RAMP200荧光免疫分析仪临床应用评价

戴 燕，万海英

（同济大学附属同济医院检验科，上海 200065）

B型利钠肽（BNP）作为急性冠状动脉综合征或心力衰竭患者在进行病情估计、疗效监测、预后判断和危险性分类方面有其独特的临床价值，为临床提供快速、准确的结果，有利于早期诊断进而使患者及时得到有效治疗［1－3］。RAMP200荧光免疫分析仪定量检测BNP 20min内即可报告结果，可作为快速床旁检验（POCT）在急诊检验室、心脏病监护室使用，以减少标本转运和处理时间。为了证实该检测系统的分析性能是否能满足临床实验室的要求，作者根据医学实验室认可国际标准ISO15189《医学实验室质量和能力的专用要求》和《医疗机构临床实验室管理办法》的要求，并参考有关文献［4－7］，对其检测性能进行了验证和评价，报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 取自同济医院门诊、住院患者样本和20份体检样本，均为经乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝的静脉血。

1.2 仪器与试剂 RAMP200荧光免疫分析仪及BNP测定配套试剂、伯乐质控品。

1.3 方法 试验前做好仪器维护及校准，检测期间做好室内质控，所有操作均严格按照仪器和试剂说明书进行。

1.3.1 精密度验证实验 根据EP15-A2文件要求，取2个浓度水平的血浆样本平均分为5份，冷冻保存，每份样本每天批内重复测定4次，连续5d，记录检测结果。计算批内不精密度和总不精密度，并与厂商声明的不精密度进行比较。

1.3.2 功能灵敏度（FS）验证实验 用生理盐水稀释低浓度样本至接近检测下限的系列浓度样品，每个浓度的样品作天间重复测定，连续10d。根据临床和实验室标准化协会（CLSI）EP6-A文件的要求以天间重复变异系数（CV%）为20%或最接近20%时对应的检测限样品具有的平均浓度为检测系统可定量报告分析物的FS。

1.3.3 分析测量范围（AMR）验证实验 根据CLSI EP6-A文件的要求，收集经EDTA抗凝的血浆标本，浓度接近厂家提供的检测低限（L）和高限（H）。按5H，4H＋1L，3H＋2L，2H＋3L，H＋4L，5L的比例关系配置系列浓度，各浓度标本上机重复测定2次，计算线性回归方程，统计相关系数（r）＞0.975。

1.3.4 临床可报告范围（CRR）验证实验 收集经EDTA抗凝浓度接近厂家提供的检测高限的血浆标本，同时选取健康体检者的新鲜血浆作为低值稀释液、BNP专用稀释液、生理盐水与高值标本分别进行1∶1，1∶2，1∶3，1∶4稀释，各稀释标本上机重复检测2次取均值，根据预期值和实测均值计算稀释回收率，回收率在80%～120%为合格，确定最大稀释度，结合功能灵敏度、分析测量范围和最大稀释度确定临床可报告范围。稀释回收率%＝（实测均值∕预期值）×100。

1.3.5 孔间偏差验证实验 取低、中、高3个浓度EDTA抗凝的血浆标本，放入仪器分析孔中测试，每个浓度检测2次，取均值计算各个孔之间的偏差，偏差小于20%（厂商提供的偏差范围）为合格。

1.3.6 参考区间验证实验 根据CLSI C28-A2文件的要求，选取表面健康、无心脏疾病的体检患者血浆标本20例，年龄20～70岁，其中男、女各10例。对结果进行统计，≥90%的检测结果在厂商提供的参考区间范围内为合格，否则进行参考区间确立实验。

1.4 统计学方法 所有数据在Excel 2003软件上完成统计处理。

2 结 果

2.1 精密度验证结果 RAMP200荧光免疫分析仪BNP测定不精密度小于厂商声明的不精密度低于10%的要求，见表1。

表1 不同浓度水平批内、总不精密度结果

2.2 功能灵敏度验证结果 天间重复测定最接近20%时对应的检测限样品浓度为10.58pg／mL，见表2。

表2 功能灵敏度检测结果

2.3 分析测量范围验证结果 选取临床血浆浓度为10.2pg／mL及1 805pg／mL的标本各一份，按一定比例稀释检测后得到线性回归方程Y＝0.998 6 X－33.264，r＝0.998 3，b＝0.998 6，显示其在10.2～1 805pg／mL范围内呈良好的线性关系，见图1。

图1 RAMP200荧光免疫分析仪BNP测定线性曲线

2.4 临床可报告范围 BNP浓度为1 805pg／mL高值标本使用生理盐水和低值血浆稀释其最大稀释度为1∶3；用稀释液稀释其最大稀释度为1∶2。结合FS值，使用生理盐水和低值血浆作为稀释液，其CRR上限为1 805×3＝5 415，故本检测系统的CRR为10.58～5 415pg／mL，见表3。

表3 3种不同稀释液稀释回收率测定结果

2.5 孔间偏差 A、B、C、D 4个孔之间不同浓度检测结果最大偏差为14.27%，符合厂商小于20%的要求，见表4。

表4 不同检测孔之间检测结果偏差

2.6 参考区间验证结果 20例健康人标本的血浆BNP值为15～86pg／mL，均在厂商提供的参考区间范围内。

3 讨 论

BNP是含有特异性环状结构的32肽，其生理作用主要是利尿利钠，血管舒张，拮抗肾素－血管紧张素－醛固酮系统与抗利尿激素的分泌。当室壁张力升高，循环容量增加时BNP会相应增高，对左心室功能障碍或急性心肌梗死（AMI）的病死率及心力衰竭的程度有独特的预报价值［1］。

目前，利用发光免疫检测BNP技术已在临床广泛使用，但由于需使用大型仪器，试剂昂贵，而无法作为POCT在急诊检验室、心脏病监护室使用。本文所评价的RAMP200荧光免疫分析仪是我国自主研发的检测系统，体积小易于携带，20min内即可报告结果，是POCT理想的仪器。该检测系统采用免疫荧光法原理，当样品中的BNP与附着荧光颗粒的抗体结合，形成荧光标记的免疫复合体，通过仪器自动识别样品区和质控区带上免疫复合体发射的荧光强度的不同而检测到BNP的含量。

作者对该仪器进行了全面的性能评估，结果显示：BNP浓度在80.4pg／mL和1 169.6pg／mL时，总不精密度为4.9%和4.02%（表1），与仪器说明书的精密度性能一致，达到国际公认的质量要求（总不精密度小于6%）［8］；检测系统的AMR为10.2～1 805pg／mL，上限低于仪器说明书规定的范围（2 000pg／mL），可能与标本的制备有关；20例健康人的血浆BNP值为15～86pg／mL，均在仪器说明书的参考区间（＜100 pg／mL）内，按照CLSI C28-A的要求可直接使用仪器说明书提供的参考区间；孔间最大偏差为14.27%，符合厂商小于20%的要求。此外，本研究还建立了该检测系统测定BNP的FS为10.58pg／mL；CRR实验结果表明，本检测系统的最大稀释度为1∶3，其CRR为10.58～5 415pg／mL。

综上所述，本研究对RAMP200荧光免疫分析仪定量检测BNP的主要分析性能的验证结果与厂商说明的分析性能一致，基本能满足临床检验的要求。

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