藏药前列宁胶囊中没食子酸的含量测定

陈海莲 杜连平 王金霞 贺世娟

(青海阿如拉藏医药研究开发有限公司，青海 西宁 810003)

藏药前列宁胶囊由菥蓂子、石韦、蒲公英、刺柏、诃子、刀豆等13味中药组成，具有清热解毒，化瘀通淋等功效，用于热毒瘀阻所引起的尿频、尿急、尿痛属中医淋证者。本文采用高效液相色谱法，测定了前列宁胶囊中没食子酸含量，方法简便、快速，灵敏度高，结果准确。

1 仪器与试药

LC－10AT高效液相色谱仪;SPD－M10A vp型紫外检测器;CLASS－VP工作站;电子天平;没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所提供，纯度99%以上，供含量测定用，批号110831－200302);甲醇、四氢呋喃为色谱纯，水为重蒸馏水;其余试剂为分析纯。前列宁胶囊 批号为:20110216。

2 试验方法与结果

2.1 分析溶液的制备

2.1.1 对照品溶液制备:精密称取没食子酸对照品0.0109g，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取上述没食子酸溶液1mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL含没食子酸21.8μg)。

2.1.2 供试品溶液制备:取本品装量差异项下的内容物，混匀，取1g，精密称定，加甲醇30mL，超声处理60min，滤过，用少量甲醇分次洗涤滤渣及滤器，洗液并入滤液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，取上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品溶液。

2.1.3 阴性对照液的制备:按处方比例称取除诃子以外的其他药材适量，依照前列宁胶囊的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制得阴性对照溶液。

2.2 分析方法学验证

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验:色谱柱:Shim－pack C18柱(150×4.6mm)。流动相:甲醇－四氢呋喃－冰乙酸－水(0.08:0.64:2:97.28)为流动相。检测波长:273nm;柱温:35℃;流速为1mL/min。理论板数按没食子酸峰计算不低于1500。

2.2.2 阴性干扰实验:按照处方比例，取除去诃子的阴性样品溶液，按样品测试条件进行测定，结果阴性样品在与对照品色谱峰相应的位置上无吸收峰。说明处方中其它成分对测定结果无影响(见图1)，专属性好。

图1 :阴性干扰实验液相色谱图(上:没食子酸对照品图谱中:前列宁胶囊样品图谱下:前列宁胶囊阴性对中样品图谱)

2.2.3 线性范围考察:分别精密吸取没食子酸对照品溶液4、8、12、16、20μL 注入液相色谱仪，在上述色谱条件下，测定峰面积积分值，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。根据上述测定数据，求得回归方程:没食子酸:Y=67562X －2963 r=0.999，表明没食子酸在 0.0872 ～0.436μg之间进样量与峰面积呈良好线性关系。结果见表1。

表1 线性关系考察

2.2.4 精密度试验:精密吸取没食子酸对照品溶液10μL，连续进样5次，测得没食子酸峰面积积分值，结果见表2。

表2 精密度试验

2.2.5 重现性试验:按拟定的含量测定方法，取同一批号(20110216)的样品5份，按2.1.2项下方法制成供试品溶液，在上述色谱条件下测定，计算没食子酸的含量，结果见表3。

表3 重现性试验

2.2.6 稳定性试验:精密吸取没食子酸对照品溶液及同一供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，每隔一定的时间测定各峰面积值，结果见表4。表明没食子酸及供试品溶液均在8h内以没食子酸峰面积积分值稳定。

表4 稳定性试验

2.2.7 加样回收试验:精密称取已知没食子酸含量的样品3份(批号20110216，没食子酸含量0.20mg/粒)适量，分别加入3种不同量的没食子酸对照品，挥去溶剂后按2.1.2项下的方法制成供试品溶液，并按上述色谱条件测定没食子酸的含量，计算回收率，结果见表5。

表5 加样回收试验结果

2.2.8 样品测定:取3个批号的样品，按2.1.2项下的方法制成供试品溶液，精密吸取该溶液10μL，注入液相色谱仪按上述色谱条件测定，计算没食子酸的含量，测定结果见表6。

表6 样品测定结果

3 讨论

曾采用乙腈 －0.01 mol/L 磷酸溶液(5∶100)［1］、甲醇－0.1%磷酸(6:94)［2］为流动相，结果分离效果欠佳，分离度不好。经实验确定采用以甲醇－四氢呋喃－冰醋酸－水(0.08:0.64:2:97.28)为流动相，结果显示，此流动相分离度好，阴性无干扰。曾采用HPLC法对方中诃子中的β－谷甾醇［3］的含量进行测定，结果发现，有干扰，最终确定了以甲醇 －四氢呋喃 －冰醋酸 － 水(0.08:0.64:2:97.28)为流动相测定没食子酸的含量，结果分离度好、方法准确快速能够有效控制制剂的质量。

［1］孙立立，江波，袁振海，等.HPLC测定地榆饮片中没食子酸的含量［J］.中成药，2006，(8);57 －60.

［2］聂少平，王远兴，谢明勇，等.高效液相色谱法测定猴耳环消炎胶囊中没食子酸的含量［J］.实用中西医结合临床，2003，(2);3 －4.

［3］付煜莱，张万明，陈桂敏，等.景天三七中没食子酸和总酚酸含量测定［J］.中成药，2006，(7):85－87.