岗梅感冒灵颗粒流浸膏药效学研究*

黄际薇，张永明，江先合，池傲雪，董桂玉

(1.中山大学附属第三医院，广东广州 510630;2.广东药学院，广东广州 510006）

尽管医学有了巨大进步，但普通感冒仍然是现代社会使人们遭受疾病痛苦和经济损失的重要因素［1］。流行性感冒是一种急性呼吸道传染病，具有高发病率和高病死率的流行病学特点［2］。据报道美国一年大约10亿人患过感冒，每年因患流感病毒感染看医生的次数可达到2000～2500万人次，有36000人因患感冒而死亡［3］。普通感冒以及上呼吸道感染，平均每年每个儿童有6～8次感冒，成人有2～4次［4］，是最常见的内科门诊患者就诊原因之一，通常由病毒引起，临床上主要根据症状(如鼻塞、喉咙痛、头痛、咳嗽、发烧、呼吸道感染等［1］)进行治疗，抗生素对儿童和成人普通感冒疗效欠佳，某些中成药或中药 (如板蓝根等)可改善成人感冒症状，有助于预防和治疗这些疾病［3，5］。

岗梅感冒灵颗粒是中山大学附属第三医院研制的中药复方制剂，由岗梅、板蓝根、野菊花、三桠苦、鬼针草、甘草等六味药材制成，具有清热解毒、疏风降火的功效，临床用于感冒、流行性感冒及上呼吸道感染，疗效显著。方中岗梅根具有清热解毒，生津活血的功效，主治感冒、头痛、热病燥渴、喉痛等［6］;三桠苦清热解毒，祛风除湿，主治咽喉肿痛等［6］;鬼针草清热解毒，散瘀消肿，主治咽喉肿痛等［6］;野菊花具有疏风清热，消肿解毒，抗病毒、抗菌的作用，主治风热感冒、肺炎等［6］，常用于上呼吸道感染、扁桃体炎等［7］;板蓝根清热解毒，凉血利咽，用于发热咽痛等［8］;甘草清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药，用于咳嗽痰多，四肢挛急疼痛等［8］。微生物学研究证明岗梅感冒灵颗粒对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有不同程度的抑菌作用［9］，但迄今为止，尚未有文献报到有关岗梅感冒灵颗粒动物实验研究，本实验首次利用大、小鼠药理学模型来探讨与岗梅感冒灵颗粒功能主治有关的抗炎、镇痛、解热等药效学研究，旨在为岗梅感冒灵颗粒的开发应用提供科学的实验依据。

1 实验动物与材料

1.1 实验动物

实验动物:昆明 (KM)种小鼠，体质量 (20±2)g，雌雄不限，由中山大学实验动物中心提供，SPF级，动物质量合格证号:4408500696、4408500963、4408501048、4408501101。SD 大鼠，体质量 (200±20)g，雌雄不限，由中山大学实验动物中心提供，SPF级，动物质量合格证号:4408500696。昆明 (KM)种小鼠、SD大鼠分笼，普通饲料喂养，自由饮水。

1.2 实验材料

电子分析天平 (瑞士Precisa);电子天平 (梅特勒AB104-S);UV-1601紫外分光光度计 (澳大利亚);Eppendorf高速冷冻离心机 (德国)。

2，4-二硝基苯酚 (东方化工厂);伊文斯蓝(上海生物工程有限公司);阿司匹林肠溶片，0.1 g/片，北京拜耳医药保健有限公司生产，批号:BJ09035;醋酸泼尼松片5 mg/片，天津天药药业股份有限公司生产，批号: 121136;冰醋酸:500 mL/瓶，台山新宁制药有限公司，批号: 20101007;w=0.9%氯化钠注射液:500 mL/瓶，江西科伦药业有限公司生产，批号:A121022E;φ=75%乙醇、纯净水由中山大学附属第三医院制剂室提供，其他试剂均为分析纯。

岗梅感冒灵颗粒流浸膏:规格7.62 g/mL(以生药质量计)，批号为20121107，由中山大学附属第三医院制剂室提供。

2 实验方法与结果

2.1 统计学处理

2.2 小鼠毒性实验

按文献 ［10］进行小鼠的毒性实验。选取体质量为 (20±2)g健康昆明种 (KM)小鼠20只，雌雄各半，按性别和体质量随机分为两组，即生理盐水组10只，给药组10只。实验前1晚禁食不禁水，12 h后，给药组按岗梅感冒灵颗粒流浸膏浓缩到最大质量分数但还能流动的剂量，即670 g/kg(以生药质量计)，40 mL/kg［相当于成人日剂量21.83 g/70 kg(以生药质量计)的80倍］灌胃(ig)给药，生理盐水组灌服等体积生理盐水，每日给药1次，连续给药7 d，进行毒性实验观察。各组灌胃给药后，正常饲养，药后2 h之内，每15 min观察1次;给药后2～4 h内，每30 min观察1次;给药后4～8 h之内，每1 h观察1次;给药后8～24 h内，每4 h观察1次;给药后第2天起，每天观察1次，称取小鼠体质量，密切观察各小鼠的活动度、进食、饮水情况及7 d内可能出现的活动度、异常肌肉运动、对外反应、瞳孔改变、异常分泌物、大小便异常、眼球突出、眼睑下垂、呼吸异常、皮肤颜色改变等毒性反应和死亡情况。若有小鼠死亡，则将死亡小鼠解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠等脏器的改变。7 d观察结束后，将每组存活小鼠处死进行解剖，按照上述方法对主要脏器大体病理变化进行肉眼观察。

小鼠毒性症状观察及体质量变化情况:小鼠给药后活动减少、安静，继而小鼠出现俯卧昏睡、呼吸急促、抽搐等。小鼠全部存活。给药后30 min后动物活动、饮食、饮水恢复正常;大多于72 h后开始体质量减轻，大便颜色变深，硬度变软，水分含量增加。小鼠处死后解剖，肉眼下观察重要脏器均未见异常。

2.3 解热作用

按文献 ［10］进行大鼠的解热作用实验。选取体质量为 (200±20)g，肛温值介于36.6～38.3℃ SD大鼠60只，雌雄各半，随机分为6组:第1组生理盐水组，第2组模型组，第3组阿司匹林100 mg/kg组，第4－6组岗梅感冒灵颗粒流浸膏低［6.04 g/kg(以生药质量计)，相当于成人日剂量］、中 ［36.23 g/kg(以生药质量计)，相当于成人日剂量的6倍］、高 ［217.39 g/kg(以生药质量计)，相当于成人日剂量的36倍］剂量组。给药前一天上、下午用体温计测量大鼠正常肛温，实验当天注射2，4－二硝基苯酚前测1次肛温，取3次测量的肛温平均值作为正常肛温。生理盐水组与模型组按15 mL/kg给生理盐水，其他各组按同体积分别给药，灌服药物或生理盐水0.5 h后，第1组皮下注射1 mL生理盐水，第2－6组于大鼠背部按24 mg/kg皮下注射2，4－二硝基苯酚，之后每间隔30 min测肛温1次，连测6次。结果见表1，以注射2，4－二硝基苯酚致热前后的肛温改变值作为温度变化指标，各组大鼠注射2，4－二硝基苯酚后30 min体温立即上升，2 h后阿司匹林组体温上升辐度逐渐减弱，1 h后岗梅感冒灵颗粒流浸膏各剂量组的大鼠体温升高受到不同程度的抑制，低剂量组给药后1～2 h与模型组比较肛温降低显著。

表1 岗梅感冒灵颗粒流浸膏对2，4－二硝基苯酚致热大鼠体温的影响(，n=10)Table 1 Influences of Gangmei Ganmaoling granule fluid extract on the body temperature in fevered rats induced by 2，4-dinitrophenol(，n=10)

表1 岗梅感冒灵颗粒流浸膏对2，4－二硝基苯酚致热大鼠体温的影响(，n=10)Table 1 Influences of Gangmei Ganmaoling granule fluid extract on the body temperature in fevered rats induced by 2，4-dinitrophenol(，n=10)

t检验，与模型组比较，*P＜0.05;＊＊P＜0.01

0.5 h 1 h 1.5 h 2 h 2.5 h 3 h生理盐水组 37.93±0.25 －0.20±0.15＊＊ －0.30±0.16＊＊ －0.31±0.15＊＊ －0.40±0.16＊＊ －0.28±0.27＊＊ －0.36±0.17组别 致热前肛温/℃ 致热后肛温改变值/℃＊＊12±1.16 0.21±0.98 0.20±0.94模型组 37.08±0.83 0.58±1.13 0.49±0.95 0.26±0.94 0.31±0.93 0.21±0.80 0.19±0.92阿司匹林组 37.48±0.92 0.14±0.78 0.12±1.01 0.13±1.14 0.07±1.32 －0.16±1.13＊＊ －0.07±0.84*低剂量组 37.48±0.66 0.14±1.10 －0.11±1.19＊＊ －0.06±1.31* －0.03±1.16* 0.06±0.91 0.16±0.80中剂量组 37.50±0.55 0.35±0.68 0.05±0.95 0.08±0.87 －0.02±0.88* 0.13±0.64 0.12±0.63高剂量组 37.41±0.77 0.35±0.77 0.31±1.15 0.21±1.15 0.

2.4 抗炎作用

2.4.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 按文献［10］进行二甲苯致小鼠耳肿胀的实验。选取体质量为 (20±2)g健康KM小鼠60只，雌雄各半，随机分为5组，每组12只，分别为:生理盐水组、岗梅感冒灵颗粒流浸膏低 ［(8.51 g/kg(以生药质量计)，相当于成人日剂量)］、中 ［(85.05 g/kg(以生药质量计)，相当于成人日剂量10倍)］、高剂量组 ［(670 g/kg(以生药质量计)，相当于成人日剂量80倍)］、醋酸泼尼松组5 mg/kg。各组均按40 mL/kg灌胃 (ig)给药，每天1次，连续7 d，末次给药1 h后，分别在小鼠右耳的前后两面滴涂二甲苯0.02 mL/只致炎，左耳作对照。致炎30 min后，小鼠右耳皮肤发红并肿胀，脱颈椎处死小鼠，沿小鼠耳际剪下左右二耳，用直径6 mm的打孔器在左右耳对称部位分别打一圆形耳片，称其左右二耳片质量，记录结果，计算小鼠耳部炎症的肿胀程度和肿胀抑制率，肿胀度=右耳片质量－左耳片质量，抑制率=［(生理盐水组平均肿胀度－给药组平均肿胀度)/生理盐水组平均肿胀度］×100%。结果见表2，与生理盐水组比较，醋酸泼尼松组对小鼠耳肿胀的抑制作用极为显著 (P＜0.01)，岗梅感冒灵颗粒流浸膏各给药组均有一定的抑制作用。

表2 岗梅感冒灵颗粒流浸膏对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响()Table 2 Influences of Gangmei Ganmaoling granule fluid extract on the inflammatory swelling induced by xylene in ear of mice()

表2 岗梅感冒灵颗粒流浸膏对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响()Table 2 Influences of Gangmei Ganmaoling granule fluid extract on the inflammatory swelling induced by xylene in ear of mice()

t检验，与生理盐水组比较，＊＊ P＜0.01

/%生理盐水组组别 n 致炎后耳肿胀度 抑制率12 0.0019±0.0012 24.0012 0.0025±0.0014 －醋酸泼尼松组 12 0.00074±0.00053＊＊ 70.40低剂量组 12 0.0021±0.0017 16.00中剂量组 12 0.0020±0.0014 20.00高剂量组

2.4.2 对腹腔注射冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 按文献［11］进行冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的实验。选取体质量为 (20±2)g健康KM小鼠60只，雌雄各半，随机分为5组，每组12只，分别为:生理盐水组、岗梅感冒灵颗粒流浸膏低、中、高剂量组、醋酸泼尼松组5 mg/kg。服药剂量同上，每天1次，连续给药5 d。于末次给药后30 min，腹腔注射 (ip)φ=0.6%冰醋酸溶液，0.25 mL/只，30 min后各给药组小鼠均尾静脉注射 (iv)w=0.5%伊文思蓝生理盐水溶液10 mL/kg，20 min后脱颈椎处死小鼠，仰位固定小鼠，剪开小鼠腹部皮肤，将6 mL生理盐水注入腹膜内，轻揉小鼠腹部，自腹膜中央剪一小孔，用一次性塑料吸管吸取腹腔洗涤液4 mL至离心管中，加入生理盐水至10 mL，3000 r/min离心15 min;取上清液于578 nm比色 (生理盐水为空白对照)测定其光密度。结果见表3，与生理盐水组比较，岗梅感冒灵颗粒流浸膏高剂量组光密度值明显降低(P＜0.05)，醋酸泼尼松组、岗梅感冒灵颗粒流浸膏低、中剂量组光密度值有一定程度的降低。

表3 岗梅感冒灵颗粒流浸膏对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响()Table 3 Influences of Gangmei Ganmaoling granule fluid extract on the capillary permeability induced by glacial acetic acid in mice()

表3 岗梅感冒灵颗粒流浸膏对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响()Table 3 Influences of Gangmei Ganmaoling granule fluid extract on the capillary permeability induced by glacial acetic acid in mice()

t检验，与生理盐水组比较，*P＜0.05

组别n A 12 0.34±0.19醋酸泼尼松组 12 0.27±0.06低剂量组 12 0.31±0.06中剂量组 12 0.30±0.14高剂量组 12 0.23±0.08生理盐水组*

2.5 镇痛作用

2.5.1 热板法 按文献 ［10］进行小鼠热板的实验。测小鼠痛阈，将铝制容器置于恒温加热器(54±0.5)℃上，预热5 min，每次1只放在铝制容器上，小鼠自放在铝制容器上至出现舔足所需时间秒 (s)作为该鼠的痛阈值，凡舔足时间小于5 s或大于30 s弃之不用。选取体质量为 (20±2)g痛阈值合格的雌性KM小鼠60只，测两次正常痛阈，其平均值作为该鼠的药前痛阈。将60只小鼠随机分为5组，每组12只，分别为:生理盐水组、岗梅感冒灵颗粒流浸膏低、中、高剂量组、阿司匹林组0.2 g/kg。服药剂量同上，每天1次，连续给药5 d。末次给药后30 min时开始测定小鼠痛阈值，若60 s内无舔足反应立即取出，痛阈值按60 s计算，将给药前后小鼠的痛阈值差值进行比较。结果见表4，与生理盐水组比较，阿司匹林组、岗梅感冒灵颗粒流浸膏低剂量组小鼠痛阈值显著提高(P＜0.01)，岗梅感冒灵颗粒流浸膏中、高剂量组明显提高 (P＜0.05)。

表4 岗梅感冒灵颗粒流浸膏对小鼠热刺激痛阈的影响()Table 4 Influences of Gangmei Ganmaoling granule fluid extract on the pain threshold of temperature stimuli()

表4 岗梅感冒灵颗粒流浸膏对小鼠热刺激痛阈的影响()Table 4 Influences of Gangmei Ganmaoling granule fluid extract on the pain threshold of temperature stimuli()

t检验，与生理盐水组比较，*P＜0.05;＊＊ P＜0.01

/s生理盐水组组别 n 药前痛阈/s药后痛阈/s 差值12 7.77±2.528.46±3.44 0.69±1.51阿司匹林组 12 8.67±1.7714.11±3.735.44±3.50＊＊低剂量组 12 8.75±3.7814.70±4.994.24±4.77＊＊中剂量组 12 8.59±4.1411.36±4.51 2.77±1.78*高剂量组 12 8.80±3.5011.37±4.32 2.57±3.01*

2.5.2 冰醋酸致小鼠扭体法 按文献 ［10］进行小鼠扭体的实验。选取体质量为 (20±2)g健康KM小鼠60只，雌雄各半，随机分为5组，每组12只，分别为:生理盐水组、岗梅感冒灵颗粒流浸膏低、中、高剂量组、阿司匹林组0.2 g/kg。服药剂量同上，每天1次，连续给药5 d。于末次给药后30 min，各鼠腹腔注射φ=0.6%醋酸0.25 mL/只，观察记录出现扭体反应的潜伏期以及30 min内的扭体次数。结果见表5，对于冰醋酸诱发小鼠扭体反应，与生理盐水组比较，阿司匹林组极显著延长潜伏期和减少扭体反应次数 (P＜0.01)，岗梅感冒灵流浸膏低剂量组可显著延长潜伏期 (P＜0.05)和减少扭体反应次数 (P＜0.01)，高、中剂量组对小鼠腹腔注射冰醋酸所引起的扭体反应有一定的抑制作用。

表5 岗梅感冒灵颗粒流浸膏对冰醋酸诱发小鼠扭体反应的影响()Table 5 Influences of Gangmei Ganmaoling granule fluid extract on writhe induced by abdominal of glacial acetic acid()

表5 岗梅感冒灵颗粒流浸膏对冰醋酸诱发小鼠扭体反应的影响()Table 5 Influences of Gangmei Ganmaoling granule fluid extract on writhe induced by abdominal of glacial acetic acid()

t检验，与生理盐水组比较，*P＜0.05;＊＊ P＜0.01

扭体次数生理盐水组组别 n 潜伏期/s 12 6.48±4.26 33.50±17.0212 4.62±2.40 41.58±21.97阿司匹林组 12 12.54±4.98＊＊ 24±17.44＊＊低剂量组 12 10.24±8.84* 26.88±7.97＊＊中剂量组 12 5.11±1.46 32.16±13.76高剂量组

3 讨论

由于受给药容积限制，原制剂岗梅感冒灵颗粒无法达到实验所需要的浓度，故本实验采用了岗梅感冒灵颗粒流浸膏。

实验过程观察到，造模、服药后药效作用和毒性反应在大小鼠性别上存在差异，雌性鼠服药后抗炎、镇痛、解热等药效作用不如雄性鼠，而毒性反应却比雄性鼠明显，随着剂量加大表现更为突出，是否在人体性别上存在同样的差异，有待进一步研究证实。

据文献报道，中药剂量范围的区间 (上限－下限)和起点 (即下限)是反映该中药敏感度的关键量，越是敏感的中药，剂量区间越窄，起点越低，反之剂量区间越大，起点越高［12］。在一定的剂量范围之内，由于剂量的改变，中药组方疗效也会随之发生改变，剂量的增加，有时疗效会增加，但是也会出现相反的治疗效果［13］。本实验结果显示出，岗梅感冒灵颗粒流浸膏低剂量 (相当于成人日剂量)，解热、镇痛作用强过中、高剂量，剂量与药效不呈正相关关系;高剂量抗炎作用强过低、中剂量，剂量与药效呈正相关关系。

岗梅感冒灵颗粒的组方属于寒凉药，寒凉药的药理作用以抑制为主，对于病理性功能亢进的系统有多方面的抑制作用，从而起到改善临床症状的效果，如能使热证动物的热象减退，增强动物中枢抑制状态，提高痛阈值，还可通过抗菌、抗真菌、抗病毒、抗毒素、抗炎症、促进免疫等多种途径的综合作用，减少机体对病原微生物的反应，使过高的体温下降，产热减少，从而达到控制感染的效果［14］。

本研究根据岗梅感冒灵颗粒的功效与主治选用了急性毒性、抗炎、镇痛、解热等多个动物模型进行了药效学研究，结果显示岗梅感冒灵颗粒流浸膏可抑制2，4－二硝基苯酚引起的大鼠体温升高，抑制二甲苯致小鼠耳肿胀和冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加，显著提高热刺激痛阈值，使扭体潜伏期延长，扭体次数减少。研究结果表明，岗梅感冒灵颗粒流浸膏毒性低，具有确切的解热、抗炎、镇痛作用，是一安全有效的中药复方制剂。

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