都在同一位置，所以叠加起来误差较大。直径法也同样面临上述问题。因直径法只反映局部肿胀度，测量值较小、误差大，为减小误差常需多点测量，不够简便。

综上所述，关节肿胀度检测方法很多，如容积法、直径法、周长法、质量测定等。造模的注射部位选取需准确，保证关节的肿胀主要局限在大鼠的同一部位，同时对肿胀度的评测需要多种方法的联用，综合分析。其中足趾容积测量法和周长测量法是最优联用组合，容积法测定过程中需保证大鼠每次浸入水中同一位置，这个是容积法测量的关键所在。传统中西药内服对急性痛风性关节炎有良好的消炎止痛作用，但其不良反应大，其中胃肠道反应发生率高达80%［3］。有关中药外用评估关节肿胀的报道很少，本观察通过多种方法联用来评价痛风性关节炎的关节肿胀度，进一步验证了在中药外用评价痛风性关节炎大鼠肿胀度过程中，容积法能很好测量整个关节肿胀度，而周长和直径法能更好评价局部肿胀。因此，多种方法联用为中药外用评价关节肿胀有一定的参考意义。

［1］Coderre TJ，Wall PD.Ankle joint urate arthritis in rats：an alternative animal model of arthritis to that produced by Freund's adjuvant［J］.Pain，1987，28：379-393.

［2］陈文照，关士良，顾瑞生，等.防己黄芪乌苡汤对急性痛风外周神经递质的影响［J］.中国医药学报，1997，12（4）：25-26.

［3］刘湘源.表格式临床医学系列丛书：风湿病分册［M］.北京：中国医药科技出版社，2001：202，206-207.