血清肌酸激酶活性检测的分析测量范围建立与评价

潘锡龙

（广东省中山市第三人民医院检验科 528451）

血清肌酸激酶（CK）活性与精神病发病期的阳性症状及病情关系密切且平行，特别在发病期会异常升高；在协助精神疾病诊断、疗效监测和预后判断中有重要作用［1－3］。现结合临床和实验室标准化协会（CLSI）EP6-A 文件要求及相关文献［4－6］，针对其活性检测分析测量范围的建立展开相关试验与分析讨论。

1 材料与方法

1.1 标本准备 收集足够量来自中山市第三人民医院就诊患者高值CK血清混合标本，要求超过厂家提供的线性范围，离心后取上清液作为高值标本（H）；以同样方法收集CK尽可能低的低值标本（L）；要求标本新鲜、无黄疸、无脂浊和无溶血。

1.2 仪器与试剂 日立7020全自动生化分析仪；上海科华公司生产的CK试剂（批号20120112）；英国朗道的质控品（批号714UN、608UE）；eppendorf精度移液枪。

1.3 方法

1.3.1 一系列试验标本配制 将标本 H和L按9L，8L＋1H，7L＋2H，6L＋3H，5L＋4H，4L＋5H，3L＋6H，2L＋7H，1L＋8H，9H的配比关系进行配制，得到10个试验标本（S1～S10）。

1.3.2 试验标本检测 使用7020生化仪配合科华试剂对10个试验标本进行检测，每个标本重复测定2次。7020生化仪经过校准并且质控在控，记录检测结果。各种操作应严格执行相应操作规程，要求在当天内完成检测。

1.4 统计学方法 对试验所得数据应用SPSS19.0统计软件进行多项回归分析。设定本实验室重复性和线性允许误差分别为3%和5%。

2 结 果

2.1 一系列试验标本检测结果，见表1。

表1 10个不同浓度试验标本检测结果（U／L）

i＝S1，S2，…S10，Ri1为第i个试验标本测量结果1与测量均值的百分比，Ri2为第i个试验标本测量结果2与测量均值的百分比，L为试验标本总数，2为重复测定2次。计算得误差CVr＝1.784%，小于3%的设定目标，不精密度符合要求，可直接用于多项回归分析。

2.2 下面将对表1数据进行多项式回归分析，结果见表2。

表2 多项式线性回归分析结果

在表2中，二次回归多项式非线性系数b2（t＝－0.097，P＝0.926＞0.05）不具显著性，三次回归多项式b2（t＝3.080，P＝0.022＜0.05）与b3（t＝－3.156，P＝0.020＜0.05）均具显著性，且有较小的回归标准误，所以，最适多项式为三次。

2.3 线性偏倚分析 从表2可知，一次多项式为Y＝396.255 X＋1.955，三次多项式为Y＝－0.492 X3＋6.584 X2＋374.079 X＋13.687。三次多项式与一次多项式预期值及线性偏离结果见表3。

表3 三次多项式与一次多项式预期值及线性偏离结果

由表3可见，第一个浓度点大大超过实验室设定的5%允许偏差，因而判断CK在13.5～3 554.0U／L呈非线性，且其引入的误差不能被接受。故必须进行修正重新分析。

2.4 多项式回归修正 以加入H相对量为X轴，标本实测均值为Y轴绘制散点图，见图1。从图1可以看出，最后一个浓度点可能存在较大偏差，试图去掉此点后，重新作多项式回归修正分析，结果见表4。从表4可知，二次回归多项式非线性系数b2（t＝1.213，P＝0.271＞0.05）和三次回归多项式b2（t＝1.974，P＝0.105＞0.05）、b3（t＝－1.753，P＝0.140＞0.05）均不具显著性。一次多项式b1（t＝273.253，P＝0.000＜0.05）具显著性，可直接判断为线性，其一次多项式为Y＝397.442 X－1.211。

图1 H相对加入量与实测均值散点图

表4 多项式回归修正分析结果

3 讨 论

分析测量范围是反映实验方法学性能的重要指标之一。在日常检测过程中标本真实浓度只有在分析测量范围内才能保证其检测结果的可靠性，否则，可能会导致分析结果的假性偏高或偏低。故分析测量范围的建立有助于获得准确可靠的检测结果。分析测量范围的评价主要有平均斜率法、EP6-A方法和CAP-IRC方法，但相对最好的为 EP6-A方法［7］。为了尽量避免由于基质效应带来的影响，试验使用了低值混合血清（L）作为稀释介质［7］。

应用科华试剂在日立7020生化仪上检测CK有理想的精密度，得到误差CVr＝1.784%，小于3%的设定目标，可直接用于对精密度要求较高的多项式回归分析。从表2和图1可以看出，三次多项式非线性系数b2、b3与0之间的差异性显著（P＜0.05），存在非线性关系；且有最小的回归标准误，故，最适多项式为三次。接着进行线性偏倚分析，即每个试验样本浓度处线性偏倚与设定误差的比较。如果偏倚小于设定误差说明非线性只是在统计学上的结论，但在临床工作中是可以接受的，否则就不可接受。经分析发现第一个浓度点处的偏倚为86.90%大于设定的5%，并由图1观察到可能由于最后一个浓度点存在较大偏差引起。故去掉该浓度点重新分析，得到二次和三次多项式非线性系数与0之间差异无统计学意义（P＞0.05），直接判断为线性，最适模型为一次多项式Y＝397.442 X－1.211，其检测在13.5～3 178.5U／L范围内呈线性，比试剂说明书规定的（0～2 000U／L）要宽得多。也包含CK参考范围25～200U／L在内。故可确定13.5～3 178.5 U／L为其分析测量范围。由表4中一次多项或b0（t＝－0.175，P＞0.05）与0的差异无统计学意义，说明截距只是由统计引入的，而实际的曲线通过原点。

通过本次研究可知，应用科华试剂配合日立7020生化仪检测CK可得到比较理想的分析测量范围，能够满足大部分精神临床常规检测。对高于3 178.5U／L的标本应使用低值或灭活血清进行稀释，使得稀释后浓度在13.5～3 178.5U／L内，然后重测，以保证检测结果的可靠性。

［1］ 沈广虎，魏明竟.精神疾病患者血清肌酸激酶表现［J］.国际检验医学杂志，2010，31（7）：697-698.

［2］ 王琦，王晓俭.精神患者血清酶测定临床价值［J］.齐鲁医学杂志，2010，25（6）：526-527.

［3］ 李均，王艳娉，罗敏，等.精神疾病血清肌酸激酶活性研究［J］.中国医学创新，2010，7（19）：3-4.

［4］ 陈斌鸿，罗恒，李炜煊，等.奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪检测尿素氮临床可报告范围的建立与评价［J］.实验与检验医学，2011，29（2）：117-120.

［5］ 张秀明，温冬梅，王伟佳，等.电化学发光免疫法检测NT－proBNP的分析性能评价［J］.中华检验医学杂志，2011，34（12）：1152-1157.

［6］ 杨有业，张秀明.临床检验方法学评价［M］.北京：人民卫生出版社，2008：168-192.

［7］ 刘成忠，肖传宇，候文华，等.不同稀释液对高值血清肌酸激酶稀释测定的影响［J］.实用医学杂志，2009，25（14）：2361-2362.