HPLC测定明目地黄丸(浓缩丸)中马钱苷的含量

梁云，贾忠，韩世龙

(1.甘肃省兰州市肺科医院 药剂科，甘肃 兰州 730046；2.兰州佛慈制药股份有限公司，甘肃 兰州 730046)

HPLC测定明目地黄丸(浓缩丸)中马钱苷的含量

梁云*，贾忠1，韩世龙2

(1.甘肃省兰州市肺科医院 药剂科，甘肃 兰州 730046；2.兰州佛慈制药股份有限公司，甘肃 兰州 730046)

目的：建立明目地黄丸(浓缩丸)中马钱苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为C18柱，流动相为四氢呋喃-乙腈-甲醇(1∶8∶4)-0.05%磷酸溶液(9∶91)，柱温为30 ℃，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为236 nm。结果:马钱苷平均回收率为98.18%，RSD=1.70%(n=6)。结论：该方法简便，准确，重现性好，可用于明目地黄丸(浓缩丸)质量控制。

明目地黄丸；马钱苷；高效液相色谱法；含量

明目地黄丸(浓缩丸)收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第九册，由山茱萸、牡丹皮、枸杞子、菊花、当归等组成，具有滋肾，养肝，明目功能，用于肝肾阴虚，目涩畏光，视物模糊，迎风流泪[1]。目前标准中尚无含量控制指标。山茱萸中药效成分马钱苷具有调节免疫、抗炎和抗休克等诸多药理作用[2-6]。基于马钱苷在复方制剂中作为指标成分的必要性，许多学者在马钱苷的提取和含量测定方面进行了大量研究[7-11]，本实验在相关研究的基础上采用高效液相色谱法测定明目地黄丸(浓缩丸)中马钱苷的含量，方法简便、准确、重现性好，为该制剂的质量控制提供了定量检测方法。

1 仪器与试药

岛津(SHIMADZU)LC-10AVP高效液相色谱仪(日本岛津)；CQ250超声清洗器(上海医疗器械厂)。

马钱苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111640-200401，供含量测定用)；明目地黄丸(浓缩丸)(兰州佛慈制药股份有限公司，批号：20050712，20050715，20050816)；乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：phenomenex®，desc：Luna 5 u C18100A C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)。流动相：四氢呋喃-乙腈-甲醇(1∶8∶4)-0.05%磷酸溶液(9∶91)；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：236 nm。理论塔板数按马钱苷峰计算应不低于4 000。色谱图见图1～3。

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液制备 取马钱苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含15 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品研细，取约1 g，精密称定，置于具塞三角瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 标准曲线的制备 取马钱苷对照品约10.1 mg，精密称定，用甲醇溶解并稀释至50 mL，摇匀，作为贮备液(0.202 mg·mL-1)。精密量取贮备液0.5，1.0，2.0，3.0，5.0 mL，分别置于25 mL量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件分别进样，测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，对照品量为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程为Y=1 145 962X-3 576.086(r=0.999 9)，线性范围：0.04～0.404 μg。

2.3.2 精密度试验 取马钱苷对照品溶液(21.0 μg·mL-1)，连续进样5次，其RSD=0.510%，本法的重复性较好，能满足定量分析要求。

2.3.3 重复性试验 按上述供试品溶液的制备方法及色谱条件，重复测定同一批明目地黄丸(浓缩丸)(批号：20050712)6次，其平均含量为0.674 3 mg·g-1，RSD=0.85%。

2.3.4 稳定性试验 取明目地黄丸(浓缩丸)(批号：20050712)，制备供试品溶液，分别于0.5，1.0，3.0，5.0，7.0，9.0 h分别进样测定，测定马钱苷峰面积，其RSD=0.59%，结果表明供试品溶液在9 h内稳定性良好。

2.3.5 加样回收试验 取明目地黄丸(浓缩丸)(批号：20050712)，(测定其马钱苷含量为0.676 5 mg·g-1)，精密称取0.5 g，共取6份，置量瓶中，分别精密加入马钱苷对照品溶液(浓度为0.012 5 mg·mL-1)25 mL，按含量测定方法中色谱条件进行测定，计算回收率。结果见表1。

表1 明目地黄丸中马钱苷回收率测定

注：马钱苷对照品加入量均为0.304 0 mg

2.3.6 专属性考察 按明目地黄丸(浓缩丸)制备工艺制备山茱萸阴性样品，按上述色谱条件进行检测，结果表明山茱萸阴性样品色谱图在与马钱苷峰相同保留时间处无杂质峰干扰。试验表明本测定方法具有较强的专属性。马钱苷对照品色谱图、供试品色谱图、山茱萸阴性色谱图分别见图1～3。

2.4 样品含量测定

取20050712，20050715，20050816 3批明目地黄丸(浓缩丸)，按上述方法测定，结果马钱苷含量分别为0.675 2，0.420 3，0.478 6 mg·g-1。

图1 马钱苷对照品HPLC图

图2 明目地黄丸样品HPLC图

图3 缺山茱萸阴性对照品HPLC图

3 讨论

实验对比了四氢呋喃-乙腈-甲醇(1∶8∶4)-0.05%磷酸溶液(13∶87)、四氢呋喃-乙腈-甲醇(1∶8∶4)-0.05%磷酸溶液(9∶91)、乙腈-水(15∶85)、甲醇-水(23∶77)4种流动相，结果表明以四氢呋喃-乙腈-甲醇(1∶8∶4)-0.05%磷酸溶液(9∶91)作为流动相时马钱苷峰与杂质峰的分离效果最佳，决定采用其作为测定方法的流动相。

在确定供试品溶液的提取方法时，我们选用超声和回流两种提取方法，并选择了不同提取时间，以马钱苷含量测定值为考察指标进行试验，结果表明超声处理与加热回流提取均可有效提取制剂中的马钱苷，但由于超声处理更易于操作，决定采用超声处理提取。

该方法稳定可靠，精密度高，操作简便，可用于明目地黄丸(浓缩丸)的质量控制。

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ContentDeterminationofLoganininMingmuDihuangPillsbyHPLC

LIANG Yun1*, JIA Zhong1, HAN Shi-long2

(1.PulmonaryHospitalofLanzhou,Lanzhou730046,China;2.LanzhouFociPharmaceuticalCo.,Ltd.,Lanzhou730046,China)

Objective：To establish a HPLC method for the content determination of loganin in Mingmu dihuang pills.Methods: Samples were determined by HPLC on the C18column. The column temperature was -30 ℃. The mobile phase was consisted of tetrahydrofuran-acetonitrile-methanol (1∶8∶4)-0.05% phosphoric acid (9∶91). The flow rate was 1.0 mL·min-1at UV detection wavelength of 236 nm.Results: The average recovery of loganin is 98.18% (RSD=1.70%,n=6).Conclusion: The method is specific, sensitive and reproducibility for quality control of Mingmu dihuang pills.

Mingmu dihuang pills; Loganin; HPLC; Content

2011-08-12)

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梁云，Tel:(0931)8361836，E-mail：lzlicaidong@163.com