隔离器饲育SPF鸡微生物质量控制方法的建立

吴韬奋，张瑞忠、2，孙凤萍，王佳乐

(1.上海斯莱克实验动物有限公司，上海 201615;2.中国科学院上海实验动物中心，上海 201615;3.上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海 201106)

SPF鸡是生物医学研究及生物制品生产的重要支撑条件，其质量直接关系到上述各方面研究成果及产品的可靠性及准确性［1］。我国自20世纪80年代引进 SPF鸡群以来，已成功建立了 SPF种鸡群［2］，但绝大多数是在屏障系统中饲养，在 SPF隔离器中饲养国内还少有报道。本文介绍了我们从中国农业科学院哈尔滨兽医研究所引进SPF种蛋，建立了隔离器环境内饲育SPF鸡的技术，探讨了在隔离器环境中饲育SPF鸡的饲养管理中微生物质量控制的方法。

1 材料和方法

1.1 实验动物

SPF鸡种蛋来源于中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，在本中心孵化后作为 SPF鸡种群进行繁育。

1.2 主要设备

SPF鸡隔离器购自苏州冯氏实验动物设备有限公司，9WF系列孵化器购自无锡万利畜牧机械有限公司。

1.3 SPF鸡的饲养管理

1.3.1 SPF鸡隔离器的消毒 在隔离器安装使用前，首先检查隔离器的密闭性以及隔离器电器元件是否能够正常使用。确认后，先使用泡腾片(有效成分为三氯异氰尿酸)溶液将隔离器内外擦拭2次，以去除包体内外灰尘及做到初步消毒的目的，再使用2%过氧乙酸溶液进行喷雾灭菌并安装高效过滤器，放置24 h后，通风吹干。最后以60 mL/m3甲醛加30 g/m3高锰酸钾的比例进行隔离器内部熏蒸，放置24 h后，通风两天留用。

1.3.2 SPF种蛋的孵化 孵化机用福尔马林熏蒸消毒，置于SPF屏障系统内。将 SPF鸡种蛋熏蒸消毒后进行孵化。孵化机温度设定为37.8℃，相对湿度设定为60%，每隔2 h自动翻蛋一次。孵化第5日龄进行第一次照蛋，10日龄进行第2次照蛋，排除无精蛋、死精蛋及死胎蛋，并做好记录。18日龄落盘，出雏器温度设定为37.5℃，相对湿度为65%。21日龄出雏。

1.3.3 SPF日常饲养管理 将岀雏的种鸡通过无菌传递箱传入消毒完毕的鸡隔离器中进行饲养，种鸡在隔离器中以放养方式饲养。传入隔离器的雏鸡应先让其饮水，48 h内开始喂食0～8周龄的育雏期饲料。由于刚孵化的幼雏对环境极为敏感，需要严格控制隔离器中的温湿度、光照等各种环境指标。出雏后第一周温度应控制在34～35℃，以后每周下降3℃，直至20～25℃;湿度第 1周应控制在65%以上，第2周则可降至60%;光照1～3 d应保持每天24 h光照时间，以后每2天减少1 h，直至减至每天14 h。在雏鸡养至8～10日龄进行断喙，一般需断去喙端至鼻孔段的2/3。注意在断喙后适量补充VK。9～20周为鸡的育成期，此阶段的重点应使雏鸡体格得到充分的发育，对育成鸡采用一定程度的限制饲养及人工光照。营养方面，前两周可仍饲喂雏鸡料，但可在雏鸡料中掺入一定的育成期料，并且随时间逐步加大育成期料的比例。光照则应保持每天8 h。21周至65周为鸡的产蛋期。一般SPF鸡于22周龄左右开产，需要在21周开始饲喂产蛋期饲料，并且在19周龄开始逐渐延长光照时间，以第一周延长1 h，然后每周延长0.5 h，最终增加到 16 h/d 为止［3］。

日常饲养管理中对进入隔离器物品遵循能通过高压灭菌的物品都均以高压锅121℃，30 min进行消毒灭菌后方能传入隔离器中使用;不耐高温高压的物品用2%过氧乙酸溶液喷雾或使用熏蒸方法进行消毒灭菌后方能传入［4，5］。

饲养人员在操作隔离器前应更换干净的工作制服，手部清洗消毒。检测隔离器是否有破损、漏气。每日使用低浓度消毒剂擦拭隔离器外部并定期对隔离器存放房间喷洒消毒。由于SPF鸡在隔离器中以放养方式饲养，隔离器内部比较脏乱，每日也需用低浓度消毒剂擦拭隔离器内部。

1.3.4 SPF鸡的微生物监测 种鸡饲养至10周龄、20周龄与40周龄时全种鸡采血进行检测。用一次性注射器从鸡翅膀内测静脉采血2 mL，血样经过离心(4℃、12 000 g、15 min)后，将离心后所得的血清样本委托由上海实验动物研究中心和上海农业科学院畜牧兽医研究所进行检测。SPF鸡的微生物检测项目按国标［GB/T 17999.1-2008 SPF鸡微生物学监测］中“SPF鸡的生物学监测项目”进行检测，具体项目如下:鸡白痢沙门氏菌(salmonella pullorum)， 副 鸡 嗜 血 杆 菌 (haemophilus paragallinarum)，多杀性巴氏杆菌(pasteurella multocida)，鸡毒支原体(mycoplasma gallisepticum)，滑液囊支原体(mycoplasma synoviae)，禽流感病毒(avian influenza virus)，新城疫病毒(newcastle disease virus)，传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus)，传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus)，传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus)，淋巴白血病病毒(lymphatic leukemia virus)，网状内皮增生症病毒(reticuloendotheliosis virus)，马立克氏病毒(marek’s disease virus)，鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus)，禽呼肠弧病毒(avian reovirus)，禽脑脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus)，禽腺病毒Ⅰ群(avian adenoviruses groupⅠ)，禽腺病毒Ⅲ群(avian adenoviruses groupⅢ)，禽痘病毒(fowl Pox virus)。

2 结果

SPF鸡微生物检测结果状况见表1。

表1中组别1种蛋引自哈尔滨兽医研究所，经孵化后，传入隔离器中进行饲养，其所产种蛋即为组别2种蛋。组别3种蛋重新引自哈尔滨兽医研究所，组别4为其后代，组别5为组别4后代，组别6为组别5后代，组别7为组别6后代。

由于组别1种鸡饲育的微生物控制比较成功，因此组别2种蛋孵化过程中，由于思想上麻痹大意，简单认为单位所在地非禽类传染病疫区，且附近无禽类生产企业，要控制SPF鸡微生物状况是比较容易的，而未对孵化环境彻底消毒，同时也未严格控制人员及物品的消毒灭菌，结果造成组别2种鸡污染，其10周检测就发现大量种鸡血清样本呈阳性。组别2种鸡亦随即淘汰。有组别2微生物污染的教训，重新引种后严格控制孵化及饲养管理每一环节，严格控制人员进出及物品消毒，组别3及其后代的检测均未发现微生物污染。组别6及组别7后期因课题结题，未能进行微生物检测。

3 讨论

孵化器在SPF种蛋孵化前需经福尔马林熏蒸消毒后才能使用。但在操作过程中，我们发现雏鸡出雏时，雏鸡身上的绒毛在孵化器内四处飞散，绒毛常常粘付在孵化器的各个角落。而孵化器内部结构复杂，死角较多，一般很难将绒毛去除干净，这样就容易造成孵化器消毒不彻底。因此我们在种蛋孵化前，先将孵化器内死角较多的部分(诸如电脑主控板)彻底密封，而在雏鸡出雏后，孵化器内外部也应用低浓度消毒剂擦拭2遍以上。

SPF鸡隔离器的消毒比起大小鼠隔离器的消毒不仅存在更多的死角，而且经饲养后的隔离器内，鸡饲养过程中所产生的污物很容易粘付在死角上，即使全面清理也很难去除。而不清理干净又容易造成消毒灭菌不彻底。因此我们采用在熏蒸前用2%过氧乙酸溶液进行喷雾消毒，利用高压气泵进行喷雾，其喷雾的气压较大，易将死角内粘付的颗粒清除，同时起到清洗消毒的作用。

原定每个隔离器饲养20羽种鸡，但饲养过程中发现因空间较小，鸡群打斗、互啄现象时有发生，并且由于密度过高，饲养清洁卫生难以控制，环境中尘埃物质较多，造成高效过滤器易堵塞。同时母鸡产蛋后，其种蛋较易被破坏不利于种蛋收集。组别3、4对其改进，每个隔离器饲养种鸡13羽，不仅环境清洁得到有效控制，而且环境中尘埃物明显减少，高效过滤器堵塞现象得到控制，换气次数得到保障，同时鸡群打斗现象明显好转，种蛋破损率也大幅下降;组别5、6、7由于课题需要将大部分种鸡移至屏障设施进行饲养，隔离器内只保持繁殖用种鸡，每个隔离器内种鸡控制在5羽，隔离器中环境进一步好转，鸡群打斗现象基本停止，种蛋破损率也进一步下降。说明控制饲养密度不仅有利于控制环境进而控制环境微生物状况，同时也有利于种鸡饲养及种蛋回收。

表1 SPF鸡饲养状况及微生物检测结果Tab.1 The rearing condition and results of microbiological testing from SPF chickens

饲料和水是SPF鸡微生物质量控制的一个重要因素。鸡在饮水及吃料时，常将粪便混入饮水器及料盒中，容易造成饮水及饲料的污染，需定期对饮水器及料槽进行清洗消毒。辐照饲料在传入隔离器前，需检验塑料包装袋的密封状况，一旦发现破损，应立即弃用。

通过对以上一系列的操作方法进行控制，我们在组别3后能够稳定的控制SPF鸡的微生物质量，説明这一系列在隔离器环境中饲育SPF鸡的微生物质量控制的方法是有效、可靠的。

［1］ 夏长友，魏炳泉，张玲．SPF鸡微生物质量控制方法探讨［J］．畜牧兽医科技信息，2005.12:41－42．

［2］ 秦卓明，王永华．SPF鸡生产及其开发意义［J］．中国禽业导刊，2001，18(7):6－8．

［3］ 夏长友，陈洪岩，南锡．BWEL-SPF种鸡在隔离器中的培育和管理［J］．中国比较医学杂志 2003，13(6)377－380．

［4］ 秦卓明，张世东，徐怀英，等．SPF鸡管理中的核心消毒灭菌技术(上)［J］．山东家禽 2003.11:26－30．

［5］ 秦卓明，张世东，徐怀英，等．SPF鸡管理中的核心消毒灭菌技术(下)［J］．山东家禽 2003.12:24－25．