三参四黄胶囊质量标准研究

鲁 伟，叶桂存，费毅琴

(1.黄冈职业技术学院医药卫生学院，湖北黄冈438002;2.湖北省食品药品监督检验研究院，湖北武汉430064)

三参四黄胶囊由太子参、丹参、黄芪、红花等中药组成。具有益气养血、活血化瘀的功效，用于治疗以多尿、多饮、多食、消瘦为主要表现的糖尿病。方中的红花和丹参均具有活血通经、散瘀止痛的作用，是处方中的君药。为控制和提高该药品质量，笔者以红花为对照品，用薄层色谱法进行定性鉴别;以丹参中所含丹酚酸B为对照品，用高效液相色谱法进行定量分析。

1 仪器与试药

Agilent1100 Series高相液相色谱仪、MS204S/Z、AG135电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)、LC-350A型超声液中药处理机(济宁市中区鲁超仪器厂)。红花(中国食品药品检定研究院，批号为120907-200609)、丹酚酸B(中国食品药品检定研究院，批号为111562-201009，供含量测定用，冷藏保存，含量以96.0%计);三参四黄胶囊样 品 (批 号 分 别 为 20110608、20110609、20110610);甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱 ［1，2，3］

分别取批号 20110608、20110609、20110610的三参四黄胶囊内容物各10g，80%丙酮溶液5ml，依法超声处理15分钟，提取液滤过，滤液作(样品)供试液②、④、⑤。另取对照药材红花粗粉0.5g，同法提取，滤液作(对照)供试液③;再取缺红花的其他中药混合粉末10g，同法提取，滤液作(阴性对照)供试液①。依照中国药典2010年版一部附录VIB项下薄层色谱法试验。

分别吸取上述供试液10μl，点于硅胶薄层板(105℃活化0.5h)上，用乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7:2:2:0.4)作展开剂，自然光定位。色谱结果见图1。

图1 薄层色谱

2.2 丹酚酸 B 的含量测定 ［4，5，6，7〛］

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:COSMOSIL C18-MS-II柱(250×4.6mm，5μm);流动相:甲醇-乙腈-甲酸-水(30:9:1:60)。

检测波长:286nm;柱温:30℃;进样量:10μL;理论板数:按丹酚酸B计算应不低于4000。

测定结果见图2。

图2 高效液相色谱

2.2.2 溶液制备

精密称取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得丹酚酸B对照品溶液A。另取三参四黄胶囊内容物，研细，取约0.2g，精密称定，置25ml量瓶中，加75%甲醇约20ml，密塞，超声处理(功率300W，频率50kHz)30分钟，放冷，加75%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，得样品溶液B。再取缺丹参其他组分粉末，按三参四黄胶囊样品溶液同法制得阴性对照液C。

2.2.3 方法学考察

专属性试验 取阴性对照溶液10μL，注入液相色谱仪测定。结果见图2。

线性关系考察 精密称取丹酚酸B对照品9.97mg，置50ml容量瓶中，加75%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。自上述对照品贮备液中精密量取2ml置10ml容量瓶中，用75%甲醇稀释至刻度。分别吸取上述溶液3μl、5μl、10μl、15μl、20μl，注入液相色谱仪，记录各色谱峰峰面积，以丹酚酸B峰面积均值为纵坐标、进样量为横坐标，绘制标准曲线。得线性回归方程:Y=1219.3X+8.565，r=0.9999(n=5)。表明丹酚酸B在0.1149～0.7657μg之间呈良好的线性关系。

精密度试验精密吸取同一对照品溶液，重复进样5次(每次10μL)，测定峰面积。结果RSD为0.25%。

重复性试验按拟定的含量测定方法，取同一样品(批号为20110608)6份，分别按供试品溶液制备方法制备，测定其丹酚酸B的含量。结果平均含量为0.94 mg·粒-1，RSD为1.45%。

稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、5、8、10、14h时进样测定丹酚酸B的峰面积。结果平均峰面积为316.3，RSD为0.88%。结果表明供试品溶液在14h内稳定性良好。

加样回收试验精密称取已知含量的样品(批号为20110608)6份，分别精密加入一定量丹酚酸B对照品溶液，按供试品溶液制备方法处理、含量测定项下方法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 丹酚酸B回收率试验结果(n=6)

2.2.4 样品含量测定

取样品3批，依法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。测得批号为 20110608、20110609、20110610的3批样品中丹酚酸B含量为别为 0.94、0.90、0.95 mg·粒-1。

3 讨论

提取条件的选择 参考2010年版《中国药典》一部丹参项下丹酚酸B的含量测定，选择75%甲醇为提取溶剂。取批号为20110608的样品，考察超声和回流两种提取方式，结果差异不大，因此选择较简便的超声提取方式。取批号为20110608的样品的供试品2份，对超声时间作考察，结果表明:超声提取30分钟即可提取完全。

本实验所采用的方法稳定，专属性强，重现性好，可用于三参四黄胶囊的质量控制，作为该制剂质量标准制定参考。

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