胃癌组织中1，25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2蛋白的表达

陈 浩，许 浪

1)荆州市中心医院胃肠外科 荆州 434100 2)武汉科技大学医学院病理学教研室 武汉 430064

胃癌是消化道常见恶性肿瘤之一，在我国胃癌呈高发状态，每年新发病例占全球的40%[1]。1，25-二羟维生素D3既是一种维生素，也是一种类固醇激素，其通过与免疫细胞中的维生素D受体结合，特异性作用于靶组织而发挥作用，与多科疾病有关[2-3]。作为一种全新的抗肿瘤药物，1，25-二羟维生素D3在肺、乳腺、前列腺、结肠等肿瘤的化疗中有重要价值[4]。转化生长因子-β1 (transforming growth factor β1，TGF-β1)是一种多功能的细胞因子，其介导的TGF-β/Smads信号通路与多种肿瘤的发生及浸润转移密切相关。作者对胃癌组织中1，25-二羟维生素D3、TGF-β1及Smad2蛋白的表达进行了检测，初步探讨1，25-二羟维生素D3及TGF-β/Smads信号通路与胃癌的关系，以期为胃癌的治疗提供新的方向。

1 材料与方法

1.1标本收集荆州市中心医院病理实验室手术切除的冻存胃癌标本93例。患者年龄41～76(50.1±7.2)岁，其中男56例，女37例；按2010年WHO标准，高、中分化 53例，低分化和未分化40例；临床分期Ⅰ、Ⅱ期 41例，Ⅲ、Ⅳ期52例；未浸及浆膜层48例，浸及浆膜层45例；无淋巴结转移39例，有淋巴结转移54例。患者术前未进行任何放、化疗。另取30例正常胃黏膜组织作为对照。

1.2主要试剂与仪器1，25-二羟维生素D3免疫组化检测试剂盒购自上海研吉生物科技有限公司；TGF-β1及Smad2免疫组化检测试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司；FITC-IgG、兔抗人TGF-β1多克隆抗体、兔抗人Smad2多克隆抗体、PBS缓冲液均购自武汉博士德生物工程有限公司。M388834酶标仪购自西化仪北京科技有限公司。

1.3 1，25-二羟维生素D3、TGF-β1及Smad2蛋白的检测用免疫组化 SP 法检测。将组织标本常规石蜡包埋，4 μm厚切片，脱蜡水化，在EDTA缓冲液中修复，DAB显色，苏木素复染，中性树胶封固，镜下观察。细胞内出现棕黄色颗粒即为阳性细胞。每张切片观察5个以上视野(×400)，共计数500个细胞，计算阳性细胞百分数。按阳性细胞百分数评分，≤10%为 1分，>10%且≤50%为 2分，>50%且≤75%为3分，>75%为4分；同时根据染色程度评分，无染色为1分，弱染色为2分，中度染色为3分，强染色为4分。以两项分数的乘积表示目标蛋白表达水平[5]。

1.4统计学处理采用SPSS 15.0进行数据分析，胃癌与正常胃黏膜组织及不同临床病理特征胃癌组织中3种蛋白表达水平的比较采用两独立样本t检验，采用Pearson相关分析对胃癌组织中3种蛋白表达水平的关系进行分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1正常胃黏膜和胃癌组织中1，25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2的表达1，25-二羟维生素D3、TGF-β1阳性信号定位于胞质和胞核，为粗细不一的棕黄色深染颗粒；Smad2蛋白阳性信号主要位于胞质，少数位于胞核，为棕黄色深染颗粒，见图1。1，25-二羟维生素D3在胃癌组织中的表达水平低于正常胃黏膜组织，TGF-β1和Smad2在胃癌组织中的表达水平高于正常胃黏膜组织，见表1。

图1 正常胃黏膜和胃癌组织中1，25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2的表达(SP，×200)

2.2 1，25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2的表达与胃癌临床病理特征的关系1，25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2的表达与胃癌的分化程度、临床分期、浸润深度及淋巴结转移关系密切，见表2。

2.3胃癌组织中1，25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2表达的相关性经Pearson相关分析，胃癌组织中1，25-二羟维生素D3与TGF-β1、Smad2的表达呈负相关(r=-0.583、-0.462，P<0.001)，TGF-β1与Smad2的表达呈正相关(r=0.425，P<0.001)。

表1 正常胃黏膜和胃癌组织中1，25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2的表达

表2 1，25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2的表达与胃癌临床病理特征的关系

3 讨论

细胞内游离钙和需钙蛋白酶在细胞分化中起着重要作用。作为维生素D最主要的活性形式，1，25-二羟维生素D3在钙、磷代谢中起重要作用。因此1，25-二羟维生素D3可能与肿瘤的发生与分化转移密切相关。卢娟等[6]研究认为1，25-二羟维生素D3可明显抑制胃癌细胞分化，促进凋亡，从而发挥抗肿瘤作用。作者观察到，胃癌组织中1，25-二羟维生素D3的表达水平低于正常胃黏膜组织，同时低分化胃癌组织中1，25-二羟维生素D3的表达水平低于高分化胃癌组织，由此推测1，25-二羟维生素D3的表达下降导致体内钙代谢紊乱，从而抑制了肿瘤细胞的分化。

TGF-β/Smads信号通路在肿瘤发生的开始阶段具有抑制细胞生长的功能，而在进展期则起着促进肿瘤浸润转移的作用，此信号通路中任何一个环节出现异常都可导致信号转导的紊乱，从而导致肿瘤的发生与发展[7]。Smads 蛋白是 TGF-β信号通路中的重要成员，是将 TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内的关键因素。已有文献[8]报道，TGF-β1在胃癌组织中呈高表达，并能增强癌细胞的侵袭力和恶性程度。该研究发现，胃癌组织中TGF-β1和Smad2表达水平均高于正常胃黏膜组织，低、未分化胃癌组织中TGF-β1和Smad2的表达水平高于高、中分化胃癌组织，与文献[7]报道一致。

作者还观察到，胃癌组织中1，25-二羟维生素D3与TGF-β1、Smad2的表达呈负相关，TGF-β1与Smad2的表达呈正相关；1，25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2的表达水平与胃癌的分化程度、临床分期、浸润深度及淋巴结转移有关；提示1，25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2参与了胃癌的分化、浸润及转移。有研究[9-10]报道，1，25-二羟维生素D3可以抑制TGF-β1的表达及其生物活性。由此推测，1，25-二羟维生素D3表达下调，通过调控TGF-β/Smads信号通路使TGF-β1及Smad2表达升高，3者共同参与了胃癌的发生发展。

综上所述，1，25-二羟维生素D3可能通过调控TGF-β/Smads信号通路参与胃癌的发生发展，这为胃癌的治疗提供了新思路。

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