抗痛风胶囊改善急性痛风性关节炎大鼠关节病理学变化

钟正霞, 于 泓,袁良东,杨亦彬，余丽梅,蒲 涛

(1.遵义医学院附属医院 肾病风湿科,贵州 遵义 563099，2.济宁医学院附属医院 肾内二科，山东 济宁 272029，3.遵义医学院附属医院 贵州省细胞工程重点实验室，贵州 遵义 563099)

抗痛风胶囊改善急性痛风性关节炎大鼠关节病理学变化

钟正霞1, 于 泓1,袁良东2,杨亦彬1，余丽梅3,蒲 涛1

(1.遵义医学院附属医院 肾病风湿科,贵州 遵义 563099，2.济宁医学院附属医院 肾内二科，山东 济宁 272029，3.遵义医学院附属医院 贵州省细胞工程重点实验室，贵州 遵义 563099)

目的探讨抗痛风胶囊对急性痛风性关节炎大鼠关节病理学变化的影响。方法采用尿酸钠混悬液关节腔内注射诱导大鼠急性痛风性关节炎模型，连续用药治疗5 d，肉眼观察大鼠足踝关节肿胀程度，HE染色观察踝关节软骨组织的病理变化。结果与模型组比较，抗痛风胶囊和阳性药对照组AGA大鼠于相应药物治疗后3～5 d，右足踝关节肿胀明显减轻。HE染色后显微镜下观察结果显示，与空白组比较，模型组大鼠踝关节软骨组织表面较不整齐, 基质染色不均，软骨细胞排列层次紊乱，细胞肿胀明显，有较多的炎细胞浸润，软骨下骨与髓腔也出现炎细胞浸润，充血明显。抗痛风胶囊低剂量和高剂量组、阳性药物组均明显改善关节软骨组织的充血、水肿和炎细胞浸润等病理变化。结论抗痛风胶囊可以明显减轻AGA大鼠关节肿胀程度，改善软骨组织的病理性变化。

抗痛风胶囊 ；急性痛风性关节炎；关节

痛风是一种嘌呤代谢紊乱所致的疾病，尿酸钠结晶沉着于关节及其周围结缔组织引起病损及炎症反应，导致反复发作的急、慢性关节炎和软组织损伤，初发部位侵犯第一跖趾及拇趾关节多见，受累关节常于夜间出现红、肿、热、痛，急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis AGA)反复发作可发展为多关节受累，并可从急性期关节局部肿胀发展为慢性期的局部骨质缺损、关节畸形及功能障碍, 已成为严重危害人类健康的疾病。AGA目前的治疗主要是采用抗炎药物糖皮质激素、秋水仙碱等治疗为主，对于关节组织的炎症损伤尚无特异性治疗药物[1]。

抗痛风胶囊是按黔北地区民间用于痛风治疗的中药组方精制而成，动物实验表明，该药对尿酸钠诱导大鼠AGA具有明显缓解关节肿胀及其步态的治疗作用，并可显著降低血液和关节液中TNF-α水平等作用[2]。本实验主要观察抗痛风胶囊对AGA大鼠踝关节病理学变化的影响，为急性痛风性关节炎的治疗提供实验和理论依据。

1 材料与方法

1.1 动物 取健康的雄性SD大鼠50只，体重均为240～250 g，鼠龄3～4月龄，由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供。SPF(合格证号 SEXK(渝)2007-00050，试验前适应性饲养5d，室温20～25 ℃，相对湿度40%～70%，每日光照12 h，自由饮水。

1.2 药品 抗痛风胶囊是遵义医学院附属医院肾内科提供，含生药干粉0.5g/粒，秋水仙碱为西双版纳药业有限责任公司生产，每片含秋水仙碱0.5 mg(批号081203)，均以蒸馏水配制成混悬液，4 ℃储存备用。

1.3 试剂与仪器 取结晶性尿酸钠250 mg(Sigma公司，批号100982303)加入0.9%氯化钠注射溶液45 mL，再加5mL吐温80，加热搅拌而配制成50 mL尿酸钠溶液，配制尿酸钠注射悬液。主要仪器：AEL 200电子天平(日本岛津)和1 mL注射器。

1.4 AGA大鼠模型制备[3]SD大鼠称重、编号，随机分空白组、模型组、阳性药对照组、抗痛风胶囊低剂量和高剂量组，每组5只，空白组踝关节腔内注射等体积生理盐水，其余4组大鼠均用10%水合氯醛0.3 mL/100 g腹腔注射麻醉，仰卧位固定，以大鼠右踝关节外侧后方为穿刺部位，将右踝关节弯曲，局部消毒并穿刺，向关节腔内注入0.2 mL尿酸钠混悬溶液，诱导痛风模型。同时，空白组、模型组灌胃给予等体积蒸馏水，阳性药物组给予秋水仙碱0.8 mg/kg，根据临床用药剂量换算，给予抗痛风胶囊 0.3 g/kg和1.2 g/kg，于上午9时分别灌胃给药1次，连续5 d。

1.5 病理学检查 给予药物治疗1～5 d内，肉眼观察大鼠右足踝关节的肿胀程度，在第5天灌胃给药2 h后处死大鼠，取其关节软骨组织，放入无水酒精中固定，脱钙、脱水、石蜡包埋、切片(3 μm厚)，脱蜡、水化、HE染色、透明、固定后，光镜下观察病理变化。

2 结果

2.1 大鼠足踝关节肿胀情况 实验过程中可见，大鼠右足踝关节腔内注射尿酸钠混悬液后，关节随即出现肿胀(见图1)。与空白对照组比较，关节腔内注射尿酸钠混悬液1 d至3 d各组大鼠右足踝关节明显肿胀；与模型组比较，抗痛风胶囊和阳性药对照组AGA大鼠于相应药物治疗后3～5 d，右足踝关节肿胀明显减轻。

图1 尿酸钠注射大鼠关节肿胀度

2.2 关节软骨组织病理检查 肉眼观察可见，模型组滑膜充血、表面有炎细胞及纤维素附着，软骨表面可见灶状糜烂。显微镜下可见，空白组软骨面完整，细胞排列整齐，基质染色均匀；模型组见软骨表面不完整，软骨细胞排列层次紊乱，细胞肿胀明显，基质染色不均，伴有炎细胞浸润。与模型组比较，抗痛风胶囊组与秋水仙碱组软骨表面相对完整，软骨细胞排列层次较整齐，基质染色基本均匀，与空白组相似，表层和中层可见较多软骨细胞，基本接近空白组软骨组织结构(见图2)。

注:A:空白组(×100，×200);B:模型组(×100，×200)C:阳性药组(×100，×200);D:抗痛风胶囊低剂量组(×100，×200)。 图2 抗痛风胶囊对AGA大鼠关节软骨组织病理变化的影响(HE染色)

3 讨论

急性痛风性关节炎是由于尿酸盐在关节滑膜或软骨的沉积，主要侵犯关节的滑膜、关节软骨和皮下组织。在发病机制中, 体液的pH 值和关节局部温度降低、高尿酸血症以及原沉积在结缔组织部位的结晶脱落,使大量的尿酸盐结晶进入关节腔，关节腔内的尿酸盐结晶被白细胞吞噬后, 溶酶体等细胞器被破坏, 释放出激肽、组胺、趋化因子等物质, 而引起局部血管扩张和渗透性增加、白细胞集聚等引起非特异性的炎症反应。近来，随着生活方式与饮食结构的改变，高尿酸血症和痛风发病率呈明显上升趋势，已逐渐发展成为仅次于糖尿病的第二大代谢性疾病，严重威胁人类健康[4-5]。

中医理论学认为，急性痛风性关节炎其病因病机多与热邪、湿热之邪痹阻关节、经络相关[6]。抗痛风胶囊是以桃仁、苡仁、乌梢蛇、红花、黑芝麻、桂圆、木瓜、枸杞等多种野生动植物为原料组成，在黔北地区民间用于痛风治疗。现代药理学表明，乌梢蛇具有镇静、镇痛、抗惊、抗炎的药理作用。研究证明，给予佐剂型关节炎大鼠灌服乌梢蛇体富含的乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白，可以明显抑制滑膜细胞炎症因子的水平和活性[7]，枸杞对特异性免疫、非特异性免疫功能也具有调节作用，同时木瓜可以明显减轻大鼠继发性关节炎的症状和特征，改善滑膜细胞异常超微结构，降低关节的肿胀度，减轻炎症反应。

本实验发现将尿酸钠晶体注入大鼠右足踝关节腔后，大鼠右足踝关节出现明显肿胀，且大鼠出现一定程度的行走困难和步态改变，组织病理学检查进一步证实关节面的轻度损害和软骨细胞肿胀，表明制备AGA模型成功。与空白组比较，模型组AGA大鼠右足踝关节肿胀明显，且HE染色后的组织病理学检查也进一步证实，关节软骨组织出现了明显的炎症反应，即表现为软骨表面不完整，软骨细胞排列层次紊乱，肿胀明显，并有炎细胞浸润，基质染色不均匀，骨髓腔也出现炎细胞浸润和充血。与模型组比较，抗痛风胶囊高、低剂量与秋水仙碱组均明显改善软骨组织炎症反应，软骨表面较完整，光滑，软骨细胞排列较整齐，基质染色基本均匀，与空白组软骨组织结构相似，表明抗痛风胶囊能明显改善AGA大鼠急性痛风性关节组织的病理学改变，较好的减轻了软骨组织的炎症反应。

[1] 王晨，叶任高，刘厚钰，等.内科学[M].第6版.北京：人民卫生出版社，2003：867-868.

[2]袁良东.抗痛风胶囊对痛风性关节炎的治疗作用及机制[D].遵义医学院硕士论文，2011：22.

[3]陈文照，林坚，金策，等.痛风宁对尿酸钠致大鼠关节炎下丘脑单胺类神经递质的影响[J].中国中医骨伤科杂志，2001,9(1)：18.

[4]张昱.痛风[M].北京:科学技术文献出版社,2006:120-2122.

[5]薛耀明,李晨钟.痛风的诊断与治疗[M].第2版.北京:人民军医出版社,2006:231-2235.

[6]李红，朱晓平，符文彬，等．临床路径在非针灸专业本科生针临床带教中的应用研究[J]．广西中医学院学报，2007,10(3)：143-144.

[7]庞捷,李娟,吴湘慧，等.乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白对大鼠佐剂型关节炎滑膜细胞因子的作用[J].中药材，2009,32(4)：556-560.

[收稿2012-10-28;修回2013-02-17]

(编辑：谭秀荣)

Anti-goutcapsuleimprovesthepathologicalchangesinjointofacutegoutyarthritisrats

Zhongzhengxia1,Yuhong1,Yuanliangdong2,Yangyibin1,Yulimei3,Putao1

(1.Department of Nephritic Medicine, The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University,Guizhou Zunyi 563099,China; 2.Department of Nephritic Medicine,The Affiliated Hospital of Jining Medical University, Shandong Jining 272029, China;3.Key Laboratory of Cell Engineering of Guizhou Province, The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Guizhou Zunyi 563099,China)

ObjectiveTo explore the effects of anti-gout capsule on pathological changes in articular cartilage tissues of acute gouty arthritis (AGA) rats.MethodsFifty male SD rates were randomly divided into the control, model, positive control (cochicine) and anti-gout capsule (low dose and high dose) groups with 10 rats in each group. AGA model was established by the injection of sodium urate into the joint cavity. Rats in the positive control (cochicine) and anti-gout capsule (low dose and high dose) groups were fed by gavage with cochicine (0.8 mg/kg) and anti-gout capsule (0.3 and 1.2 g/kg) once a day for 5 days. Rats were sacrificed 2 h after the last intragastric administration. Rat ankle joint swelling was observed by the naked eyes and the pathological changes of rat articular cartilage were analyzed by hematoxylin-eosin (HE) staining.ResultsCompared with the model group, AGA rat ankle joint swelling in positive control and anti-gout capsule groups was significantly attenuated. HE staining assay showed that compared with the control group, the irregular surface of rat ankle joint cartilage, the uneven dyeing of matrix, the disarrangement of cartilage cells, obvious cell edema and a large number of inflammatory cells infiltration were presented in rat cartilage and marrow chamber of model group, which was significantly attenuated by cochinice and anti-gout capsule (low dose and high dose) treatement.ConclusionThe anti-gout capsule could relieve the cartilage damage in AGA rats.

anti-gout capsule; acute gouty arthritis; joint

R589.7

A

1000-2715(2013)02-0105-03

遵义医院附属医院资助课题(NO：201009)。

于泓，男，副主任医师，硕士生导师，研究方向：风湿肾病研究，E-mail:yyyhong6567@yahoo.com。