三种因素对痰培养结果的影响

时金艳，逄 宇，孟尔旺，潘端伟△

（1.江苏省连云港市第四人民医院 222000；2.中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心，北京 102206）

我国是世界上结核病负担最重的国家之一，据估算我国现有活动性肺结核患者500万，其中涂阳肺结核患者150万，每年新发肺结核患者约100万［1－2］。因此，结核患者的早期发现和诊断对于我国结核病防治工作具有重要作用。目前，痰涂片是我国使用最为广泛的结核病诊断技术［3］，然而，由于该方法的检测灵敏度较低，因此仅作为筛查患者的方法；传统罗氏培养被认为是实验室诊断活动性肺结核的金标准［4］，与涂片相比，培养灵敏度有显著的提高，因而在临床诊断中发挥重要的作用。然而，在临床工作中，许多因素都可能影响罗氏培养的结果，本研究本院临床收集的611份痰标本，分别分析痰标本储存时间，阳性级别，患者用药情况等因素对痰培养结果的影响，从而为临床痰培养工作提供一定的参考。

1 材料和方法

1.1 标本收集及储藏 2010年1～10月，本院收集的611份涂阳肺结核患者痰标本，在收集标本同时获得患者的抗结核治疗状况。未进行培养的标本保存于4℃冰箱。

1.2 方法

1.2.1 痰涂片及阳性级别 实验室采用萋－尼氏染色法，结果报告标准参照《中国结核病防治规划实施工作指南》执行。

1.2.2 实验室痰培养 实验室采用中性离心法［5］进行痰培养，每份患者标本培养两管。以无菌吸取前处理液0.1mL，接种于2支中性罗氏培养基斜面上。将培养管斜面水平置于37℃培养24h后，直立置于37℃培养继续培养。接种后第3天和第7天观察培养情况，而后每周观察并记录培养结果，如在培养后第8周培养基上无菌落生长则报告培养阴性。其中，涂阳培阴率＝培养阴性的标本例数／（培养阳性的标本例数＋培养阴性的标本例数），污染率＝污染的培养管数／总培养管数。

1.3 统计学方法 采用 Microsoft Office 2003进行数据录入，SPSS11.0进行数据统计分析，统计方法采用χ2检验。

2 结 果

2.1 不同因素对痰培养涂阳培阴率的影响 如表1所示，611份痰标本的涂阳培阴率为20.5%，当按照标本的阳性级别对标本进行统计时，611份标本中包括23份实际条数，176份1＋标本，182份2＋标本，123份3＋标本和107份4＋标本。随着阳性级别的提高，痰标本的涂阳培阴率逐渐减小，从33.3%降至11.3%。选取涂阳培阴率最低的4＋的标本的涂阳培阴率作为基准，其余阳性级别的结果分别和4＋进行比较后，本文发现阳性级别为实际条数（χ2＝6.68，P＝0.017）、1＋（χ2＝10.04，P＝0.001）和2＋（χ2＝5.54，P＝0.025）的痰标本的涂阳培阴率显著高于4＋的标本，而3＋（χ2＝0.703，P＝0.408）的标本涂阳培阴率与4＋差异无统计学意义。

表1 痰标本的阳性级别对涂阳培阴率的影响

除了标本的阳性级别，笔者还按照标本来源患者的抗结核治疗的情况进行分析，结果如表2所示。在611份标本中，有410份来自于初治患者，201份来自于复治患者，初治患者和复治患者的涂阳培阴率分别为17.2%和27.1%，与初治患者相比，复治患者的涂阳培阴率显著提高（χ2＝7.95，P＝0.007）。

表2 病例抗结核治疗状况对涂阳培阴率的影响

在标本储存时间对涂阳培阴率的影响方面，笔者将标本的储藏时间分为三个区间：分别为小于3d，3～7d（含7d）和大于7d，在三个区间的标本分别包括499份、87份和25份标本，其对应的涂阳培阴率分别为16.2%，40.2%和45.5%。与小于或等于3d的标本的涂阳培阴率相比，3～7d（χ2＝24.78，P＝0.000）和大于7d（χ2＝12.52，P＝0.002）标本的涂阳培阴率都有极显著的提高，差异有统计意义（表3）。

表3 痰标本的储存时间对涂阳培阴率的影响

2.2 不同因素对痰培养污染率的影响 本研究共完成了1 222管培养，其中培养结果为污染的73管，培养为非污染的1149管，污染率为6.0%。当按照阳性级别进行统计时，如表4所示，对阳性级别为实际条数、1＋、2＋、3＋、4＋的标本分别完成了46管、352管、364管、246管、214管培养，其中上述标本污染管数分别为4管、21管、25管、15管和8管，各阳性级别的污染率分别为8.7%、6.0%、6.7%、6.1%和3.7%。与4＋的污染率相比，实际条数（χ2＝2.11，P＝0.234），1＋（χ2＝1.36，P＝0.326），2＋（χ2＝2.45，P＝0.139），3＋（χ2＝1.34，P＝0.288）的污染率均与4＋相比差异无统计学意义。

表4 痰标本的阳性级别对污染率的影响

在完成的培养的1 222管培养中，有820管来源于初治患者，其余402管来自于复治患者，初治患者和复治患者的痰标本中培养的污染率各有51管和22管，污染率分别为6.2%和5.5%。分析初治患者和复治患者痰培养的污染情况时，差异无统计学意义（χ2＝0.27，P＝0.700）（表5）。

表5 病例的抗结核治疗状况对污染率的影响

如表6所示，标本储存的不同时间后，包括小于或等于3 d、3～7d和大于7d，进行培养的管数分别为998管、174管、50管，各组污染管数分别为52管、20管、7管。当统计污染率时，小于或等于3d标本的污染率为5.2%，3～7d的污染率为11.5%和大于7d的污染率为14.0%。选择小于或等于3d的标本为标准，其余两组分别于其进行统计，发现3～7d（χ2＝10.15，P＝0.003）和大于7d（χ2＝6.92，P＝0.018）的标本比小于或等于3d的标本进行培养的污染率有显著的提高，有统计学意义。

表6 痰标本的储存时间对污染率的影响

3 讨 论

结核分枝杆菌罗氏培养由于其灵敏度较高，因此被认为是实验室诊断的金标准，但是由于该方法需要使用强碱性溶液对标本进行消化，且操作步骤比较繁琐，因此，诸多因素对于培养的结果存在影响，其中标本的质量对于培养具有重要影响。

在本研究中，本文分析了不同因素对痰培养涂阳培阴率影响后，发现痰标本的阳性级别、患者的初复治情况以及标本的储藏时间对涂阳培阴率均有显著性影响。其中，标本的阳性级别越高，涂阳培阴率越低，且统计差异越显著。上述结果可能是由于结核分枝杆菌罗氏培养采用高浓度的NaOH处理痰标本以达到消化痰液并去杂菌的作用，但是强碱性对结核分枝杆菌也有一定的破坏性，因此，随着痰标本的阳性级别降低，涂阳培阴率提高。复治患者被认为是曾经或者正在使用抗结核药物，本研究中复治患者标本的涂阳培阴率显著高于初治患者，推测可能是由于抗结核药物对结核分枝杆菌的杀伤作用，导致复治患者中的活菌的数目减少，而初治患者由于未服用抗结核药物，因此痰标本中活菌比例较高，因此标本的涂阳培阴率在初治患者中显著高于复治患者。此外，标本的储藏时间较长使得标本中的活菌数目以及结核杆菌的活力下降，进而使痰培养的涂阳培阴率降低，该结果与Paramasivan等报道的结果类似［6］。

在污染率方面，本研究发现标本的储藏时间对培养污染率有显著性影响，而标本的阳性级别以及患者的初复治情况对培养污染率没有影响。结核分枝杆菌属于慢生长分枝杆菌，它的繁殖和代谢过程都较慢，体外培养周期较长（4周左右）。在标本的储藏过程中，相比于结核分枝杆菌，其他微生物的繁殖速度显著快于结核分枝杆菌，因此标本中的其他病原微生物以及在标本收集过程中污染的其他微生物所占比例不断提高，而结核分枝杆菌所占比例不断降低，上述状况在培养结果中反映为污染率显著提高。

涂阳培阴率和污染率被认为是实验室中室内质控的一个重要标准，然而诸多因素均会影响培养结果，本研究第一次阐述了基层地市级结核病专科医院开展痰菌培养以及影响痰菌培养的因素，通过本研究发现标本的储藏时间对于涂阳培阴率以及污染率的影响最为显著，因此，建议实验室在收集到标本3d内应该开展传统培养；后续研究将围绕针对阳性级别较低以及复治患者的标本的前处理方法的改进展开，以保证痰菌培养获得理想的结果。

［1］ 刘剑君，姜世闻，成诗明.中国结核病控制现状分析及对策［J］.中国防痨杂志，2003，25（3）：129-131.

［2］ 陈海强，罗凯.207例痰标本涂片检查对培养结果分析［J］.检验医学与临床，2011，8（6）：741-742.

［3］ 葛伦传.肺结核的防治新进展［J］.临床肺科杂志，2004，9：659-660.

［4］胡忠义.结核分枝杆菌耐药性快速测定方法及其评价［J］.中华结核和呼吸杂志，2003，26（2）：107.

［5］ 卫生部疾病预防控制局，卫生部医政司，中国疾控预防控制中心.中国结核病防治规划实施工作指南［S］.北京：中国协和医科大学，2009：12-13.

［6］ Paramasivan CN，Narayana A，Prabhakar R，et al.Effect of storage of sputum specimens at room temperature on smear and culture results［J］.Tubercle，1983，64（2）：119-124.