刹毒草合剂中黄芪甲苷的含量测定研究

叶挺梅李庆利王英秀王智威卢舜飞

1.丽水学院，浙江 丽水 323000；2.浙江省丽水市安福生物科技有限公司，浙江 丽水 323000

刹毒草合剂中黄芪甲苷的含量测定研究

叶挺梅1*李庆利2王英秀2王智威2卢舜飞1

1.丽水学院，浙江 丽水 323000；2.浙江省丽水市安福生物科技有限公司，浙江 丽水 323000

目的：建立测定刹毒草合剂中黄芪甲苷的高效液相色谱方法。方法：采用Diamonsil（钻石）C18（250×4.6mm，5（m）色谱柱；流动相为乙腈－水（33∶67）；流速：1.0ml／min；柱温：35℃；漂移管温度为105℃，气体流速为2.7L／min。结果：黄芪甲苷在1.04～5.2μg范围内线性关系良好，平均回收率为101.4%，RSD为1.24%（n＝6）。结论：该方法操作快速，结果准确，可作为刹毒草合剂的质量控制方法之一。

刹毒草合剂；黄芪甲苷；高效液相色谱；含量测定

刹毒草合剂［1］具有清热解毒、养气补血、增强免疫功能等功效，能提高HIV感染者机体免疫功能和改善临床症状的作用。目前，还没有该合剂有效成分的含量测定研究报道。本文研究了刹毒草合剂中黄芪甲苷的含量方法，有利于保证刹毒草合剂临床应用的有效性。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 美国Agilent1200高效液相色谱仪（G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1316A柱温箱，Agilent化学工作站）；美国Alltech 2000蒸发光散射检测器；天津市分析仪器厂XWK－III无油无音空气泵。

1.2 试剂 乙腈（色谱纯，Dima公司），甲醇（色谱纯，Dima公司），正丁醇 （分析纯，北京试剂公司），水为超纯水。对照品：黄芪甲苷 （C41H68O14）由中国药品生物制品检定所提供，（批号110781－200613）样品来源：由丽水市安福生物科技有限公司提供，批号090611；090612；090613）

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件［2］Diamonsil（钻石）C18（250×4.6mm，5（m）色谱柱；流动相：乙腈－水 （33∶67）；流速：1.0m l／min；柱温：35℃；漂移管温度为105℃，气体流速为2.7L／min；理论板数按黄芪甲苷计应不低于7000。

2.2 供试品的制备方法 精密量取刹毒草口服液 （批号：090611）20m l*3份，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次50m l，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，弃去氨试液，取正丁醇层80℃水浴蒸干。以甲醇复溶、稀释至5ml量瓶中，过0.45um微孔滤膜，即得。

2.3 线性关系考察 取干燥至恒重的黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1m l含0.208mg的溶液。精密吸取5、10、15、20、25μl，注入液相色谱仪中，测定峰面积，以对照品进样量的自然对数为横坐标，以对照品峰面积的自然对数为纵坐标，绘制标准曲线。其线性范围为1.04～5.2μg，回归方程为：Y＝1.507X＋6.40，r＝0.9998，说明该化合物在该范围内线性关系良好。

2.4 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液（批号090611）20μl，分别于制备后0、1、4、6、24小时依次进样，测得黄芪甲苷峰面积对数值的相对标准偏差RSD＝0.4576%。试验结果表明，供试品溶液在24小时内基本稳定。

2.5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液 （批号090611）20μl，在所确定的HPLC条件下，重复进样6次，求得黄芪甲苷峰面积对数值的相对标准偏差 RSD＝0.6113%，说明精密度良好。

2.6 重复性试验 取同一批样品（批号090611）按2.2项下方法制成6份供试品溶液，在所确定的HPLC条件下进行测定，结果相对标准偏差RSD＝0.7696%，说明方法重复性良好。

2.7 回收率试验 采用加样回收法，精密量取已知含量同一批号（批号090613，含黄芪甲苷0.04995mg／ml）的样品10 ml，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液0.52mg／ml各1ml，按供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定，结果见表1。

3 样品测定结果

根据上文中确定的样品制备方法和分析方法测定不同批次的刹毒草合剂中黄芪甲苷的含量，结果见表2。

表1 回收率试验

4 讨论

黄芪甲苷具有免疫调节、对器官保护、强心、降糖、抗细胞凋亡、抗抗病毒等多种作用［3］，是刹毒草合剂中的重要有效成分之一，本文建立的刹毒草合剂中黄芪甲苷的HPLC测定方法具有重复性良好、可操作性强的特性，有利于保证刹毒草合剂的临床应用的有效性。

表2 样品测定结果（n＝2）

［1］刘金英，洪学智，戴诗文.刹毒草口服液的药理作用研究 ［J］.中国药房，2008，（36）：2818－2819.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版一部）［S］.北京：中国医药科技出版社：283－284.

［3］吴发宝，陈希元.黄芪药理作用研究综述［J］.中药材，2004，27（3）：232－234.

Determ ination of Astragaloside in Shaducao M ixture by HPLC

Ye Tingmei1*，Li Qinli2，Wang Yingxiu2，Wang Zhiwei2，Lu Shunfei1
1.Lishui college，Lishui，323000；2 Lishui Company of Anfu Bio－technology，Lishui，323000

Objective：To establish an HPLCmethod for determination of Astragaloside in Shaducao Mixture.Method：The establish an HPLCmethod for determination of astragaloside in in Shaducao Mixture.Method：HPLC was carried out on the Diamonsil C18 column（250×4.6mm，5（m）with acetonitrile－water（33∶67）at35℃，the flow ratewas1.0ml／min；Drift tube temperature was 105℃，gas flow rate was 2.7L／min.Result：The calibration curveswas linear in the ranges of1.04～5.2μg.The average recovery was101.4%with RSD 1.24%（n＝6）.Conclusion：Themethod is rapid and simple，it can be used for quality control of Shaducao Mixture.

Shaducao Mixture；Astragaloside；HPLC；determination

R284.1

A

1007－8517（2013）11－0010－02

2013.04.19）

浙江省科技厅重大科技专项社会发展项目（2011C03002）。

叶挺梅，教授，从事中药及民族药研究；E－mail：ytmy＠eyou.com