加压提取三七总皂苷及其含量测定

吴丽霞，梁翠霞，廖乐乐，吴铁松

(1.深圳市龙华新区观澜人民医院药剂科;2.深圳流花医院药剂科，广东深圳 518002)

三七 (Radix Notoginsen)又名田七，属古热带残遗植物，是我国珍贵的特产中药，主产于云南、广西等地。三七入药历史悠久，具有散瘀止血、消肿定痛之功效。三七中总皂苷是三七主要药理活性成分［1］，现代医药研究表明三七总皂苷具有调血脂、降压、增加心脑血流量、抗肝纤维化、保护心肌、抗心律失常、抗休克、抗血栓、改善微循环等多方面的药理活性。加压提取是一项新的提取技术，近年应用于中药领域。在中药有效成分的提取过程中，施加一定的压力，可使溶剂在高于沸点时仍保持液体状态，改善溶剂的溶解性，同时，使药材的细胞壁破裂增多，有效成分的溶出速率加快，药材有效成分的提取率明显增加［2］。许多研究结果表明［3－4］，加压提取技术适用用于大部分中药材，是具有广泛发展前途的中药有效成分提取新工艺。本文采用香草醛－高氯酸比色法测定三七总皂苷含量，以三七总皂苷得率为指标设计正交试验，确定其加压提取法的最佳工艺参数。

1 材料与仪器

1.1 药材 三七块根，购自广州市医药公司。

1.2 试剂 三七皂苷Rg1标准品由中国药品生物制品检定所提供，批号:1246－9705;香草醛、冰醋酸、高氯酸、乙醇、甲醇等均为分析纯。

1.3 仪器 电子天平 (赛多利斯，型号:KY－GSA124S);紫外可见分光光度计 (北京普析通用，型号:TU－1800);旋转蒸发仪 (上海亚荣，型号:RE－3000);高速离心机(江苏省金坛市环宇科学仪器厂，型号:YXJ－2);数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司，型号:KQ－2200DB);高压磁力搅拌反应釜 (烟台科立化工设备有限公司，型号:PCF－1)。

2 方法与结果

2.1 三七总皂苷测定

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取2.48 mg对照品三七皂苷Rg1，倒入25 mL量瓶中，加甲醇液至刻度，充分溶解即得对照品溶液 (每mL含对照品三七皂苷0.099 2 mg)。

2.1.2 供试品溶液的制备 精密称取24.8 mg精制三七总皂苷样品，倒入25 mL容量瓶中，加甲醇液至刻度，充分溶解即得即得供试品溶液 (每mL含样品0.992 mg)。

2.1.3 检测波长的确定 吸取标准液，按2.1.4项方法显色，以紫外分光光度计扫描 (800 nm～200 nm)，最大吸收波长 (即检测波长)为560 nm。

2.1.4 标准曲线的制备 分别精密吸取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，倒入10 mL试管，挥干溶剂后加入0.2 mL 5%香草醛—冰醋酸溶液。取0.8 mL高氯酸水浴加热 (水浴温度60℃)，20 min后立即取出放入冷水中冷却，加入5.0 mL冰醋酸，摇匀。相应试剂随行空白对照，波长560 nm处测定吸收度A，以三七皂苷Rg1含量(mg)为横坐标，吸收度为纵坐标，求回归方程为:Y=5.270X+0.0511，r=0.999 5。结果表明三七皂苷Rg1在0.024 25～0.121 25 mg之间有良好线性关系。

2.2.1 回流法 称取三七干燥粗粉20 g，加50%乙醇 (料液比1∶10)回流提取，共2次，1小时/次，合并2次滤液，浓缩，定容至500 mL备用。

2.2.2 渗漉法 称取三七干燥粗粉20 g，加50%的乙醇(料液比1∶10)润湿1 h后装柱，继续浸泡12 h后调整滤速为10 mL/min过滤，浓缩滤液，定容至500 mL备用。

2.2.3 超声波提取法 称取三七干燥粗粉20 g，加50%乙醇 (料液比1∶10)超声提取，共2次，30分钟/次，合并滤液，浓缩，定容至500 mL备用。

2.2.4 加压提取法 称取三七干燥粗粉20 g，置加压提取器中，加50%乙醇 (料液比1∶10)，于60℃、4.5 kg/cm2压力下密封加压浸提1 h，浓缩，定容至500 mL备用。

4种提取法提取的三七总皂苷含量分别为:醇回流法7.45%、渗滤法7.89%、超声波提取法7.92%、加压提取法8.02%。加压提取法所得含量最高，醇回流法最低。渗漉法和超声波提取法所得含量与加压提取法相当，但渗漉法周期长，消耗溶剂多，超声波法不宜用于工业化生产，经综合比较后，确定加压提取法作为三七总皂苷提取法。

2.3 正交试验 根据预试验，固定压力为4.5 kg/cm2，粒径为40目，选取乙醇浓度 (A)、固液比 (B)、提取时间(C)、提取温度 (D)为影响因素，每个因素设定3个水平，以三七总皂苷提取得率为指标，按照L9(34)正交表进行试验，因素、水平见表1。

表1 L9(34)正交因素水平表

极差分析结果显示，影响三七总皂苷提取率的主次因素依次是D提取温度、B料液比、C提取时间、A乙醇浓度，最佳组合为A2B2C3D2，即最佳提取条件为:提取液为70%乙醇，料液比为1∶10，提取时间为60 min，温度为60℃。见表2。

2.4 验证实验 按优选方案安排实验，验证3批，三七总皂苷的提取率分别为9.14%、9.07%、9.18%，均高于正交试验的提取率。

表2 L9(34)提取工艺条件正交试验结果

3 讨 论

皂苷是极性较强的含糖基化合物，易溶于极性溶剂，化学性质不稳定，在酶、酸性条件下易水解。目前，提取三七中皂苷成分的方法有水煎煮法、醇回流法、大孔吸附树脂法、微波提取法、超声提取法、超临界萃取等［5］。上述方法虽然技术较为成熟，但存在一定的缺点:水煎煮法、醇回流法存在流程长、提取率低的缺点，而且有机溶剂用量大，后处理困难，污染环境;超声、微波提取法虽省时省力，但目前处于实验室研究阶段，不适宜较大规模的工业化生产。

加压提取一项新兴的提取技术，具有提取时间短、溶剂消耗少、提取效率高等优点，已广泛应用于中药材提取、药物分析、食品、环境等领域。本研究以不同提取方法提取三七总皂苷，结果加压提取法提取的三七总皂苷含量最高，经过综合比较分析后，确定高压提取法提取三七总皂苷优于渗滤法、醇回流法、超声波提取法。正交实验结果表明，三七总皂苷高压高压提取的最佳工艺为:浸提压力为4.5 kg/cm2，粒径为40目，提取液为70%乙醇，料液比为1∶10，提取时间为60 min，温度为60℃。

香草醛—高氯酸比色法，测定三七总皂苷含量，方法简便，污染少，但该法显色受温度、时间等环境因素影响较大［6］。测定时，应注意控制加热温度和加热时间。当温度高于60℃长时间加热，糖类吸收干扰显著。总皂苷测定以60℃加热15 min为宜。三七总皂苷显色在1 h内稳定，故显色后需在1 h内测定。

［1］甘雨，徐惠波，孙晓波.三七总皂苷的药理作用研究进展［J］.时珍国医国药，2007，18(5):1251－1252.

［2］李鹏，李绍平，付超美，等.加压溶剂提取技术在中药质量控制中的应用 ［J］.中国中药杂志，2004，29(8):723－726.

［3］Anekpankul T，Goto M，Sasaki M.Extraction ofanti－cancer damnacanthal from roots of Morinda citrifolia by subcritical water［J］.Separation and Purification Technology，2007，55:343－349.

［4］杨薇薇，张永忠，李成刚，等.加压提取红三叶草总异黄酮的研究 ［J］.中草药，2009，40(9):1406－1407.

［5］黄凤，向飞军，伍杰雄.三七叶皂苷成分及其单体提取分离研究进展 ［J］.中药材，2009，32(6):999－1005.

［6］谢茵，邢桂琴，刘秀芬.三七提取液中三七总皂苷的分离纯化工艺研究［J］.山西医科大学学报，2006，37(6):613－615.