痔疮止血丸质量标准研究

汝秋明，韩润淑

(1.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；2.永吉县食品药品监督管理局，吉林 永吉 132000)

痔疮止血丸质量标准研究

汝秋明1*，韩润淑2

(1.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；2.永吉县食品药品监督管理局，吉林 永吉 132000)

目的：建立痔疮止血丸的质量标准。方法：采用TLC鉴别处方中的地榆、陈皮和荆芥。用HPLC测定槐花中芦丁的含量。用DiamonsilTM(钻石)C18色谱柱，流动相为乙腈-1%冰醋酸溶液(20∶80)，流速为1 mL·min-1，检测波长为257 nm，柱温为30 ℃。结果：TLC鉴别色谱特征斑点明显。芦丁进样量在0.130 9～1.9741 μg与峰面积呈良好的线性关系。平均回收率为99.8%，RSD=0.9%(n=6)。结论：所建立的TLC和HPLC方法专属性强，重复性好，可用于痔疮止血丸的质量控制。

痔疮止血丸；TLC；HPLC；地榆；陈皮；荆芥

痔疮止血丸收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第十册，由槐花、荆芥、陈皮、地榆等6味中药组成的复方制剂，具有清热解毒，渗湿利尿功效，用于肾盂肾炎和急慢性尿路感染治疗。原质量标准中只有定性鉴别项目，我们通过研究，在痔疮止血丸质量标准中增加了荆芥、陈皮、地榆的TLC鉴别和槐花的含量测定项，为该制剂的质量控制提供了可靠的方法。

1 仪器与试药

日本岛津LC-2010C高效相色谱仪；日本岛津UV-2201紫外-可见分光光度计；ZF-I紫外光灯。预制硅胶G薄层板、预制硅胶GF254薄层板、预制硅胶H薄层板(薄层层析用，青岛海洋化工集团)。

没食子酸对照品、橙皮苷对照品及荆芥对照药材、芦丁对照品(批号：100080-200306，供含量测定用)，均购自中国食品药品检定研究院。痔疮止血丸(吉林长源药业有限公司，批号：20070201，20050501，20061001)。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 地榆的鉴别 取本品60粒，剪碎，加硅藻土3 g研匀，加水50 mL，煮沸30 min，放冷，离心，取上清液，用盐酸饱和的乙醚15 mL振摇提取，分取乙醚层，挥干，加甲醇约1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例及生产工艺制备缺地榆阴性样品，并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(6∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液[1-3]。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰，见图1。

1.没食子酸对照品；2～4.样品；5.阴性对照品图1 地榆薄层色谱图

2.1.2 陈皮的鉴别 取本品剪碎，称取3 g，加硅藻土2 g研匀，加50%甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液浓缩至约1 mL，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。按处方比例及生产工艺制备缺陈皮阴性样品，并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液[4-7]，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照无干扰，见图2。

1.橙皮苷对照品；2～4.样品；5.阴性对照品图2 陈皮薄层色谱图

2.1.3 荆芥的鉴别 取本品剪碎，称取1 g，加硅藻土0.7 g，加石油醚(60～90 ℃)20 mL，密塞，时时振摇，放置过夜，滤过，滤液浓缩至约1 mL，作为供试品溶液。另取荆芥对照药材0.8 g，同法制成对照药材溶液。按处方比例及生产工艺制备缺荆芥阴性样品，并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛的5%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰，见图3。

1～3.样品；4.荆芥对照药材；5.阴性图3 荆芥薄层色谱图

2.2 槐花含量测定

2.2.1 色谱条件 采用迪马-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；柱温：30 ℃；流速：1 mL·min-1；流动相：乙腈-1%冰醋酸溶液(20∶80)；检测波长257 nm；进样量：10 μL；理论板数按芦丁峰计应不低于4 000[8]。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取120 ℃减压干燥至恒重的芦丁对照品适量，加甲醇制成每1 mL中含0.1 mg的溶液，即得，见图4。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品，剪碎，取适量，精密称定，精密加入等量的硅藻土，研匀，精密称取约1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，称定重量，放置过夜，超声处理(功率250 W，33 kHz)40 min，放冷，称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得，见图5。

2.2.4 阴性对照试验 按处方比例取相当于0.5 g中所含群药适量(不含槐花)，按工艺制备缺槐花阴性对照品，再按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，量取10 μL注入液相色谱仪，按上述方法测定，结果表明阴性对照的色谱图在芦丁相应的保留时间处无干扰峰，见图6。

2.2.5 线性关系考察 精密称取芦丁对照品20 mg，置200 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取1，3，5，7，9，11，13，15，17，19 μL分别注入液相色谱仪，以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程Y=1 797 716X+1.460，r=1.000，结果表明芦丁进样量在0.130 9～1.974 1 μg与峰面积呈良好的线性关系。

图4 芦丁对照品HPLC图

图5 痔疮止血丸供试品HPLC图

图6 阴性对照品HPLC图

2.2.6 精密度试验 取同一对照品溶液，照上述色谱条件，连续进样6次，每次10 μL，记录峰面积，结果RSD=0.6%。

2.2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别在0，4，8，12，24 h进样，记录峰面积，结果RSD=0.8%，表明24 h内供试品溶液中芦丁的含量基本稳定。

2.2.8 重现性试验 取本品(批号：20070201)，照2.2.3方法制备6份样品测定，计算含量，结果平均含量为9.790 mg·g-1，RSD=1.2%。

2.2.9 回收率试验 取本品(批号：20070201，含量为9.790 mg·g-1)，剪碎，取适量，精密称定，精密加入等量的硅藻土，研匀，精密称取约0.5 g，精密加入芦丁对照品溶液(0.103 9 mg·mL-1)25 mL，70%甲醇25 mL，照上述方法测定，计算回收率，结果见表1。

2.2.10 样品含量测定 按上述方法测定3批样品(20070201，20050501，20061001)含量，结果芦丁含量分别为9.790，6.308，4.494 mg·g-1。

表1 芦丁对照品回收率试验

3 讨论

3.1 展开剂的选择

地榆鉴别试验参考《中国药典》2010年版一部“地榆”项下【鉴别】(2)的方法[9]，由于原展开剂Rf值小，将用水饱和的甲苯改为甲苯，Rf适中。

3.2 测定波长的选择

取芦丁对照品的70%甲醇溶液，经UV-2201紫外-可见分光光度计在220～300 nm的波长范围内进行扫描，确定芦丁在257 nm波长处有最大吸收，故选择257 nm为本实验的测定波长。

3.3 流动相的选择

参照《中国药典》2010年版一部槐花药材含量测定项下的流动相，即甲醇-1%冰醋酸溶液(32∶68)[10]，但本品用此流动相分离效果不好，而改为乙腈-1%冰醋酸溶液(20∶80)。

3.4 提取方法的考察

供试品溶液分别超声30，40，60 min，计算芦丁含量分别为8.493，9.890，9.871 mg·g-1。说明超声40 min，基本能使样品提取完全，因此采用上述供试品溶液的制备方法。

3.5 方法评价

实验建立的TLC和HPLC方法专属性强，重复性好，可用于痔疮止血丸的质量控制。

[1] 曾聪彦，梅全喜，高玉桥，等.槐榆片的薄层鉴别[J].山西中医学院学报，2006，8(5)：46-47.

[2] 谭朝阳，谭智艳，罗怀浩，等.痔炎消胶囊质量标准研究[J].中国实验方剂学杂志，2009，15(4)：20-22.

[3] 陈哲妮，黄婉峰.地榆炭配方颗粒的质量控制研究[J].现代中药研究与实践，2012，26(2)：66-68.

[4] 王少妹，罗杰，何军，等.复方陈香胃片质量标准研究[J].中国现代中药，2007，9(1)：20-22.

[5] 金阳.健脾颗粒质量标准研究[J].中成药，2007，29(9)：1403-1405.

[6] 何建峰，刘红，余卫兵，等.小儿至宝丸中陈皮、人工牛黄及广藿香的薄层色谱鉴别[J].中国药业，2010，19(17)：34.

[7] 姜泽，李东飞，姚为民，等.补金片质量标准研究[J].中国现代中药，2011，13(4)：37-40.

[8] 翟旭峰，刘法锦，王怀豫，等.槐花配方颗粒质量标准研究[J].中成药，2004，27(12)：29-31.

[9] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：117.

[10] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：333.

QualityStandardofZhichuangZhixueWan

RU Qiu-ming1*，HAN Run-shu2

(1.JinlinProvicialInstituteforFoodandDrungControl，Changchun130033，China) (2.YongjiFoodandDrungofAdministration，Yongji132000，China)

Objective：To establish the quality standard of Zhichuang Zhixue Wan.Methods：Sanguisorbae Radix，Citri Reticulate Pericarpium and Schizonepetae Herba were identified by TLC.The content of rutin in Sophorae Flos was determined by HPLC.The Diamonsil C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)was used，the mobile phase was acetonitrile-0.1% glacial acetic acid(20∶80)，the flow rate was 1 mL·min-1and detection wavelength was 257 nm，column temperature 30 ℃.Results：The developed TLC spots were quite clear.The linear range of rutin was 0.130 9～1.974 1 μg，the average recovery was 99.8%，RSD=0.9%(n=6).Conclusion：The established TLC and HPLC methods are exclusive，reproducible and suitable for the quality control of Zhichuang Zhixue Wan.

Zhichuang Zhixue Wan；TLC；HPLC；Sanguisorbae Radix；Citri Reticulate Pericarpium；Schizonepetae Herba

2012-10-24)

*

汝秋明，E-mail：rqiuming@sina.cn