HPLC测定酚麻美敏片中对乙酰氨基酚的含量

江苏省泰州市食品药品检验所（225300）黄小琴

江苏苏中药业集团股份有限公司（225500）马继梅

酚麻美敏片是由对乙酰氨基酚、盐酸伪麻黄碱、氢溴酸右美沙芬、马来酸氯苯那敏组成的复方制剂，临床适用于缓解由感冒或流感引起的发热、头痛、咽痛、肌肉酸痛、鼻塞流涕、打喷嚏、咳嗽等症状。酚麻美敏片质量标准中，对乙酰氨基酚的含量采用紫外-可见分光光度法测定，该法专属性差，灵敏度低。本文建立的高效液相色谱法可以准确、高效地测定对乙酰氨基酚的含量。

附图 HPLC图

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters 2695型高效液相色谱仪，包括Waters 2695泵、2996检测器、Empower色谱工作站；Mettler AG-135十万分之一电子天平。

1.2 试药 对乙酰氨基酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100018-200408，含量为100%）；酚麻美敏片（上海强生制药有限公司，批号：111123832、120107514、111110814）；甲醇（色谱纯，Fisher），水（Milli-Q超纯水），冰醋酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Wters SunFire C18柱（4.6mm×250mm，5µm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（35∶65∶1.5）；流速：1mL/min；检测波长：257nm；柱温：35℃；进样量：20µL。在此色谱条件下，理论板数按对乙酰氨基酚计不低于1000[1]。

附表1 回收率测定结果（n＝9）

附表2 样品含量测定结果

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取对乙酰氨基酚对照品130.26mg，置20mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得对乙酰氨基酚对照品储备液。精密量取对照品储备液2mL置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 精密称取样品适量（约相当于对乙酰氨基酚65mg），置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取续滤液，得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液制备 按处方比例和制剂工艺制备不含对乙酰氨基酚成分的阴性样品，按供试品溶液制备的方法制备，得阴性对照溶液。以上溶液各进样20µL，注入液相色谱仪，测定，结果在对乙酰氨基酚吸收峰处，阴性对照溶液无吸收，对测定结果无干扰，见附图。

2.3 线性关系考察 分别精密吸取对照品储备液（6.5130mg/mL）1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，分别得0.6513mg/mL、1.3026mg/mL、1.9539mg/mL、2.6052mg/mL、3.2565mg/mL的溶液。依次进样20µL，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值（y）为纵坐标，对照品量（x）为横坐标，进行线性回归分析，回归方程：y＝650.0720x－0.0880，r＝1.0000（n＝5）。结果表明，对乙酰氨基酚在0.6513～3.2565mg/mL范围内，与峰面积呈良好线性关系。

2.4 精密度试验 精密吸取浓度为1.3026mg/mL对照品溶液20µL，重复进样6次，按上述色谱条件测定。对乙酰氨基酚RSD为0.52%（n＝6）。

2.5 重复性试验 精密称取同一批号的供试品（111123832）6份，按供试品溶液制备方法制备，得浓度约为1.3mg/mL的供试品溶液。分别精密吸取以上溶液各20µL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，对乙酰氨基酚RSD为0.38%（n＝6）。

2.6 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液20µL，按上述色谱条件，分别在0，3，6，9，12，24h进行测定，记录峰面积，结果乙酰氨基酚RSD为0.42%（n＝6），表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7 加样回收率试验 取同一批次（111123832）已知含量的供试品9份，按大约样品含量的80%、100%、120%分别精密加入对乙酰氨基酚对照品溶液适量，按供试品溶液制备方法制得加样回收率溶液9份，按上述色谱条件测定，由测得量与加入量计算回收率（见附表1），表明该方法回收率良好。

2.8 检测限和定量限 按峰高为噪音的3倍计算，对乙酰氨基酚最低检测浓度为0.010mg/L。按峰高为噪音的10倍计算，对乙酰氨基酚最低定量浓度为0.027mg/L。

2.9 样品含量测定 取3批样品按供试品溶液制备方法制备供试液，按上述色谱条件测定，计算对乙酰氨基酚的含量，并与紫外-可见分光光度法结果比较，见附表2。

3 讨论

3.1 笔者利用Waters 2996检测器对供试品溶液和对照品溶液在200～400nm进行3D图谱扫描，结果对乙酰氨基酚均在257nm的波长处有最大吸收，因此选择257nm为测定波长。

3.2 酚麻美敏片临床应用广泛。采用HPLC法对酚麻美敏片中对乙酰氨基酚进行定量，可提升检验效率，且与原检验方法比较，可避免辅料干扰，提高准确性。

3.3 实验结果显示，HPLC法测定含量，样品预处理简单，阴性对照无干扰，灵敏度高，重现性好，专属性强，更适用于对乙酰氨基酚含量控制。