149例灌洗液结核菌耐药基因芯片检查结果分析

庞玉林，秦桂香

（长春市传染病院，吉林 长春130123）

结核菌快速耐药基因芯片检查是近年来新开展的结核诊断技术，可以直接进行分枝杆菌属鉴定及耐药性分析，适用于不同类型标本，具有简便、快速、灵敏度高和特异度高等优点［1］。但多数使用痰标本行此项检查，且多使用结核菌涂片阳性标本进行检查。对于无痰或者少痰，且需要明确诊断的患者此项检查则受到限制。我院于2012年4月－2013年2月尝试使用支气管肺泡灌洗液作为标本做结核菌耐药基因芯片检查，同时行经纤支镜肺活检。现回顾分析此期间149例有明确病理结果的支气管镜肺泡灌洗液耐药芯片检查结果，分析其临床诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 男78例，女71例，年龄在15－71岁，平均37.5岁，其中左上叶病变5例，左舌叶病变25例，左下叶病变34例，右上叶病变12例，右中叶病变30例，右下叶病变43例。

1.2 方法

按常规进行有关术前检查，用2%利多卡因雾化吸入15分钟后试用OLYMPUS P60纤维支气管镜插入，逐步检查，在肺CT显示肺内病变的叶或者段支气管开口注入生理盐水，每次20毫升，3－4次，收集灌洗液，至少需收集20毫升灌洗液。然后根据情况行肺活检。

结核菌快速耐药基因芯片试剂盒购自北京博奥生物有限公司，GCT检测结核分枝杆菌 收集临床标本，提取核酸、PCR扩增、芯片杂交以及结果判读等按北京博奥生物有限公司提供的标准操作说明进行。收集到的灌洗液用15，000转离心10分钟后去掉上清液。各项检查严格按照检查程序进行检测。

2 结果

149例患者中经病理结果确诊肺结核70例，支气管结核62例，肺癌17例。耐药芯片诊断肺结核68例，敏感性97.14%，特异性100%；耐药芯片诊断支气管结核50例，敏感性80.65%，特异性100%；17例肺癌样本耐药芯片检测结核均阴性；总体诊断符合率90.60%。

表1 耐药芯片检测肺结核、支气管结核及肺炎的敏感性及特异性

149例患者的耐药芯片与病理诊断行比较，共符合者135例（90.60%）；两种诊断结果存在一致性，Kappa值为0.849（P＜0.05），可以认为两种诊断方法一致性较高。

表2 耐药芯片与病理诊断肺结核、支气管结核及肺炎比较

3 讨论

近年来结核病疫情呈现重新上升的趋势，已经成为传染病中的第一号杀手和最大的死亡病因。由于抗结核药物的不规范治疗，患者体内的结核杆菌对多种抗结核药物发生耐药，从而形成耐多药结核病，这是结核病疫情重新上升的最主要原因之一［2］。肺结核诊断主要依赖于痰标本中查到分枝杆菌，对于结核病人标本，其结核分枝杆菌的检出结果受多种因素限制：包括病理状况，例如结核病变性质、病变严重程度、病变是封闭或开放的、病变排出的菌量及排出的间歇时间；结核分枝杆菌状态，例如代谢及繁殖是否旺盛、是否处于休眠状态，细菌形态多样性等因素［3］，导致大多数为菌阴肺结核患者；另外由于部分体检时发现肺内阴影患者全身症状及呼吸道症状轻微或者无症状，患者无痰或者少痰，难以使用痰标本做出早期诊断及鉴别诊断。根据中华医学会结核病学分会《肺结核诊断和治疗指南》，支气管或肺部组织病理检查证实为结核性改变为菌阴肺结核诊断的主要指标，但经纤支镜肺活检的病理阳性率也受限于肺内病灶位置、大小，也存在局限性，而纤支镜肺泡灌洗液则扩大了检查范围，肺内各叶段均可行肺泡灌洗。我院尝试使用有明确病理结果的支气管肺泡灌洗液行耐药基因芯片检查，结果显示特异性为100%，未发现假阳性，敏感性较高，对于肺结核的诊断有明确的临床意义，同时阳性结果做耐利福平基因rpoB及耐异烟肼katG基因、inhA基因检测，对肺结核患者的治疗有指导意义。

假阴性的原因主要考虑灌洗液中存在干扰固相杂交的物质，其次考虑同肺泡灌洗的手法、灌洗液的回收等因素导致灌洗液中结核菌DNA含量少［4］，影响检查结果。支气管结核肺泡灌洗液敏感性低于肺结核，原因考虑同支气管结核多造成管腔狭窄，灌洗液进入肺泡量少，回收困难，部分为支气管冲洗液，影响检查结果。周扬等对基因芯片诊断耐多药结核病的临床多中心研究认为与传统绝对浓度法药敏结果比较仍存在一定差异，不能完全取代，但仍认为基因芯片法在临床耐药结核病的诊断中有广阔的应用前景，与传统药敏方法结合将为临床工作提供更可靠的依据［5］。

支气管肺泡灌洗液结核菌快速耐药基因芯片检查，敏感性、特异性均较高，无假阳性，同时可做利福平、异烟肼的耐药基因测定，在一周内出结果，对肺结核患者的诊断、指导治疗均有意义，值得推广。

［1］唐神结.结核病临床诊治进展年度报告（2011）.北京：人民卫生出版社，2012.6：40－41.

［2］姚春艳，张立群，府伟灵，等.应用基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐药基因［J］.中华医院感染学杂志，2010，20（11）：1501.

［3］康丽军，洪 峰.结核／非结核分枝杆菌核酸快速检测方法临床应用价值［J］.中国防痨杂志，2011，33（5）：263.

［4］唐神结，高 文.现代结核病学［M］.北京：人民卫生出版社，2011.7：99.

［5］周 扬，欧喜超，等.基因芯片诊断耐多药结核病的临床多中心研究［J］.临床微生物学，2011，34（9）：793.